两种重组抗CD20人源化单克隆抗体定量分析方法的比较及其在药代动力学研究中的应用

采用酶联免疫吸附分析（ELISA）与基于Wil2-S细胞的流式细胞术（FCA）两种方法对生物基质中的重组抗CD20人源化单克隆抗体（rh-anti-CD20zumab）进行定量分析,并对两种方法进行系统比较.方法学验证结果表明,两种方法均具有良好的特异性、精密度和准确度,但定量范围存在明显差异.ELISA法批内和批间精密度均小于19.5％,准确度为-18.2％～17.6％;FCA法批内和批间精密度均小于19.0％,准确度为-18.9％～ 18.4％.二者定量范围分别为0.04～5.0 mg/L和3.1～200 mg/L,ELISA法的灵敏度显著高于FCA法.利用两种方法测定猕猴静脉滴注rh-anti-CD20zumab后的血药浓度-时间变化并进行药代动力学（PK）分析.结果表明,在给定剂量下,通过两种方法获得的PK结果具有良好的一致性.FCA法是一种细胞表面抗原靶向性抗体类药物PK研究及药效动力学（PD）研究的快捷、理想的方法.

中药对细胞色素P450诱导或抑制作用的影响因素

本文通过查阅近年来国内外有关中草药对CYP450影响的文献,并加以归纳、总结,综述了能够影响中药对CYP450诱导或抑制作用的各种药物因素和其他因素,从而指导和促进中草药对CYP450影响的研究。

低通量血液透析对蛋白结合类毒素清除效果的研究

目的探讨低通量血液透析(low-flux hemodialysis,LFHD)对维持性血液透析(maintenance hemodialysis,MHD)患者体内蛋白结合类毒素的清除效果。方法选择低通量血液透析治疗的MHD患者40例,采用高效液相色谱-串联质谱(high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)法测定透析前、后血清中的马尿酸(hippuric acid,HA)、硫酸对甲酚(p-cresol sulphate,PCS)、硫酸吲哚酚(indoxyl sulphate,IS),3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(3-carboxy-4-methyl-5-propyl-2-furanpropionic acid,CMPF)的总体(Total,T)、游离(Free,F)浓度,计算其血清下降率和蛋白结合率。并测定透析废液中这4种蛋白结合类毒素的游离浓度,计算其溶质清除总量(total solute reduction,TSR)和透析溶质清除率(Kd),以观察低通量血液透析对蛋白结合类毒素的清除效果。结果透析后T-H A、T-PCS、T-IS及T-CMPF的血清下降率分别为(59.44±11.28)%、(32.36±9.28)%、(34.76±10.13)%和(5.60±15.98)%。透析废液中F-HA、F-PCS和F-IS的TSR分别为(112.88±31.72)mg、(31.55±9.85)mg和(35.40±10.38)mg;HA、PCS和IS的Kd分别为(41.25±5.09)ml/min、(8.09±3.58)ml/min、(9.89±2.76)ml/min。透析废液中CMPF极微量,基本测不出。结论低通量血液透析可以部分清除游离形式的蛋白结合类毒素;血清下降率并不足以评价低通量血液透析对蛋白结合类毒素的清除效果,蛋白结合类毒素在体内分布模型并非二室模型,可能为多室分布模型。

基于抗CD20单克隆抗体的2种夹心ELISA法的建立

目的：建立和比较2种灵敏、特异的夹心ELISA方法，用于准确定量检测食蟹猴血浆中重组抗CD20人源化单克隆抗体（rh—anti—CD20zumab）浓度。方法：以rh—anti—CD20zumab为基础，分别用山羊抗人IgGF（ab＇）2抗体和驴抗人IgG Fc抗体包被96孔酶标板，加入待测样品，均采用HRP标记的猴血清吸附的山羊抗人IgG抗体进行检测，加底物显色，读取D450nm值。结果：建立了2种定量检测rh—anti—CD20zumab的夹心ELISA方法并进行了确证，样品的前处理分别为1：20和1：10，方法的线性范围分别为40～5000和40～12500ng／mL，定量下限均为40ng／mL，两者的板内、板间精密度分别小于16.2％和19．4％，准确度分别为-10．3％～16．6％和-14．4％～12．9％。2种方法均具有良好的特异性和稀释线性，且都未出现钩状效应。结论：方法学确证表明，本研究建立的2种ELISA法均符合新生物制品临床前药代动力学研究指导原则的要求，可用于rh—anti—CD20zumab的检测，为后续rh—anti—CD20zumab在食蟹猴体内的药代动力学研究提供了不同的检测方法。

