几种HCG生物活性测定方法及其相关因素的比较

通过扩大实验动物用量的方法，仔细比较了三种ＨＣＧ生物活性测定方法：大鼠卵巢增重法、大鼠子宫增重法、小鼠子宫增重法。结果显示，美英日三国药典和中国药典测定的ＨＣＧ生物活性具有显著性差异，这种差异产生的原因是因为中国药典规定使用的稀释液中，含有对ＨＣＧ生物活性具有保护作用的ＢＳＡ；美英日三国药典规定使用的大鼠卵巢增重法组内组间变异系数最小，测定结果可靠性最大；对实验室常用的三种效价计算方法的可靠性进行比较显示，三者之间无显著性差异。

Ad5F11p-GFP对CIK和NK-92细胞的转染效率及生物学特性的影响

目的:研究Ad5F11p载体对CIK和NK-92细胞的转染效率及生物学特性的影响,预测Ad5F11p载体在免疫治疗中的应用。方法:用Ad5F11p-GFP以不同的MOI(转染复数)转染原代免疫细胞CIK和免疫细胞系NK-92,并以未转染病毒的两种免疫细胞作为阴性对照;用流式细胞术检测荧光阳性细胞比例,用显微镜观察形态学变化,用台盼蓝染色计数分析细胞的增殖,并用LDH法检测NK-92对白血病细胞系K562和HL-60的杀伤作用。结果:25MOI的Ad5F11p-GFP对NK-92的转染效率可以达到大约90%,200 M OI的Ad5F11p-GFP对CIK转染效率不到40%,同一M OI在48 h和96 h时转染效率基本不变;转染Ad5F11p-GFP的免疫细胞容易聚团,增殖减慢,IFN-γ的释放增加并且对肿瘤的杀伤活性增强。结论:Ad5F11p载体修饰的NK-92在过继性免疫治疗中有较好的应用前景。

针对uPA的siRNA对人乳腺癌细胞侵袭的抑制作用

目的:通过RNA干涉的方法抑制乳腺癌细胞中uPA的表达,观察uPA的表达抑制后对肿瘤细胞的体外侵袭能力的影响。方法:(1)构建可以表达针对uPA的siRNA的干涉载体,转染高侵袭性人乳腺癌细胞系MDA-MB 231,G418抗性筛选,挑选单克隆株;(2)分别通过RT-PCR和Western Blot的方法检测uPA的表达;(3)平板克隆形成试验检测转染前后肿瘤细胞的克隆形成能力;4Bovden chamber Assay检测肿瘤细胞体外侵袭能力。结果:(1)可以稳定表达针对uPA的siRNA的单克隆株,uPA的表达水平显著下降;(2)转染了针对uPA的siRNA的单克隆株的克隆形成能力降低;(3)转染了针对uPA的siRNA的单克隆株体外侵袭能力与原代细胞MDA-MB 231相比明显受到抑制。结论:uPA在人乳腺癌侵袭行为中发挥重要的作用,针对uPA的siRNA可以显著降低uPA的表达,从而抑制肿瘤细胞的侵袭,可望成为抗肿瘤侵袭治疗的一种有效手段。

A蛋白亲和层析法纯化动物血清抗体的效果比较

用ＨｉｔｒａｐＰｒｏｔｅｉｎ－ＡＳｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析系统，对不同动物血清或抗血清抗体的纯化效率进行了比较，为选择抗体纯化方法提供依据。该方法简便快速，纯化的抗体纯度高，能较好地保持抗体免疫学活性。层析柱反复使用４０多次，纯化抗体效率不变。

针对尿激酶型纤溶酶原激活剂的siRNA的载体构建与表达

目的:构建针对尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)mRNA的siRNA的表达载体,并观察其对转染细胞中的uPA表达的抑制作用.方法:化学合成用于产生针对uPA的发卡状RNA的寡核苷酸,各64个碱基,退火后插入线性化的pSU PER载体的H1启动子下游.重组载体经限制性酶切和测序.把构建的载体转染乳腺癌细胞系MDA MB231,观察其对uPA的干扰作用.结果:限制性酶切和序列测定表明成功构建了可以表达针对uPA的发卡状RNA表达载体,该载体表达的发卡状RNA能够有效的下调uPA的表达.结论:成功的构建了针对uPA的发卡状RNA表达载体,为进一步研究uPA的功能和肿瘤的基因治疗打下基础.