蛋氨酸脑啡肽对神经母细胞瘤细胞生长周期的影响及其机制研究

目的:研究蛋氨酸脑啡肽(Met-ENK)对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的生长抑制作用及细胞周期的抑制机制。方法:采用MTT法检测细胞生长抑制率;流式细胞术检测Met-ENK作用后肿瘤细胞周期变化;Real-time PCR法检测Met-ENK作用后细胞内P21,P53基因转录量变化;Western blot法检测细胞内P21,P16,磷酸Rb蛋白表达量的变化情况。结果:MTT法结果显示,Met-ENK对SH-SY5Y细胞有生长抑制作用,在Met-ENK浓度为10-5mol·L-1时抑制率为40%;流式细胞术证实Met-ENK作用后大多数细胞被抑制于细胞周期的G0/G1期,该期细胞数由63.97%变为87.73%;P21的基因转录量是用药前的3倍,P53基因转录量是用药前的5倍;P21,P16蛋白表达量明显增加,磷酸Rb蛋白表达量明显降低。结论:Met-ENK可以通过上调细胞周期蛋白依靠性激酶抑制因子P21及抑癌基因P53的转录和蛋白表达量,下调Rb蛋白的磷酸化水平将SHSY5Y细胞的增殖抑制于生长周期的G0/G1期,表明Met-ENK的G0/G1期特异性周期抑瘤作用可以通过调节该途径产生。

蛋氨酸脑啡肽对MCF-7/ADR生长抑制作用机制的初步研究

目的研究阿片生长因子蛋氨酸脑啡肽(Met-ENK)对MCF-7/ADR肿瘤细胞的抑制作用的效果及机制的初步研究。方法采用CCK-8法检测不同剂量的Met-ENK(10-3、10-4、10-5、10-6、10-7 mol/L)对乳腺癌细胞MCF-7/ADR作用48 h后的肿瘤抑制率;采用细胞计数法绘制Met-ENK孵育0、24、36、48及72 h后的MCF-7/ADR的生长曲线;采用流式细胞术及PI染色法记录用药孵育48 h后,MCF-7/ADR细胞周期变化情况。结果结果显示与空白对照组相比,Met-ENK对MCF-7/ADR细胞的生长有明显的抑制作用,呈时间依赖性,但不呈剂量依赖性,10-6mol/L浓度时,Met-ENK抑制肿瘤细胞生长效应最强;在Met-ENK作用后主要将细胞抑制于生长周期的G0/G1期。结论 Met-ENK对MCF-7/ADR肿瘤细胞有明显的抑制作用,且主要是通过影响细胞周期阻滞来发挥抑制肿瘤细胞生长的作用。但其机制仍需进一步研究及证实。

蛋氨酸脑啡肽与多柔比星联用对神经母细胞瘤SH-SY5Y的生长抑制及凋亡作用研究

目的:探讨蛋氨酸脑啡肽(Met-ENK)与多柔比星联用对神经母细胞瘤SH-SY5Y的生长抑制及凋亡作用,为Met-ENK临床联合用药的可行性提供参考。方法:采用CCK-8法检测协同生长抑制率;采用流式细胞术法检测细胞凋亡情况;根据生长抑制率情况运用金氏公式求出协同指数(q),明确Met-ENK与多柔比星的协同作用;采用SAS9.0软件对不同组别产生的生长抑制率、凋亡数据进行统计分析。结果:Met-ENK与多柔比星分别单独使用及联合用药作用于神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的抑制率依次为0.29%、0.71%、0.82%,且Met-ENK与多柔比星的协同指数q=2.19(q>2.0);单用Met-ENK几乎不引起肿瘤凋亡,单用多柔比星的肿瘤凋亡率为49.1%,二者联用的肿瘤细胞凋亡率为65.2%,与单用多柔比星比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:Met-ENK可显著提升神经母细胞瘤SH-SY5Y对多柔比星的敏感性,增强其对肿瘤细胞生长的抑制作用及肿瘤细胞凋亡率。

