人树突状细胞与K562细胞的融合以及体外诱导p210蛋白特异性CTL的研究(英文)

目的 :探讨人外周血单核细胞来源的树突状细胞 (Dendriticcells ,DC)与人白血病细胞K562融合后 ,能否诱导出 p210蛋白特异性的CTL ,为DC疫苗的临床应用提供理论基础。方法 :外周血来源的贴附单核细胞 ,在人GM CSF(1000U/ml)和IL 4(1000U/ml)作用下 ,培养5～7天后 ,与人白血病细胞K562进行融合 ,融合细胞再与自体的淋巴细胞共同孵育10～14天 ,采用乳酸脱氢酶释放试验分析其对 p210蛋白阳性细胞的杀伤效果。为显示融合效果 ,对照试验组K562细胞用绿色荧光蛋白 (GFP)进行标记。结果 :贴附的单核细胞在GM CSF和IL 4作用下 ,培养5天后 ,约有70 %的DC产生 ,流式细胞仪分析表明 ,这些细胞为HLA DR、HLA A ,B ,C以及CD1α阳性 ,并高表达共刺激分子CD80和CD86。DC与GFP标记的K562细胞融合24h后 ,表达GFP蛋白的细胞中约有60 %呈现出典型的DC形态特征。乳酸脱氢酶释放试验结果表明 ,融合细胞能激活淋巴细胞产生 p210蛋白特异性的CTL。结论 :树突状细胞与肿瘤细胞融合后 ,能诱导出肿瘤特异性的CTL ,显示出DC疫苗抗肿瘤作用的广泛前景。

重组腺病毒介导入野生型p53,GM-CSF和B7-1基因对肿瘤化疗耐药细胞生物学行为的影响

目的：探讨重组腺病毒分导入野生型ｐ５３，ＧＭ－ＣＳＦ和Ｂ７－１基因对肿瘤化疗耐药细胞生物学行为的影响，为临床使用该重组腺病毒治疗多药耐药的肿瘤提供实验基础。方法：选用ｐ５３异常的ＫＢ－ｓ（ＶＣＲ敏感）和ＫＢ－ｖ２００（ＶＣＲ耐药）细胞作为肿瘤化疗药物敏感和耐药的模式细胞，感染携带人野生型ｐ５３，ＧＭ－ＣＳＦ和Ｂ７－１基因的重组腺病毒后，观察这两种转基因癌细胞的生物学行为（包括药物敏感性）的变化。结果：药物敏感和耐药细胞都对腺病毒易感，重组腺病毒携带的三个外源基因（ｐ５３、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｂ７－１基因）在两种细胞中都能得到有效表达，并且能抑制它们的生长及诱导其凋亡。耐药细胞 ＫＢ－ｖ２００在转染该重组腺病毒 ４８ｈ后，其细胞膜上 Ｐｇｐ糖蛋白的泵出药物的功能却受到显著影响，表现为罗丹明１２３在其细胞内的积累增加。ＭＴＦ的实验结果也显示出其对ＶＣＲ药物敏感性的增加，裸鼠体内实验证实了感染上述重组腺病毒的ＫＢ－ｖ２００细胞的致瘤性降低，同时能增加对化疗药物ＶＣＲ的敏感性。结论：实验研究结果提示，使用该重组腺病毒并结合化疗药物，对临床治疗多药耐药的肿瘤可能会更有效。

自杀基因TK联合细胞因子FL真核表达载体的构建及其相关特性的研究

目的 探讨自杀基因TK(thymidinekinase ,胸苷激酶 )与细胞因子FL(Flt 3ligand ,Flt 3配体 )在同一细胞克隆中表达的特性 ,为肿瘤的基因治疗提供实验基础。方法 构建以IRES(内部核糖体进入位点 )相连的TK与FL的真核表达质粒 ,脂质体法转入人乳腺癌细胞株MCF 7中。MTT法检测GCV(Ganciclovir,更昔洛韦 )对MCF 7/TK FL细胞的杀伤活性 ,电镜、光镜及FACS法检测凋亡情况。ELISA法及Westernblot对该细胞克隆分泌的FL进行定量、定性分析并检测其对CD34+细胞的促增殖活性。结果 构建的pIRES TK FL真核表达质粒以脂质体法可成功转入MCF 7细胞中 ,MCF 7/TK FL细胞可被GCV有效杀伤并存在凋亡情况 ,IC50 值为 0 5 μg/ml。该细胞分泌的FL有蛋白水平的表达 ,ELISA法测定FL分泌量为每 4天 10 5个细胞中 15 7ng/ml,它具有刺激CD34+细胞增殖的活性。结论MCF 7/TK FL细胞可同时表达TK与FL基因 ,在自杀基因瘤苗的基础上 ,其分泌的细胞因子FL具有生物活性 。