Caspase抑制剂的若干药理学研究进展

细胞凋亡 (apoptosis)失衡与许多疾病密切相关 ,而半胱天冬氨酸蛋白酶 (caspase)是执行细胞凋亡的蛋白酶家族 ,在凋亡过程中发挥关键作用 ,它可通过多种途径发生级联激活。一些天然和合成的caspase抑制剂能够抑制caspase家族中的一种或几种成员而发挥抗凋亡作用 ,有望成为治疗细胞过度凋亡而引起的相关疾病的有效手段。

抑制Bax基因表达与细胞保护的研究进展

细胞凋亡是基因控制的细胞死亡 ,与多种生理和病理过程有关。Bax蛋白是细胞凋亡通路中的促凋亡成员 ,有 6种亚型 ,抑制其表达或功能可增强细胞的抗凋亡作用 ,有利于细胞的保护和存活。本文就近年来影响Bax蛋白的多种因素 ,Bax基因敲除后生物效应和以Bax

吡格列酮抑制大鼠心肌肥厚的实验研究

目的 :以体外实验和体内实验探讨噻唑烷二酮 (Thiazolidinedione ,TZD)类药物吡格列酮对大鼠心肌肥厚的影响。方法 :体外原代培养新生大鼠的心肌细胞 ,以血管紧张素Ⅱ刺激建立心肌肥大模型 ,分别给予不同浓度的吡格列酮处理。采用RT PCR法检测心肌肥大特征性基因心钠素 (ANP)和脑钠素 (BNP)mRNA的表达 ,并以3 H 亮氨酸掺入测定心肌细胞蛋白合成速率。体内实验中通过不完全结扎大鼠腹主动脉引起压力负荷增加 ,导致左心室肥厚。从术前 1周起用灌胃器经口给予吡格列酮 (2 0mg·kg-1·day-1)直至术后 4周。处死动物 ,计算心脏重 /体重比值 ,测量左心室壁厚度和心肌细胞的平均直径 ,RT PCR法测定心肌细胞中BNP及炎性细胞因子的mRNA表达。结果 :心肌细胞肥大模型出现后 ,心肌细胞的ANP和BNPmRNA的表达以及蛋白合成速率增加。经不同浓度的吡格列酮处理后 ,这些变化得以减轻 ,并呈一定的剂量依赖性。吡格列酮抑制左心室心肌白细胞介素 1β ,心调理素 1的mRNA表达 ,同时减轻压力负荷升高引起的大鼠心脏重 /体重比值、左心室壁厚度和心肌细胞平均直径的增加。结论 :吡格列酮在体外和体内实验研究中显示对大鼠心肌肥厚有保护作用 ,可能对防治以心肌肥厚为特征的心血管疾病有一定的应用前景。

多肽和蛋白质类药物分析方法和药物动力学的研究进展

目的：综述国外多肽和蛋白质类药物的分析方法和药物动力学研究状况。方法：查阅了近期国外有关文献２０余篇。结果与结论：目前用于药物动力学研究中的生物检定、放射性同位素标记及免疫学方法正在被不断地改进和完善；该类药物在体内分布、失活和消除及种属特异性方面有其特点。

Livin mRNA的反义核酸诱导MCF-7乳癌细胞凋亡作用(英文)

目的 :以livinmRNA为靶点设计反义硫代脱氧寡核苷酸 (PS ODNs) ,探讨其体外抗肿瘤效应及其机制。方法 :设计以livinmRNA为靶点的反义核酸并作用于MCF 7乳癌细胞 ,用MTT、RT PCR和流式细胞仪检测等方法对其进行评价研究。结果 :在设计的一些反义核酸中 ,YMZ0 5能够有效地抑制livin基因的表达 ,增加caspase 3的活性 ,诱导MCF 7细胞凋亡 ,明显抑制其生长 ,结论 :通过抑制livin基因的表达能够抑制MCF 7乳癌细胞生长、诱导其凋亡 ,livin可能会成为抗肿瘤的新靶点。