不同血液净化方法清除维持性血液透析患者血清蛋白结合类尿毒症毒素的效果比较

目的探讨血液透析(HD)、血液透析滤过(HDF)和血液灌流联合血液透析(HP+HD)治疗方法对维持性血液透析(MHD)患者血清蛋白结合类毒素--硫酸吲哚酚(indoxyl sulphate,IS)、硫酸对甲酚(pcresyl sulphate,PCS)和马尿酸(hippuric acid,HA)的清除效果。方法将入选的48例患者随机分为HD组、HDF组和HP+HD组,采用高效液相色谱-电喷雾电离-串联质谱(high-performance liquid chromatography electrospray ionization tandem mass spectrometry,HPLC-ESI-MS/MS)方法测定不同血液净化方法治疗前后血清IS、PCS和HA浓度,以比较不同治疗方式对蛋白结合类尿毒症毒素的清除效果。结果对血清IS的清除,HD组从(30.96±12.55)μg/ml降至(21.03±10.42)μg/ml(P<0.05),下降率为(33.10±12.87)%;HDF组从(32.24±17.11)μg/ml降至(17.11±8.94)μg/ml(P<0.01),下降率为(43.96±14.96)%;HP+HD组从(33.52±19.30)μg/ml降至(14.33±9.81)μg/ml(P<0.01),下降率为(57.96±11.95)%;HP+HD组下降率显著高于同期HDF组和HD组(P<0.05,P<0.01),HDF组下降率显著高于HD组(P<0.05)。对血清PCS的清除,HD组从(24.87±13.64)μg/ml降至(16.80±8.48)μg/ml(P<0.05),下降率为(30.24±9.27)%;HDF组从(30.60±19.18)μg/ml降至(15.59±12.39)μg/ml(P<0.05),下降率为(43.20±11.87)%;HP+HD组从(38.92±17.24)μg/ml降至(17.71±10.22)μg/ml(P<0.01),下降率为(54.22±14.37)%。HP+HD组下降率显著高于同期HDF组和HD组(P<0.01,P<0.01),HDF组治疗血清PCS水平下降率高于HD组(P<0.05)。对血清HA清除,HD组从(18.65±14.24)μg/ml降至(7.38±5.27)μg/ml(P<0.01),下降率为(59.36±7.46)%;HDF组从(27.62±16.07)μg/ml降至(7.75±4.56)μg/ml(P<0.01),下降率为(69.70±11.93)%;HP+HD组从(20.48±11.02)μg/ml降至(6.33±4.78)μg/ml(P<0.01),下降率为(71.20±10.28)%;HP+HD组下降率显著高于同期HD组(P<0.01),HDF组降率显著高于HD组(P<0.01),但HP+HD组与HDF组之间的下降率相比无统计学差异(P>0.05)。结论 HD、HDF和HP+HD血液净化治疗方法对蛋白结合类毒素均有清除作用,HP+HD的清除效果优于HDF和HD。

