利用RNA干扰技术下调Lon基因表达的生物学效应研究

目的:通过构建Lon基因下调的哺乳动物细胞模型表达,观察Lon基因对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响,以探讨Lon蛋白的功能。方法:设计针对Lon蛋白酶的小干扰RNA(siRNA),构建pSi-lencer U6 2.1-Lon真核表达载体,用脂质体法转染人乳腺癌细胞MCF7,RT-PCR检测Lon基因下调的水平,通过采用高温、紫外线照射、顺铂处理,观察Lon基因下调后细胞敏感性的变化(MTT法)。结果:RT-PCR显示重组质粒pSilencer U6 2.1-Lon转染MCF7细胞,Lon基因明显下调,RT-PCR未见扩增目的带,细胞培养结果显示,细胞增殖能力明显减弱。紫外线照射和顺铂处理后的MTT结果显示,pSilencer U6 2.1-Lon转染的MCF7细胞,增殖能力明显下降,与空载体转染组(pSi-lencer U6 2.1)和未转染组相比有显著性差异(P<0.05)。加热应激试验显示,37,41,43℃处理后,RNA干扰转染组(pSilencer U6 2.1-Lon)与空载体转染组、未转染组相比有显著性差异(P<0.05)。而在45℃时,RNA干扰转染组、空载体转染组与未转染组之间均无显著性差异(P>0.05)。结论:RNAi能有效下调Lon蛋白的表达。Lon基因的下调可抑制乳腺癌细胞MCF7的增殖能力,诱导细胞凋亡,以及可增加MCF7对紫外线和顺铂处理的敏感性。

间充质干细胞对小鼠辐射早期造血组织细胞的细胞周期及凋亡的影响

本研究探讨骨髓间充质干细胞(MSC)对急性放射病小鼠重要造血免疫器官的早期辐射防护作用及其机制。BALB/c小鼠受5.5Gy60Coγ射线照射后随机分为两组。MSC组照射后1小时内,经尾静脉输注BALB/c小鼠的MSC2.5×107/kg;对照组在照射后输注等体积生理盐水。用流式细胞术检测两组小鼠照射后6、12、24和72小时的骨髓、胸腺和脾细胞的凋亡及细胞周期变化;用免疫组织化学法检测照射后12小时胸腺和脾脏P53蛋白表达情况。结果显示:照射后6小时各器官细胞出现G0/G1及G2/M期阻滞,S期下降。胸腺细胞,脾细胞和骨髓细胞分别于照射后12、6和24小时后发现G0/G1期阻滞峰值,随后G0/G1期细胞减少,S和G2/M期细胞增多,72小时时G0/G1期细胞数低于正常值,S期细胞数高于正常值。胸腺和脾细胞周期改变快于骨髓细胞,改变幅度也大于骨髓细胞。MSC组细胞周期变化速度和程度高于对照组。流式细胞术显示各器官细胞照射后6小时凋亡率明显增加,12小时达高峰,24小时后逐渐降到正常,脾与胸腺细胞凋亡率高于骨髓细胞。MSC组的胸腺细胞照射后12小时、脾细胞照射后12、24小时、骨髓细胞照射后24小时的凋亡率均少于对照组。免疫组织化学检测显示,照射后12小时MSC组小鼠脾脏胸腺细胞P53蛋白表达低于对照组。结论:MSC加快辐射小鼠骨髓、胸腺和脾脏细胞的周期变化,减少细胞凋亡,促进受损的造血和免疫器官修复,从而对受照小鼠起到早期辐射保护作用。

SeO_2对原癌基因c-fos调控区P250的影响

背景与目的:已有研究表明,二氧化硒(SeO2)可诱导肺癌细胞株中c-fos蛋白高表达。本研究旨在通过研究SeO2对原癌基因c-fos调控区域P250的影响,探讨其调控机理。方法:构建c-fos启动区氯霉素乙酰化转移酶(chloramphenicolacetyl-transferase,CAT),然后转染HeLa癌细胞株,用不同浓度SeO2处理后观察细胞中CAT的活性。结果:不同浓度(3μmol/L、10μmol/L、30μmol/L)SeO2对转染了c-fosCATP250的HeLa癌细胞株作用后,其CAT的活性均增高,其积分光密度值分别为0.737±0.085、6.047±0.738、3.167±0.183,与对照组(0.490±0.046)相比,10μmol/L和30μmol/L浓度组的积分光密度值变化有统计学意义(P<0.05)。结论:SeO2可通过影响c-fos调控区域P250而发挥调控肿瘤细胞凋亡的生物学效应,SeO2可能具有潜在的抗肿瘤作用。