rhCNTF对Aβ损伤海马神经元的作用机制研究

目的:探讨重组人睫状神经营养因子(rhCNTF)对Aβ损伤的海马神经元的作用机制。方法:分离、纯化Wistar乳鼠海马组织,获得海马神经元并进行体外培养。采用神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫细胞化学进行鉴定。100 ng·mL-1的rhCNTF和10μmol·L-1的聚集态Aβ作用于海马神经元。CCK-8法检测rhCNTF对Aβ损伤的海马神经元活力影响。流式细胞术检测rhCNTF对Aβ致海马神经元早期凋亡的影响。结果 :免疫细胞化学法成功鉴定了海马神经元。海马神经元活动度随着rhCNTF浓度增加而增大且呈指数相关。镜下观察到rhCNTF+Aβ组细胞形态较Aβ组好;相对于Aβ组,rhCNTF+Aβ组和Aβ+rhCNTF组的海马神经元活动度显著增高(P<0.01)。rhCNTF可减少Aβ引起的细胞早期凋亡。结论 :rhCNTF对Aβ损伤的海马神经元有保护作用,其机制与促进神经元生长和减少细胞凋亡有关。

CYP3A和MDR1基因多态性对环孢素A药代动力学的影响

环孢素A(Cs A)属环状多肽化合物,作为基础免疫抑制剂广泛用于实体器官移植后的抗排斥反应,其主要经P-糖蛋白(P-gp)转运,细胞色素P450(CYP)3A酶代谢,CYP3A及多药耐药基因1(MDR1)的多态性可能影响CYP3A酶和P-gp的表达水平和生物活性,进而可能对Cs A的药代动力学过程产生影响。本文就CYP3A和MDR1基因多态性对Cs A药代动力学的影响进行综述,以期指导临床制定合理的个体化用药方案。

CYP3A和MDR1基因多态性与他克莫司血药浓度的相关性

他克莫司(FK506)是一种新型免疫抑制剂,广泛应用于器官移植后排斥反应的预防,主要由细胞色素P450(CYP450)3A酶代谢,P-糖蛋白(P-gp)转运,CYP3A和多药耐药基因1(MDR1)的多态性可能会影响CYP3A酶及P-gp的表达水平和生物活性,进而影响FK506的药代动力学过程,最终可能影响其血药浓度。本文就CYP3A和MDR1基因多态性与FK506血药浓度的相关性进行综述,以期指导临床个体化合理用药。

Ⅰ期临床试验健康受试者筛选失败原因的分析探讨

目的探讨分析Ⅰ期临床试验过程中,受试者筛选失败的原因。方法分析参与1项心血管类药物临床试验的106例健康成年受试者筛选过程,对筛选失败的原因进行归纳总结,并探讨可能的影响因素。结果与受试者筛选失败可能有关的因素包括依从性、体格检查、实验室检查和特殊检查等,其中主要原因是实验室检查不合格,占接受该项检查受试者数量的39.76%;其次是动态心电图检查不合格,占接受该项检查受试者的28.89%;心脏超声和依从性因素也各自占接受相关检查的10.0%和10.38%。结论可以从制定适合的实验室正常值范围和深度知情两个方面提高受试者的筛选成功率。

克唑替尼在非小细胞肺癌治疗中耐药问题的研究状况

克唑替尼能有效地治疗间变淋巴瘤激酶(ALK)融合基因阳性的非小细胞肺癌(NSCLC),给这类患者带来巨大的临床获益。ALK激酶区二次突变、ANL融合基因的扩增或其他信号通路的异常活化等都是非常典型的耐药机制。本文针对ALK阳性NSCLC患者经克唑替尼治疗后耐药机制及克唑替尼耐药后的应对策略的研究进展进行综述。

高效液相色谱质谱联用法测定人血浆中阿托伐他汀及代谢产物的质量浓度

目的：建立高效液相色谱－质谱联用法测定人血浆中阿托伐他汀及代谢产物的质量浓度。方法用固相萃取法处理血浆，用 XTerra · MS C18色谱柱，以95％乙腈－5 mmol· L－1碳酸氢铵为流动相，梯度洗脱，用正离子扫描，多反应监测方式测定样品中药物的质量浓度，检测专属性、标准曲线与定量下限、精密度与回收率、基质效应和稳定性。结果血浆样品中，阿托伐他汀、邻羟基化阿托伐他汀、对羟基化阿托伐他汀的回归方程分别为Y＝1．82X－2．94×10^－3（r＝0．9995），Y＝0．28X－4．14×10^－5（ r ＝0．9997），Y ＝0．60X＋1．11×10^－3（r＝0．9974）；阿托伐他汀及代谢产物在0．1～40．0 ng· mL－1线性关系良好，定量下限为0．1 ng· mL－1。血样日内与日间 RSD 均小于15％，平均回收率＞80％，且稳定性均较好。结论本方法简便快速、灵敏准确、特异性强，适用于阿托伐他汀及代谢产物的体内药代动力学研究。

