中药复方现代化药理研究方法进展

综述了中药复方现代化研究中的方法学进展 ,主要包括体外细胞培养、血清药理学、脑脊液药理学、肠内菌代谢、证治药动学。

反义抗癌药物药理学研究进展

反义药物作为一类新型生物技术来源药物 ,在抗癌治疗中显示了良好的前景。硫代脱氧寡聚核苷酸是目前最常用的类型 ,已有 7种反义抗癌药物进入了临床试验。反义药物的靶点和机理不同于传统的小分子药物 ,有高度序列依赖性 ,能够实现基因核酸序列的特异识别 ,主要通过与靶mRNA分子形成RNA/DNA杂交链产生的空间位阻和诱导RNaseH ,发挥基因表达抑制效应。其生物学作用 ,取决于合理的药物设计和靶基因在肿瘤细胞行为中所起的作用。硫代脱氧寡聚核苷酸的生物物理性质是药代动力学和毒理学的决定因素 ,药代动力学性质和毒性谱相似。反义药物与化疗药物合用已有非常好的临床研究报告 ,提示反义药物与化疗药物合用有希望成为未来肿瘤治疗标准疗法的一部分。

建立骨质疏松症模型的研究与进展

目的:骨质疏松症的学术研究领域目前仍有许多问题存在争论,其主要原因是因为缺少确实有效的实验模型。最近的一些研究抻出了骨质疏松症模型的制作方法和机制。资料来源:应用计算机检索Medline1995-01/2004-01期间的骨质疏松症模型相关文章,检索词“osteoporosis;model;biology;review,并限定文章语言种类为English。计算机检索CMCC数据库1995-01/2004-01期间的骨质疏松症模型相关文章,检索词“骨质疏松,模型,生物学,并限定文章语言种类为中文。计算机检索《中国临床康复》杂志1990-01/2004-05期间的相关文章,限定文章语言种类为中文,检索词“骨质疏松症,模型”。资料选择:选择与骨质疏松症动物模型、细胞模型和现代分子模型的相关文献150篇,中文80篇,英文70篇。资料提炼:按骨质疏松症模型制作和机制研究的最新进展对相关文献进行提炼。纳入标准:与骨质疏松症动物模型、细胞模型和现代分子模型相关文献,不排除未随机试验以及盲法对照的文献。资料综合:综合资料发现近几年骨质疏松症的制作方式增多,特别是细胞模型、基因敲除模型和转基因模型的研究使得对骨质疏松症发病机理的认识深入到分子水平,研究发现其机制主要涉及细胞因子。

白三烯B_4受体新亚型BLT_2的研究进展

白三烯B4(LTB4)在炎症、免疫系统疾病和变态反应中发挥着重要作用。BLT2作为LTB4受体新亚型,其发现对于深入认识LTB4的作用以及作为相关疾病的新防治靶标意义重大。本文在简单介绍LTB4的基础上着重对BLT2的分子生物学特点、组织分布,以及可能的病理生理意义和药理学作用进行了综述。

美罗华单抗的^(90)Y标记的实验研究

目的:使用新型DOTA类螯合剂p-SCN-BZ-DOTA对进口人鼠嵌合型抗CD20单抗美罗华进行90Y标记,确定最佳标记条件。方法:采用先螯合抗体再标记核素的方法制备放免复合物,在固定抗体、螯合剂、核素用量及缓冲液的前提下,采用正交设计考察标记反应中的3个关键因素pH值、温度、标记时间对其比活度的影响,确定最佳标记条件。结果:不同标记条件下,放免复合物的比活度波动在0.122~0.327 mCi/mg之间,统计分析后发现,最佳标记条件为:pH值7.5,4℃反应2 h。结论:使用新型螯合剂p-SCN-BZ-DOTA可成功制备90Y-抗CD20单抗放射免疫药物,其放化纯度可满足临床研究使用。

反义药物设计方法研究进展

反义药物作为一类新型生物技术来源药物 ,主要是干预致病相关基因mRNA的表达 ,对于多种疾病的治疗显示了良好前景 ,反义核苷酸的设计是成功实现这一治疗的关键。因mRNA在细胞内是以一定的次级结构存在 ,mRNA分子上许多的位点被遮蔽 ,使得许多反义核苷酸分子难以接近和识别 ,加上用实验方法测定mRNA分子立体结构非常困难 ,因此 ,选择mRNA分子表面的“可接近部位” ,尚无规律可循。反义药物的发现 ,在很大程度上取决于经验和运气。然而 ,依据核酸碱基配对、蛋白翻译和“基因行路”的基本知识 ,以及核酸热动力学、计算机模拟RNA次级结构、反义寡核苷酸与RNA杂交后继发事件分析和人工智能分析等方法在反义药物设计上的应用 ,也能够显著明显提高设计的命中率。