倒功训练致脑震荡伤发生机制分析

目的:探讨倒功训练致脑震荡伤特点、发生机制,提出预防脑震荡发生的建议。方法:对驻东北地区1999-05/2002-05不同兵种官兵13594人进行随机整群抽样填表,结合临床和基础研究进行分析、探讨。结果:军事训练致脑震荡伤377例,发生率为2.77％,其中,因倒功训练致脑震荡伤170例,占军事训练伤45.1％。入伍一年以内致伤达88.8％。结论:脑震荡伤后主要表现为脑血液循环障碍和脑实质神经细胞变性、点状出血、神经元缺血等病理、生理改变。预防和降低脑震荡发生建议包括抓好教育,重视场地建设和防震帽应用等。

不同兵种官兵脑震荡伤流行病学特点与致伤因素

为了摸清不同兵种官兵训练所致的脑震荡发生率、致伤因素和特点,有针对性地提出预防措施,对驻东北地区全训步兵师和各特种部队官兵13594人进行随机整群抽样填表,由调查军医结合卫生队或住院记录认定诊断。结果表明,总的脑震荡发生率为2.77%,其中武警3.32%,特种兵3.28%,步兵3.20%,海军最低为1.50%。致伤伤因与步兵、武警、特种兵以倒功训练为主,海军、坦克兵主要以碰撞伤为主,与训练科目、强度及环境有关。入伍半年内者发生脑震荡占总发生数的60.7%,提示此期是训练致脑震荡的高发期。结论:应采取科学施训,循序渐进,分解练习,综合考评的原则,对入伍半年以内的战士应加强心理教育,进行倒功和400m障碍跑训练应加强指导,注意环境场地适应和训练中辅助性保护,以降低脑震荡发生率。

碱性成纤维细胞生长因子受体mRNA基因在人晶体上皮细胞内的检测研究

为研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ｂＦＧＦ）对晶体上皮细胞促增殖作用的机理，采用原位杂交，用合成的寡核苷酸探针来检测人晶体上皮细胞内的ｂＦＧＦ高亲和力受体—成纤维细胞生长因子受体１（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅ－ｃｅｐｔｏｒ１，ＦＧＦＲ１）的ｍＲＮＡ基因，并用图像分析进行相对定量。结果：表明了人晶体上皮细胞表达ＦＧＦＲ１的ｍＲＮＡ基因。结论：人晶体上皮细胞存在ＦＧＦＲ１，当ｂＦＧＦ与其高亲和力受体结合后，对促进晶体上皮细胞的增殖以及白内障术后后囊混浊的形成具有重要作用。

骨髓间充质干细胞防治多脏器衰竭

目的探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）防治半相合骨髓移植治疗致死剂量照射小鼠的多脏器衰竭（MOF）的作用及机制：方法BALB／C小鼠8Gy60Coy射线照射后，分为MSCs组，尾静脉输注经cm—DiI膜染剂标记的CB6FI小鼠的MSCs和骨髓细胞；对照组，只输注CB6F1骨髓细胞。正常组，不照射，输注标记的MSCs细胞。观察移植后不同时间，供者MSCs在受者体内分布，MSCs组和对照组小鼠外周血中IL-2，TNF-α和IL10血清浓度变化情况。SAS9．0软件对数据做成组t检验。结果移植后15d，正常组，MSCs主要集中在骨髓和小肠。MSC组，移植后不同时间，标记的细胞分别在胸腺、骨髓、小肠中富集：MSCs上调rIIM0的血清质量浓度，下调了IL-2和TNF-α的质量浓度，两组数据有统计学差异。结论证实MSCs可以通过下调体内的促炎因子IL-2和TNF-α，及上调抑炎凶子IL-10，抑制全身炎症反应综合征的发生，及MSCs体内多组织器官分布，发挥防治MOF的作用。