阿托伐他汀对体外心肌细胞肥大的抑制作用

目的探讨阿托伐他汀体外抑制心肌肥厚的药理作用。方法体外培养新生大鼠的心室肌细胞,用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥厚模型,以不同浓度的阿托伐他汀作用于心肌细胞,用软件分析测量心肌细胞表面积,3H-亮氨酸参入法检测心肌细胞蛋白合成速率及使用RT-PCR半定量测定心钠素(ANP),脑钠素(BNP)和特异分布于心脏的丝氨酸蛋白酶(Corin)的表达变化。结果AngⅡ可成功诱导体外培养的新生大鼠心室肌细胞肥大,表现为心肌细胞面积和3H-亮氨酸的参入增加,ANP、BNP、Corin表达升高等特征性改变,从而分析阿托伐他汀对心肌肥厚的作用。阿托伐他汀可逆转上述变化并呈剂量依赖性,而作为溶剂的DM-SO对肥大的心肌细胞差异无显著性。结论阿托伐他汀抑制AngⅡ介导的体外心肌细胞肥大,预示其具有降脂以外的其他重要药理作用。

非诺贝特和吡格列酮对心肌细胞肿瘤坏死因子-α表达的影响及机制初探

目的 观察过氧化体增殖物激活型受体(peroxisome proliferator-activated receptors,PPARs)激活剂——非诺贝特和吡格列酮对新生大鼠心肌细胞肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达水平的影响,探讨可能涉及的机制。方法 体外原代培养新生Wistar大鼠心肌细胞,分别给予不同浓度的非诺贝特(PPARα激活剂)或吡格列酮(PPARγ激活剂)刺激,并辅加脂多糖诱导TNF-α表达。采用半定量RT-PCR法检测TNF-αmNNA的表达,ELISA法检测TNF-α的蛋白水平。心肌细胞瞬时转染TNF-α启动子控制的报告基因载体,测定CAT相对活性以反映TNF-α基因的转录活性。结果 与对照组相比,非诺贝特组和吡格列酮组的TNF-αmRNA及蛋白表达水平均明显降低,且呈剂量依赖性。心肌细胞瞬时转染全长TNF-α启动子控制的报告基因质粒(-721/+17),非诺贝特或吡格列酮可降低脂多糖诱导的CAT相对活性,而转染核因子κB(NF-κB)结合位点缺失的TNF-α启动子控制的报告基因质粒(-182/+17),非诺贝特、吡格列酮或脂多糖刺激均未能改变心肌细胞的CAT相对活性。结论 非诺贝特和吡格列酮可显著抑制新生大鼠心肌细胞中脂多糖诱导的TNF-α表达,具有抗炎作用,其机制可能部分通过抑制NF-κ信息通路发挥作用。

重组人白细胞介素11对卡铂致猕猴血小板减少症的治疗作用

观察国产重组人白细胞介素 11(rhIL 11)对卡铂致猕猴血小板减少症的影响。成年猕猴每天静脉注射卡铂 (15mg/kg) ,连续 3天。第 3次注射卡铂后 18小时内开始皮下注射rhIL 11(每天为 5 0或 10 0 μg/kg) ,连续用药 14天。给药后定期检测外周血白细胞计数、网织血小板计数、血小板聚集功能和骨髓的集落形成和病理组织学变化等。结果发现 ,rhIL 11能明显提高注射卡铂猕猴的血小板计数最低值和缩短血小板计数少于 5 0 %药前值的持续时间 ,对白细胞和网织红细胞数的恢复也有一定程度的作用。给予rhIL 11后可见外周血网织血小板计数明显升高 ,但ADP诱导的血小板聚集功能无明显变化。rhIL 11组骨髓巨核系祖细胞和红系祖细胞集落形成增多 ,光镜下显示骨髓腔中粒系及红系细胞丰富和密集 ,巨核系细胞明显增多。上述结果表明 ,rhIL 11对卡铂致猕猴血小板减少症有明显的治疗作用 。