慢性肾脏病3～5期患者肾功能与蛋白结合类毒素相关性研究

目的测定慢性肾脏病（chronic kidney disease,CKD）3~5期（CKD3~5）患者血清马尿酸（hippuric acid,HA）、硫酸吲哚酚（indoxyl sulfate,IS）、硫酸对甲酚（p-cresyl sulfate,PCS）及3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸（3-carboxy-4-methyl-5-propyl-2-furanpropionic acid,CMPF）4种蛋白结合类毒素的水平,分析肾功能与蛋白结合类毒素水平之间的关系。方法将112例CKD患者依据肾功能分为3组（CKD3~5）,另外选取60例健康志愿者作为对照组。应用HPLS-MS/MS检测技术测定各组血清中HA、IS、PCS、CMPF的浓度,并对估测肾小球滤过率（e GFR）与4种毒素浓度进行相关分析。结果与健康对照组相比,CKD3~5患者体内HA、IS、PCS及CMPF浓度均明显升高（P〈0.01）。各组CKD患者比较,HA、IS、PCS的水平随肾功能下降呈升高趋势（P〈0.01）,而CMPF血清浓度无显著变化（P〉0.05）。相关分析显示,e GFR与HA、IS、PCS及CMPF之间呈明显负相关。曲线回归分析显示,HA与e GFR之间曲线回归拟合方程式为Y=-46.171 ln X＋209.464（R2=0.601,P〈0.01）;IS与e GFR之间曲线回归拟合方程式为Y=-62.570 ln X＋279.537（R2=0.633,P〈0.01）;PCS与e GFR之间曲线回归拟合方程式为Y=-84.297 ln X＋383.172（R^2=0.529,P〈0.01）;CMPF与e GFR之间曲线回归拟合方程式为Y=-7.648 ln X＋53.546（R2=0.172,P〈0.01）。结论 CKD3~5患者体内HA、IS、PCS及CMPF水平均高于健康对照组,其中HA、IS、PCS的浓度随肾功能降低而逐渐升高,但CMPF浓度随肾功能进展变化不大。

GLP-1受体激动剂的临床研究进展

当前研究已经显示2型糖尿病同肥胖症具有并发趋势,临床上也公认将控制患者体重列入到2型糖尿病治疗指南中。目前在已经过验证的治疗方案中,只有胰高血糖素样肽受体激动剂(glucagon-like peptide-1 receptor agonists,GLP-1 RAs)可以实现对患者的体重和血糖水平同时调控。GLP-1作为GLP-1受体激动剂研究的基础,具有血糖依赖性的促进胰岛素分泌作用。其可以通过抑制食欲和减缓胃排空来达到减轻体重的作用。天然的GLP-1由于受到二肽基肽酶(dipeptide peptidase,DPP-Ⅳ)的降解作用,半衰期仅为2 min。为了延长GLP-1 RAs的体内半衰期,多种改造策略被应用于新型GLP-1受体激动剂的研究开发,目前此类GLP-1受体激动剂已部分进入临床评估阶段,给药频率将从每周1次延长到每月1次。本文将对近年来已进入临床试验研究的GLP-1受体激动剂进行综述。

酸解桥式酶联免疫吸附分析法对食蟹猴血清中治疗性单克隆抗体奥法木单抗的免疫原性研究

目的以抗CD20全人单克隆抗体(Arzerra^(TM))为载体,建立并验证酸解桥式酶联免疫吸附分析法(Bridging ELISA),研究食蟹猴血清中该药物的抗药抗体(anti-drug antibodies,ADAs),了解该药物在猴体内的免疫原性。方法预先包被Arzerra^(TM)的酶标板,先后加入生物素标记的Arzerra^(TM)和酸解待测样品,包被药物(Arzerra^(TM))和生物素标记药物(Biotin-Arzerra^(TM))与样品中ADAs形成"药物-ADAs-生物素标记药物"桥接复合物并显色。结果验证方法灵敏度为7.4 ng·mL^(-1),阳性对照批内、批间精密度不大于17.6%,筛选阈值(sereening cut point,SCP)为1.23,确证实验阈值(confirmatory cut point,CCP)为42.8%;同时,方法具有20倍药物耐受性[Drug-ADAs(40.0μg·mL^(-1);2.0μg·mL^(-1))]及3.2~100 000.0 ng·mL^(-1)内无钩状效应等特性。利用该桥式酶联免疫吸附分析法测定食蟹猴血清中抗药抗体(抗Arzerra^(TM)抗体),于给药后21 d检测到ADAs的产生。结论针对治疗性单克隆抗体的ADAs检测,Bridging ELISA法具有较高的灵敏度及较好的耐药性等特征,故不失为该类药物ADA检测的理想方法之一。