免疫亲和层析法纯化重组人促红细胞生成素的实验研究

目的 以免疫亲和层析方法纯化重组人促红细胞生成素 (rhEPO)。方法 以rhEPO作为抗原 ,免疫Balb/C小鼠 ,制备抗rhEPO单克隆抗体 (mAb)。以纯化的抗rhEPOmAb 2F12与预活化的Sepharose 4B偶联 ,制成抗体亲和层析柱 ,纯化rhEPO。结果 经筛选共获得 4株可分泌抗rhEPOmAb的杂交瘤细胞株 ,分别为 :1A8、2F12、3D4和 3F10。亲和层析纯化的rhEPO经SDS PAGE显示单一条带 ;2g凝胶制备的层析柱一次层析可获得 1.5mg高纯度的rhEPO。利用纯化的mAb建立的ELISA法 ,用于检测rhEPO的蛋白含量可达ng水平。结论 免疫亲和层析法纯化rhEPO的效率高、纯度好 ,用纯化的mAb建立的ELISA法具有灵敏度高。

绞股蓝皂苷对小鼠白血病P388细胞内原癌基因表达的影响

目的 研究绞股蓝皂苷 (gypenosides ,GP)体外给药对小鼠白血病P 388细胞内原癌基因c fos和c myc基因表达的影响。方法 采用Northern杂交和狭线杂交的方法检测c fos和c myc基因表达的水平。 结果 GP在给药剂量0 0 15和 0 0 30 g·L-1的条件下 ,体外给药 2 4h ,c fos和c myc的表达水平分别为 0 5 2 2 ,0 947和 0 16 5 ,0 12 0 ,而对照组则为 0 36 0和 0 30 8。结果表明 ,GP作用 2 4h使P 388细胞内的c fos基因表达水平明显升高 ,c myc基因的表达水平明显降低。结论 GP对原癌基因c fos,c myc表达水平的影响是其抑制P 388细胞生长的机制之一。