HPLC-MS/MS法同时测定肝微粒体孵育体系中地西泮及其代谢产物的浓度

目的：建立同时测定地西泮及其代谢产物质量浓度的HPLC－MS／MS方法。方法色谱柱：Kromasil C18，流动相：乙腈－2 mmol· L－1乙酸铵水溶液（70∶30），流速：0．3 mL· min－1，柱温：40℃，用正离子扫描，多反应监测方式测定样品中药物的质量浓度。考察该方法的专属性、标准曲线和定量下限、精密度与回收率、基质效应及稳定性。结果肝微粒体孵育样品中，地西泮在20～1000 ng· mL－1线性关系良好（ r＞0．99），定量下限为20 ng· mL－1。去甲地西泮、替马西泮和奥沙西泮在2～100 ng· mL－1线性关系良好（ r＞0．99），定量下限为2 ng· mL－1。地西泮、去甲地西泮、替马西泮和奥沙西泮绝度回收率分别在55．47％～68．76％，64．84％～79．11％，68．32％～78．27％和72．66％～83．82％，日内与日间精密度均小于15％。结论本研究方法简便、快速、准确，适用于测定肝微粒体孵育样品中地西泮及其代谢产物的浓度。

高效液相色谱-质谱联用法测定人血浆中阿比朵尔的浓度

目的建立HPLC-MS/MS方法定量测定人血浆中阿比朵尔浓度。方法用蛋白沉淀处理血浆,以阿比朵尔-d_6为内标,色谱柱:Agilent Eclipse XDB-C_(18)柱(2.1 mm×150 mm,5μm),柱温:30℃,流动相:甲醇-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,流速:0.25 mL·min^(-1)。用正离子扫描,多反应监测方式(MRM)测定样品中药物的质量浓度。考察该方法的专属性、标准曲线与定量下限、精密度与回收率、基质效应和稳定性。结果血浆样品中阿比朵尔回归方程为y=1.52×10^(-1)x-1.38×10^(-3)(r=0.999 7),阿比朵尔在10~1000 ng·mL^(-1)内线性关系良好,定量下限为10 ng·mL^(-1)。日内、日间精密度的RSD均<15%,平均回收率>95%,稳定性较好。结论本方法简便快速、特异性强、灵敏准确,适用于人体血浆中阿比朵尔浓度的测定。

HPLC-MS/MS测定格列吡嗪健康人体药动学及生物等效性

目的建立一种简便、灵敏的测定人血浆中格列吡嗪血药浓度的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)方法,计算两种制剂在中国健康受试者的药动学参数并评价生物等效性。方法采用双周期、随机、自身交叉试验设计,24名受试者分别服用受试制剂或参比制剂5 mg,采用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定其血药浓度。计算受试制剂和参比制剂的药动学参数并评价其生物等效性。结果受试者口服受试制剂和参比制剂5 mg后格列吡嗪的平均ρmax分别为(251.25±61.94)和(240.13±52.43)μg·L-1,t1/2分别为(4.85±1.39)和(5.08±1.76)h,tmax分别为(3.35±1.22)和(3.38±1.35)h,AUC0-tn分别为(1 561.44±475.73)和(1 588.82±507.40)μg·h·L-1。结论建立的HPLC-MS/MS法灵敏,简单,可用于血浆中格列吡嗪血药浓度的测定;受试者服药后血药浓度结果经统计学分析,表明两种制剂所含的格列吡嗪生物等效。