表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂在肿瘤治疗中的应用

表皮生长因子受体 (EGFR)酪氨酸激酶 ,是细胞外信号传递到细胞内的重要枢纽 ,它在信号传导、细胞增殖、分化以及各种调节机制中发挥重要作用 ,在多种癌细胞中过度表达。许多研究表明 ,抑制EGFR酪氨酸激酶活性 ,可抑制肿瘤生长。目前 ,已有几种EGFR酪氨酸激酶抑制剂进入了临床试验。本文对几种EGFR酪氨酸激酶小分子抑制剂在肿瘤治疗中的研究进展做一综述。

大鼠严重体表烫伤后心脏β－肾上腺素能受体腺苷酸环化酶系统的变化

大鼠背部３０％体表面积皮肤三度烫伤后３、６、１２、２４、４８ｈ，心肌ｃＡＭＰ含量分别减少１７．１％、２４．７％、３８．１％、３４．２％、２５．６％（Ｐ＜０．０５或０．０１）；心肌腺苷酸环化酶（ＡＣ）基础活性分别降低３２．７％、４２．３％、５７．７％、４６．２％、４０．４％（Ｐ＜０．０５或０．０１）；心肌磷酸二酯酶活性无明显变化；β－肾上腺素能受体（β－ＡＲ）密度明显降低（下调），但亲和力无明显变化。相关分析表明，ｃＡＭＰ含量的减少与ＡＣ活性降低呈显著正相关。实验还发现，烫伤后３、６ｈ，心肌膜ＡＣ基础活性及异丙肾上腺素（Ｉｓｏ）刺激活性均明显降低，而氟化钠（ＮａＦ）和法司可林（ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ，ＦＳＫ），刺激活性无明显变化，提示此时ＡＣ活性降低主要由β－ＡＲ下调所致。烫伤后１２、２４、４８ｈ．ＡＣ基础活性和Ｉｓｏ刺激活性降低更为明显，ＮａＦ刺激活性也显著降低，但ＦＳＫ刺激活性仍无变化，提示此时ＡＣ活性的降低与β－ＡＲ下调和Ｇ－蛋白偶联ＡＣ催化亚基的功能障碍有关。上述β－ＡＲ－ＡＣ系统功能的减低是体表烫伤后心功能障碍的重要机制之一。

孤儿G蛋白偶联受体及其作为新药靶点的重要意义

作为膜受体最大的一个家族,G蛋白偶联受体(GPCRs)参与了广泛的生理与病理过程,因而一直是新药发现及研究的最重要靶点。孤儿GPCRs(oGPCRs)是一类内源性配基未定、功能未知的GPCRs,作为创新药物的靶点具有重要的地位和意义。

束缚应激对心脏PPARα、PPARβ和M-CPT-ⅠmRNA表达的影响

目的观察束缚应激对雄性Wistar大鼠心肌过氧化体增殖物激活型受体α(PPARα)、PPARβ和肌型肉碱棕榈酰转移酶-I(M-CPT-I)mRNA表达的影响。方法健康雄性Wistar大鼠,采用束缚应激模型,实验组大鼠每天给予束缚应激2次,每次3h。按照有无应激和应激时间长短分为正常对照组(C)、束缚1w(R1)、束缚2w(R2)和束缚4w组(R4)。采用逆转录酶多聚酶链反应(RT-PCR)检测各组心肌PPARα、PPARβ和M-CPT-I的mRNA表达水平。结果束缚应激1、2、4w大鼠心肌PPARαmRNA和M-CPT-I mRNA水平较正常对照组明显升高(P<0.01或P<0.05);心肌PPARβmRNA水平较正常对照组变化不明显(P>0.05)。结论束缚应激上调心肌PPARα和M-CPT-I mRNA表达,对PPARβ无明显影响,PPARα可能促进束缚应激大鼠脂肪酸氧化增加。