中药成方体内代谢方法学研究新进展

目的探讨中药复方药动学的研究方法。方法对中药复方药动学从传统研究方法到最新研究方法进行了综述研究,并同时认为新方法、新技术、基因组学、蛋白质组学、代谢组学等方面的研究是未来中药复方药动学的研究方向。结论基因组学、蛋白质组学与代谢组学的共同联合应用,将明显加快中药复方药动学的研究进展。

人参、藜芦合用对大鼠肝P450酶活性及mRNA表达的调控作用

目的 :研究中药十八反中人参与藜芦合用对P4 5 0同工酶在酶活性及mRNA水平的调控作用。方法 :采用紫外分光光度法测定大鼠肝微粒体细胞色素P4 5 0与细胞色素b5含量及氨基比林N 脱甲基酶 (APND)、对硝基苯酚羟化酶 (pNPH)活性。采用RT PCR技术检测大鼠肝中 5种P4 5 0同工酶CYP1A1,CYP2B1/ 2 ,CYP2C11,CYP2E1及CYP3A1mRNA的表达。结果 :人参与藜芦合用可明显降低P4 5 0蛋白含量 ,可降低细胞色素b5的含量 ,单药及其与藜芦配伍都能使APND活性下降。在mRNA水平上 ,藜芦可诱导CYP2C11的基因表达 ,与人参合用后却使得CYP2C11的表达下降。藜芦与人参配伍诱导了CYP1A1的表达。人参可抑制CYP2B1/ 2的基因表达 ,与藜芦合用后却明显诱导了CYP2B1/ 2的表达 ,人参与藜芦合用后也明显诱导了CYP3A1的表达。结论 :人参与藜芦配伍前后对一些CYP亚型调控作用发生明显变化 ,可能存在基于药物代谢酶机理的相反作用 ,需进一步结合代谢研究加以综合分析 。

甘遂配伍甘草对大鼠肝脏CYP2E1表达及活性的影响

目的 通过检测细胞色素氧化酶CYP2E1的表达和活性变化,从分子水平探讨中药配伍禁忌“十八反”理论中甘遂配伍甘草的药理机制。方法 利用RT PCR检测大鼠肝脏CYP2E1mRNA水平;通过Westernblot检测大鼠肝脏CYP2E1蛋白表达;采用高效液相色谱(HPLC)法测定CYP2E1酶活性。结果 甘遂组、甘草组和甘遂甘草配伍组均明显诱导大鼠肝脏CYP2E1的表达与活性上升,并发现甘草组和甘遂甘草配伍组对CYP2E1活性的诱导作用显著高于甘遂组。结论 甘遂可能通过诱导肝脏CYP2E1的表达与活性上升,促使其所含的前致癌物质和前毒物转化成为致癌物和毒物,导致对机体的毒性作用;甘遂甘草配伍使用时,甘草对CYP2E1活性的诱导能力更强,故而甘草可促进甘遂所含前致癌物质和前毒物转化成为致癌物和毒物的过程,并导致对机体毒性作用的增强,从而表现出“十八反”中药物配伍禁忌的特征。

四物汤及其单药对血虚证小鼠造血的改善作用及其机制初探

目的 :研究四物汤及各单药对γ射线照射致血虚小鼠造血系统的影响 ,探讨四物汤补血作用的机理及配伍机制。方法 :采用 3 5Gy60 Coγ射线全身一次照射制作小鼠血虚证模型 ,进行外周血象检测及造血祖细胞集落培养 ;MTT法检测四物汤及各单药诱生Peyer’sPatch细胞、NIH3T3细胞上清的活性。结果 :①血虚小鼠骨髓中的CFU GM、BFU E、CFU E、CFU mix较正常组明显减少 ,四物汤及各单药对模型组造血祖细胞集落增殖的作用强度不同 ,四物汤最为明显。②四物汤及各单药能够诱导Peyer’sPatch产生细胞因子刺激骨髓细胞的增殖。③四物汤、当归、白芍诱生NIH3T3细胞上清能显著促进NFS 6 0细胞的增殖。结论 :四物汤及各单药对血虚小鼠造血系统的作用机制 ,可能通过刺激Peyer’sPatch细胞、成纤维细胞或产生造血生长因子 ,或与造血因子协同作用 ,促进骨髓干祖细胞增殖分化来实现的 ;四物汤及各单药作用的靶点和强度不同 ,符合中药复方组方的规律。