HPLC-MS/MS法同时测定肝微粒体孵育体系中地塞米松及其代谢产物的浓度

目的建立HPLC-MS/MS法同时测定肝微粒体孵育体系中地塞米松及其代谢产物的浓度。方法选用Kromasil C18色谱柱（2.1 mm×150 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.01%甲酸水溶液（45∶55）,流速为0.35 m L·min-1,柱温为40℃,用正离子扫描,多反应监测方式测定,考察专属性、标准曲线与定量下限、精密度与回收率、基质效应和稳定性。结果地塞米松和6β-羟基地塞米松在20~1000,1~50 ng·m L-1内线性关系良好（r=0.998 0,r=0.998 5）,定量下限分别为20,1 ng·m L-1,其标准曲线回归方程分别为y=3.93×10-3x＋9.88×10-3,y=1.88×10-2x＋2.21×10-4。地塞米松和6β-羟基地塞米松的绝对回收率分别73.87%~92.18%,86.33%~87.22%,日内、日间相对标准偏差均在15%以内。结论本研究方法简便、快速、准确,适用于测定肝微粒体孵育样品中地塞米松及其代谢产物的浓度。

CYP2C19遗传多态性对中国健康受试者西酞普兰代谢的影响

目的研究中国健康男性受试者CYP2C19遗传多态性对西酞普兰体内代谢的影响。方法 24名中国健康男性受试者空腹单次口服西酞普兰片20 mg,服药前采静脉血,乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝,提取DNA,测定其基因型。分别在服药前和服药后一定时间点采静脉血各5 mL,离心取血浆,用HPLC-MS/MS法检测西酞普兰血药浓度,比较不同基因型受试者西酞普兰药代动力学的差异。结果 2例受试者(8.33%)为CYP2C19慢代谢;10例为CYP2C19快代谢,其中纯合子12例(50%)、杂合子10例(41.67%)。西酞普兰的代谢受CYP2C19的基因多态性影响较大,但也可能受年龄和体重的影响。结论西酞普兰临床应用时应查明患者CYP2C19基因型,并参考其年龄、体重等情况给药。

高效液相色谱—质谱联用法测定人血浆中克唑替尼的浓度

目的建立高效液相色谱-质谱联用法测定人血浆中克唑替尼的质量浓度。方法用蛋白沉淀法处理血浆,色谱柱:Aglient ZORBAX XDB-C8柱,流动相:甲醇-0.1%甲酸+2 mmol·L^(-1)甲酸铵,梯度洗脱,流速:0.35 m L·min^(-1),柱温:室温,用正离子扫描,多反应监测方式测定样品中药物的质量浓度。考察该方法的专属性、标准曲线与定量下限、精密度与回收率、基质效应和稳定性。结果血浆样品中克唑替尼的回归方程为y=3.91×10-3x+1×10-3(r=0.999 4);克唑替尼在5～1000 ng·mL^(-1)内线性关系良好,最低定量下限为5 ng·mL^(-1)。血样日内与日间RSD均小于15%,平均回收率>95%,且稳定性较好。结论本方法简便快速、灵敏准确、特异性强,适用于人体克唑替尼血药浓度的测定。

液相色谱法串联质谱法测定人血浆中雌二醇含量

目的建立血浆中雌二醇含量测定的液相色谱串联质谱方法。方法以雌二醇-d3为内标,用正己烷-甲基叔丁基醚(50∶50)对血浆中雌二醇进行提取,在碱性条件下经丹磺酰氯衍生化。色谱柱:Atlantis T3(2.1 mm×100 mm,5.0μm),流动相:乙腈-0.1%甲酸,流速:0.5 m L·min^(-1),柱温:30℃,检测器:API5500,进样量:10μL。用电喷雾离子化源以正离子模式,用多重反应监测模式进行检测。考察该方法的专属性、标准曲线与定量下限、精密度与回收率、稳定性。结果雌二醇在1.0~100.0 pg·mL^(-1)内线性良好(r=0.998 5),最低定量下限为1.0 pg·mL^(-1),其标准曲线为y=5.47×10^(-2)x+4.67×10^(-2)。日间、日内精密度均小于15%,绝对回收率在97%以上,稳定性良好。结论本方法准确度好,灵敏度高,专属性强,适用于雌二醇透皮贴片的药代动力学研究。