束缚应激后大鼠心脏PPARβ、M-CPT-I及GLUT-4 mRNA的变化

目的:观察束缚应激后大鼠心肌PPARβ、M-CPT-I和GLUT-4的mRNA表达变化。方法:健康雄性Wister大鼠,分为正常对照组(C)、束缚1周组(R1)、束缚2周组(R2)和束缚4周组(R4)。心肌PPARβ、M-CPT-I和GLUT-4的mR-NA表达水平用RT-PCR方法检测。结果:与正常对照组大鼠相比,束缚应激1、2、4周大鼠心肌M-CPT-I mRNA水平明显升高(R2组P<0.05,其余P<0.01),GLUT-4 mRNA水平明显降低(P<0.01),PPARβ变化不明显。结论:束缚应激后可能存在大鼠心肌脂肪酸代谢的增加和葡萄糖代谢降低。PPARβ对束缚应激大鼠心肌能量代谢的影响较小。

过氧化体增殖物激活型受体β/δ激活剂抑制体外血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大

目的探讨过氧化体增殖物激活型受体β/δ激活剂GW0742在体外对血管紧张素Ⅱ诱导的肥大心肌细胞的作用,分析过氧化体增殖物激活型受体β/δ在其中的可能作用。方法体外培养新生大鼠的心室肌细胞,用血管紧张素Ⅱ诱导建立心肌肥厚模型,在模型中加入GW0742,用软件分析心肌细胞表面积观察心肌细胞面积,3H-亮氨酸的掺入检测心肌细胞蛋白合成速率及使用逆转录聚合酶链反应半定量测定心房钠尿肽、脑钠尿肽和过氧化体增殖物激活型受体β/δmRNA的表达变化,用免疫荧光方法测定过氧化体增殖物激活型受体β/δ的蛋白表达水平。结果血管紧张素Ⅱ可使体外培养的心肌细胞面积和3H-亮氨酸的掺入增加,升高心房钠尿肽和脑钠尿肽的表达,过氧化体增殖物激活型受体β/δ表达下降;GW0742可逆转上述变化。结论GW0742具有抑制血管紧张素Ⅱ诱导的体外心肌细胞肥大的作用,很可能通过活化过氧化体增殖物激活型受体β/δ途径。

《复方紫归》对小鼠SOD、MDA、LF含量的影响

本文通过对给予《复方紫归》两周后小鼠的全血超氧化物歧化酶(SOD)、血清丙二醛(MDA)及心肌中脂褐素(LF)三项指标的测定,结果表明腹腔注射4mg和8mg两组的SOD酶活力显著增高,MDA含量有不同程度的下降,其中8mg组下降显著;心肌LF也有明显下降。口服12mg和24mg两组的SOD的酶活力也有一定程度的增高但无统计学意义;MDA含量都有降低,以24mg组更显著;心肌LF含量下降明显。

阿托伐他汀对老年大鼠心肌PPARβ/δ mRNA和MMP-9 mRNA表达水平的影响

目的:观察老年大鼠心肌PPARβ/δmRNA和MMP-9 mRNA表达情况及阿托伐他汀的影响。方法:30只20月龄Wister鼠,分为老年对照、大剂量和小剂量阿托伐他汀组。10只3月龄大鼠为青年对照。用RT-PCR检测大鼠心肌PPARβ/δmRNA和MMP-9 mRNA表达水平。结果:①老年大鼠PPARβ/δmRNA表达水平较青年组显著降低(P<0.01),阿托伐他汀可显著上调其表达(P<0.01);②老年大鼠MMP-9 mRNA表达水平较青年组显著增高(P<0.01),阿托伐他汀显著抑制其表达(P<0.01);结论:阿托伐他汀显著抑制老年大鼠心肌MMP-9 mRNA的表达,PPARβ/δ可能参与了这一过程。