复方丹参滴丸对大鼠肝细胞色素P450酶的影响

目的观察复方丹参滴丸及其单味药对大鼠肝细胞色素P450酶(CYP)主要亚型的影响。方法 SD大鼠分别ig给予复方丹参滴丸0.3258 g.kg-1,丹参0.27 g.kg-1,三七0.0528 g.kg-1和冰片0.003 g.kg-1,每天1次,连续28 d,取大鼠肝微粒体,与CYP1A2,CYP2B6,CYP2C12,CYP2C13,CYP2D2和CYP3A1特异性底物探针共孵育,用高效液相色谱-质谱联用仪(HPLC-MS/MS)测定底物的代谢产物,分析CYP1A2,CYP2B6,CYP2C12,CYP2C13,CYP2D2和CYP3A1酶活性,同时用PCR方法检测cyp1a2,cyp2b1/2,cyp2c11,cyp2e1和cyp3a1 mRNA表达的变化。结果与正常对照组相比,苯巴比妥(阳性对照)对CYP2D2和CYP3A1活性有明显抑制作用,对CYP1A2,CYP2B6,CYP2C12和CYP2C13有明显诱导作用(P<0.05,P<0.01);复方丹参滴丸对CYP1A2和CYP2B6活性有明显抑制作用,对CYP2D2有诱导作用(P<0.05);丹参对CYP1A2和CYP2B6活性有明显抑制作用(P<0.05);三七对CYP1A2,CYP2B6,CYP2C13和CYP2D2活性有明显抑制作用(P<0.05);冰片明显抑制CYP1A2,CYP2B6,CYP2C12,CYP2C13和CYP2D2活性(P<0.01),且抑制强度高于复方丹参滴丸。与正常对照组相比,苯巴比妥对cyp1a2和cyp2b1/2 mRNA水平有明显诱导作用(P<0.05);复方丹参滴丸、丹参和三七对cyp1a2,cyp2b1/2,cyp2c11,cyp2e1和cyp3a1 mRNA水平无明显影响;冰片对cyp1a2,cyp2b1/2和cyp2c11 mRNA水平有明显抑制作用(P<0.05,P<0.01)。结论复方丹参滴丸中各单味药对CYP酶的影响强于全方对CYP酶的影响,其中以冰片对药物代谢酶的影响最为显著。

甘遂配伍甘草对大鼠肝脏CYP3A2影响

目的: 研究中药“十八反”中甘遂与甘草配伍对大鼠肝脏CYP3A2在mRNA水平、蛋白表达及酶活性方面的调控作用.方法: RT PCR检测大鼠肝脏CYP3A2mRNA水平;WesternBlotting检测大鼠肝脏CYP3A2蛋白表达;通过红霉素N 去甲基反应评价CYP3A2酶活性.结果: 在mRNA水平、蛋白表达、酶活性方面,甘遂单用组均高于其他组.结论: 甘遂、甘草可能存在基于药物代谢酶机制的药物间相互作用.

三七总皂苷对H9c2细胞P450酶mRNA表达的影响

目的研究三七总皂苷(PNS)对H9c2心肌细胞P450酶主要亚型表达的影响。方法不同浓度的PNS处理H9c2细胞48h,MTS法检测细胞的存活率,测定LDH释放率评价细胞损伤程度,Real Time PCR法检测PNS各处理组对CYP450酶各亚型mRNA表达的变化。结果 MTS结果表明随着PNS浓度的增大,细胞的存活率逐渐降低并呈浓度依赖性,IC50(5.28±0.08)g·L-1,同时LDH的释放率也逐渐增大。在对P450酶mRNA表达影响层面,PNS使CYP2J3、CYP4A1、CYP4A2、CYP4F1和CYP4F5表达上调(P<0.05或P<0.01);对CYP2C11、CYP4A3和CYP4F4表达下调(P<0.05或P<0.01),但高浓度时(5 g·L-1)对CYP4A3和CYP4F4有上调作用(P<0.01)。结论 PNS对心脏和血管有一定的保护作用,高浓度(5 g·L-1)的PNS对H9c2细胞有一定细胞毒作用,因此使用PNS时应注意用药剂量,使其发挥疗效而尽量减少药物不良反应的发生。

四物汤及其三味药组方对γ射线照射致血虚证小鼠造血系统的影响

本研究用γ射线照射制备小鼠血虚证模型 ,通过四物汤及其三味药组方对血虚证小鼠造血系统的影响探讨了四物汤补血作用的配伍机制。实验结果表明 :四物汤全方治疗血虚证效果最好 ;作用靶点不同 ,四药的君、臣、佐、使含义各一。