格列吡嗪在健康人体的生物等效性

目的评价2种格列吡嗪片的生物等效性。方法用双周期、自身交叉试验设计,24名健康男性受试者分别单次口服受试药物和参比药物格列吡嗪片5mg,于给药前及给药后不同时间点采集静脉血。血样经预处理后用高效液相色谱-质谱(HPLC-MS/MS)法测定血浆中格列吡嗪的浓度,用WinNonlin 6.1计算主要药代动力学参数及相对生物利用度。结果受试药物与参比药物格列吡嗪的tmax分别为(3.40±1.54),(3.71±1.30)h,Cmax分别为(471.88±108.10),(480.58±132.63)μg·L-1,t1/2分别为(5.15±1.31),(5.32±1.27)h;AUC0-t分别为(2805.71±592.61),(2873.40±697.57)μg·L-1·h,受试药物的相对生物利用度F0-t、F0-∞分别为(105.77±27.84)%和(105.28±27.63)%。结论受试药物和参比药物格列吡嗪具有生物等效性。

高效液相色谱-质谱联用法测定人血浆中比卡鲁胺的浓度

目的建立高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS/MS)定量测定人血浆中比卡鲁胺的浓度。方法用蛋白沉淀处理血浆,以比卡鲁胺-d4为内标,色谱柱:Agilent ZORBAX SB-C18柱(2.1 mm×50.0 mm,3.5μm),柱温:20℃,流动相:甲醇-0.1%甲酸+2 mmol·L-1甲酸铵水溶液,等度洗脱,流速:0.35m L·min^(-1)。用负离子扫描模式,多反应监测方式测定样品中药物的质量浓度。考察该方法的专属性、标准曲线与定量下限、精密度与回收率、基质效应和稳定性。结果血浆样品中比卡鲁胺回归方程为y=6.82×10^(-3)x+1.33×10^(-2)(r=0.999 1)。比卡鲁胺在10~1500 ng·mL^(-1)内线性关系良好,定量下限为10ng·mL^(-1)。日内、日间精密度的RSD均<15%,平均回收率>95%,稳定性较好。结论本方法简便快速、特异性强、灵敏准确,适用于人体血浆中比卡鲁胺浓度的测定。

HPLC-MS/MS法测定人血浆中伊立替康及主要代谢产物的浓度

目的建立液质联用(HPLC-MS/MS)法同时测定人血浆中伊立替康(CPT-11)及主要活性代谢产物7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)及无活性的葡萄糖醛酸化SN-38(SN-38G)的浓度。方法以氘代伊立替康、氘代SN-38、氘代SN-38G为内标,沉淀蛋白法进行提取。色谱柱:ZORBAX XDBC8(2.1 mm×50 mm,5μm),水相:0.1%甲酸,有机相:纯甲醇,进行梯度洗脱,流速:0.35 m L·min-1。通过电喷雾离子源,以正离子多反应监测模式(MRM)进行检测,考察该方法的专属性、标准曲线和定量下限、精密度和准确度、稳定性、基质效应和提取回收率。结果伊立替康标准曲线方程为y=1.32×10-3x-5.30×10-3(r=0.999 7),在10~2000 ng·m L-1线性关系良好,定量下限为10 ng·m L-1。SN-38标准曲线方程为y=8.50×10-3x+4.00×10-3(r=0.999 5),在2~400 ng·m L-1线性关系良好,定量下限为2 ng·m L-1。SN-38G标准曲线方程为y=6.53×10-3x-1.28×10-3(r=0.9997),在5~1000 ng·m L-1线性关系良好,定量下限为5 ng·m L-1。日内与日间RSD均小于15%,平均回收率>92%。结论该方法简便快速,准确度高,灵敏度好,专属性强,适用于同时测定人血浆中伊立替康、SN-38及SN-38G的浓度。

高效液相色谱法测定黄芩素葡萄糖醛酸化产物的浓度

目的建立黄芩素葡萄糖醛酸化代谢产物B-7G和B-6G的高效液相色谱方法。方法用Kromasil C18柱（4．6mm×150mm，5μm），柱温40℃，流动相为乙腈（A）和0．2％磷酸水溶液（B），梯度洗脱，检测波长270nm，流速1mL·rain-1，进样量20乩。结果黄芩素葡萄糖醛酸化产物B一7G和B一6G分别在0．1～1000．0，0．1～500．0μmol·L。具有良好的线性关系，r分别为0．9993和0．9995。日间、日内精密度（RSD）均小于10％，回收率和稳定性均符合要求。结论本研究方法简便、快速、准确，适用于大样本连续分析，可以为黄芩素的体外代谢研究提供平台。