GPCR-Gα融合蛋白及其在oGPCRs配基筛选中的应用

GPCRGα融合蛋白是近几年用于受体研究的新颖手段之一,它的表达确保了受体与G蛋白之间1∶1的化学计量关系、空间位置上的邻近性及适宜于高通量的配基筛选,使其为孤儿G蛋白偶联受体提供了一种新的研究策略,将在孤儿受体的配基筛选中发挥重要作用,对研发以oGPCR为作用靶点的新药产生积极意义。

人孤儿受体GPR81分子克隆、组织分布及表达工程细胞株的建立

采用PCR技术分别从人全血基因组DNA及引产胚胎肾组织cDNA中扩增得到gpr81的全长cDNA序列(1041bp),运用生物信息学手段绘制该基因的分子进化树,显示该基因的氨基酸序列与烟酸受体同源性最高;然后,采用RT-PCR法分析该基因表达的组织分布,组织表达谱显示该基因在多种组织均有表达,以心脏及肝脏组织为最高;利用分子克隆手段构建含6×组氨酸(His)标签蛋白的真核表达载体pcDNA3·1(-)/his-myc-A-gpr81,通过脂质体介导,将该重组质粒转染CHO-K1细胞,RT-PCR证实该基因已整合入CHO-K1细胞的基因组中,Western-blot表明GPR81在CHO-GPR81工程细胞株中有表达。组织表达谱的检测和工程细胞株的建立为进一步研究该受体的生物学功能奠定了基础。

阿托伐他汀对老年大鼠心肌凋亡和过氧化物体增殖物激活型受体α蛋白表达的影响

目的通过在体动物实验的方法,观察老年大鼠心肌凋亡和过氧化体增殖物激活型受体α蛋白表达水平的变化及阿托伐他汀干预对上述因素的影响。方法30只20月龄的wistar大鼠,随机分为老年对照组、大剂量阿托伐他汀处理组[10mg/(kg.d)]和小剂量阿托伐他汀处理组[1mg/(kg.d)]。10只3月龄的wistar大鼠作为青年对照组。阿托伐他汀组每天给予相应剂量的药物灌胃处理,共4个月。对照组给予相同体积的生理盐水灌胃。采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)检测心肌细胞凋亡;用westernblot方法检测各组大鼠心肌的过氧化体增殖物激活型受体α蛋白表达水平。结果①与青年对照组相比,老年对照组大鼠的心肌过氧化体增殖物激活型受体α蛋白表达显著降低(P<0.01),阿托伐他汀可显著增加过氧化体增殖物激活型受体α的表达(P<0.01);②老年对照组大鼠的心肌细胞凋亡水平较青年对照组大鼠显著增高(P<0.01),阿托伐他汀干预组的心肌细胞凋亡水平较老年对照组明显降低(P<0.01)。结论阿托伐他汀干预可显著抑制老年大鼠心肌心肌细胞凋亡的发生,其作用可能与其上调过氧化体增殖物激活型受体α的表达有关。

一种细胞中HBV闭合环状DNA含量的快速实时定量PCR方法

目的 基于实时实时定量PCR技术建立一种快速测定HepG2．2．15细胞中HBV闭合环状DNA（HBV cccDNA）的方法。方法 与结果利用正常HBV基因组松驰环状DNA（HBV rcDNA）与HBV cccDNA在结构上的差异，即HBV rcDNA负链有缺口而HBV cccDNA是完整闭合环状DNA的特点而设计-对跨过此缺口的引物，从而区分HBV rcDNA与HBV cccDNA；同时利用实时定量PCR技术作为定量的手段，定量检测HepG2．2．15细胞中的HBV cccD—NA的浓度。由HBV基因组中扩增相应的片段M，以此片段构建pGEM／M—T质粒作为标准品模板。