人参与藜芦合用对CYP1A酶活性的影响

目的研究中药十八反中人参,藜芦合用对CYP1A酶活性的影响,发现基于CYP1A酶活性变化的两者配伍禁忌机制。方法采用高效液相色谱法对人参,藜芦合用对CYP1A酶活性影响进行测定。结果人参与藜芦作用后,大鼠肝微粒体CYP1A的活性呈上升趋势。人参高剂量组、低剂量合用组、藜芦低、高剂量组、高剂量合用组的CYP1A活性上升与空白组比较存在显著性差异(P<0.05),低剂量合用组CYP1A活性发生了极为显著的上升(P<0.01)。结论人参与藜芦配伍前后对CYP1A亚型酶活性调控作用发生明显变化,可能存在基于CYP1A的相反作用,需进一步结合代谢研究加以综合分析,阐明相反作用的机理。

吡格列酮对大鼠急性痛风性关节炎的防治作用

目的:探讨过氧化物酶体增殖物活化型受体((peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)激动剂吡格列酮防治痛风性关节炎的可行性及机制。方法:于大鼠单侧踝关节腔内注射1 mg(20 mg/ml×50μl)尿酸钠晶体(monosodi-um urate,MSU)建立急性痛风性关节炎模型。以RT-PCR法检测PPARγ在关节炎滑膜0、4、8、24和48 h表达的动态变化。通过比较2、4、6、8、10、12、24和48 h关节炎症、肿胀、功能障碍指数和病理变化观察口服不同剂量(4 mg.kg-1.d-1、20 mg.kg-1.d-1)吡格列酮对关节炎的影响。结果:关节滑膜PPARγ表达呈时间依赖方式增加,在关节炎48 h后尤为明显。在诱发模型24 h内,吡格列酮对关节炎未见明显作用;而在48 h大剂量吡格列酮可显著减低关节炎的炎症、肿胀、功能障碍指数和滑膜炎性细胞浸润,但小剂量疗效不明显。结论:大剂量吡格列酮可显著减轻大鼠急性痛风性关节炎。关节炎后期PPARγ表达增加有利于药物起效和痛风的自发缓解。

重组水蛭素对Beagle犬凝血功能的影响

目的观察重组水蛭素对Beagle犬凝血功能的影响。方法Beagle犬缓慢静脉注射不同剂量重组水蛭素 [6、18、5 4mg/(kg·d) ],连续 14d ,观察其凝血功能的变化。结果用药组犬皮下有血肿 ,活化部分凝血活酶时间和凝血酶时间明显延长 ,但凝血酶原时间无明显变化 ,高剂量组的血小板聚集率有升高趋势 ,光镜下观察脾脏等实质脏器有出血灶。结论重组水蛭素抑制内源性凝血系统 。

四物汤对辐射小鼠造血功能影响的初步探讨

目的 :对察四物汤对 3 5Gyγ射线照射小鼠造血系统的影响 ,探讨四物汤作用机制。方法 :通过外周血象观察、造血祖细胞体外培养、MTT法检测四物汤及其拆方诱导NIH3T3细胞上清对G -CSF依赖细胞株NFS -6 0增殖等指标的影响研究四物汤的作用机制。结果 :四物汤显著升高 3 5Gyγ射线照射小鼠外周血白细胞、血小板 ,促进其造血祖细胞CFU -GM、CFU -meg、CFU -mix集落的增殖 ;四物汤诱导的NIH3T3细胞上清能显著促进G -CSF依赖细胞株NFS - 6 0细胞的增殖。结论 :四物汤对辐射小鼠造血细胞的作用机制与刺激NIH3T3细胞产生类G -CSF作用或与G -CSF产生协同作用而促进外周血白细胞。

反义药物作用中的“靶二级结构域”

目的 在计算机模拟mRNA二级结构与定量构效关系分析的基础上优化反义药物设计。方法 使用软件RNAstructure模拟mRNA二级结构 ,针对二级结构单元进行反义药物设计 ,用肺腺癌细胞株A5 49评价反义药物的体外抗肿瘤生物活性 ,用软件SPSS进行多元回归分析。结果 有效药物作用靶点相对集中地分布于由若干二级结构单元组成的局部二级结构区域。我们称之为“靶二级结构域 (靶域 )”。“靶域”结构相对稳定 ,但其中包含不稳定二级结构单元 (ΔG° >0 )。针对不同“靶域”设计的反义药物显示不同的生物活性 (P <0 0 1) ,但靶向同一“靶域”的反义药物生物活性无统计差别。结论 “靶域”现象有助于反义药物靶点的选择 ,并对探针。