线粒体在心肌缺血再灌注损伤中的作用研究进展

心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的关键环节之一是细胞能量供应缺乏。线粒体作为细胞的能量供应站,与缺血再灌注损伤机制的多个环节密切相关,其功能障碍造成缺血再灌注对心肌细胞的严重损害的同时又能启动保护机制减轻MIRI。目前对线粒体在MIRI中所起作用的研究已深入到分子水平,以线粒体上某些分子如线粒体通透性转换孔和敏感性钾通道等为靶点,探索治疗MIRI的新策略成为近来研究的热点。本文就线粒体与MIRI相关的分子机制和以线粒体为治疗靶点的药物研究等方面做一综述。

N-甲基-D-天冬氨酸受体激活在脑缺血中的神经保护及神经毒性作用研究进展

N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)介导的神经元兴奋毒性损伤与脑缺血发生密切相关,但生理水平的NMDAR却具有神经保护、抵抗损伤的功能,并且在突触可塑性及突触传递方面发挥重要作用。这种功能的双面性正是使用NMDAR拮抗剂治疗脑缺血、卒中等疾病临床效果欠佳的原因之一。深入了解NMDAR及其介导的促神经元存活或死亡信号通路在缺血性脑损伤中的作用,在不影响促神经元存活以及突触可塑性通路前提下,选择性地阻断NMDAR介导的神经元死亡信号通路,是临床治疗缺血/缺氧性脑损伤、脑卒中等疾病的发展方向。本文就NMDAR激活介导的信号通路在缺血性脑损伤中的作用作一综述。

脂氧合酶代谢与肺癌研究进展

脂氧合酶(LOX)是非血红素铁双加氧酶,能催化底物生成各种类花生酸物质,在肺癌预防和治疗中发挥重要作用,有望成为新的抗肺癌药物作用靶点。根据氧分子插入底物的位点不同,人类LOX主要分为5-LOX、12-LOX和15-LOX,5-LOX和12-LOX具有促进肺癌细胞生长和肿瘤转移的作用,而15-LOX的两种亚型15-LOX-1和15-LOX-2主要具有抗肺癌的作用。本文主要综述了各种LOX代谢通路在肺癌发生发展中的作用特点。此外,还介绍了LOX依赖氧化应激、过氧化物酶体增殖物活化受体和P53的抗肺癌机制及其作为肺癌药物作用靶点的研究进展。

多硫代二酮哌嗪类化合物C87体外对肿瘤细胞生长的抑制作用及对活性氧产生的影响

目的研究多硫代二酮哌嗪类化合物C87对肿瘤细胞生长的影响及其可能机制。方法用磺酰罗丹明B法观察C87 0.05~1μmol·L-1与A549,HCT116,He La和SMMC7721作用24,48和72 h对肿瘤细胞存活率的影响,并计算50%生长抑制浓度（GI50）;用流式细胞术检测C87 0.1~2.5μmol·L-1作用HCT116和He La细胞6 h,C87 2.5μmol·L-1作用0~6 h活性氧（ROS）的生成量;用流式细胞术检测C872.5μmol·L-1伴随给予抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）作用HCT116和He La细胞6 h ROS的生成量;用SRB法观察C87 0.05~1μmol·L-1伴随给予NAC作用24和48 h对HCT116细胞存活率的影响。结果C87 0.05~1μmol·L-1作用24,48和72 h,可明显抑制A549,HCT116,He La和SMMC7721细胞存活（P〈0.05）,且具有浓度依赖性（72 h,r2=0.946,0.989,0.973和0.984,P〈0.05）;C87 1μmol·L-1与上述4种肿瘤细胞作用24,48和72 h能时间依赖性地抑制细胞存活（r2=0.983,0.956,0.951和0.873,P〈0.05）。C87 0.25~2.5μmol·L-1与He La细胞和HCT116细胞作用6 h,可诱发细胞内ROS产生,且呈浓度依赖性（r2=0.760,P=0.045;r2=0.987,P=0.001）;C87 2.5μmol·L-1作用0.5~6 h,诱导ROS的产生呈时间依赖性（r2=0.886,P=0.017;r2=0.994,P=0.000）。给予抗氧化剂NAC后能明显抑制C87引起的He La细胞和HCT116细胞ROS生成（P〈0.05）,NAC 5和10 mmol·L-1可明显逆转C87引起的HCT116细胞死亡,GI50值明显增大,作用24 h时GI50为1.446和1.134μmol·L-1（C87处理组为0.513μmol·L-1）;处理48 h时GI50为0.882和1.166μmol·L-1（C87处理组为0.333μmol·L-1）。结论化合物C87对A549,HCT116,He La和SMMC7721肿瘤细胞的生长具有抑制作用,其机制可能与其诱导细胞内氧化应激有关。

梭曼中毒后不同时间大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位2A/2B及GABAα1受体表达的变化

目的观察梭曼染毒大鼠海马组织N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚单位NR2A,NR2B及GABAα1受体在中毒后不同时间mRNA与蛋白表达的变化。方法大鼠先ip给予HI-6 125mg·kg-1一次性sc给予梭曼160μg·kg-1,采用HE染色及TUNEL染色观察中毒后不同时间大脑海马组织病理损伤及神经元细胞凋亡;实时荧光定量PCR及Western印迹法测定海马组织中NR2A,NR2B及GABAα1受体在梭曼染毒后30min,1h,2h,6h,24h,48h及7d的表达变化。结果组织病理学检查结果显示,在梭曼染毒后1h出现明显的细胞损伤,在染毒后24 h细胞损伤最为严重;TUNEL染色显示,在染毒后6h出现明显细胞凋亡,在染毒后24h凋亡最为严重。染毒后2h,与正常对照组比较,NR2A及NR2B蛋白表达均显著上调,但GABAα1受体到染毒后24h才出现表达明显增加。梭曼染毒后2～6h,与正常对照组比较,海马NR2A,NR2B及GABAα1受体mRNA表达显著上调,染毒后24～48h,NR2A及NR2B受体mRNA出现不同程度降低,至染毒后7d恢复正常水平。结论梭曼染毒后期,出现NMDA受体亚单位NR2A,NR2B及GABAα1受体mRNA及蛋白表达异常;该表达异常可能与海马神经细胞损伤及凋亡存在一定关系。

纳米化酰胺磷定对梭曼中毒小鼠乙酰胆碱酯酶的重活化作用

目的：评价比较基于不同载药模式的纳米化酰胺磷定（HI-6）对梭曼中毒小鼠外周及中枢乙酰胆碱酯酶（AChE）的重活化作用。方法制备以人血清白蛋白纳米粒（HSA NP）为载体挂载 HI-6（HSA-HI-6 NP）、聚乳酸-羟基乙酸纳米粒（PLGA NP）为载体包裹 HI-6（PLGA-HI-6 NP）及纳米多孔硅球（MSN）为载体吸附 HI-6（MSN-HI-6）的3种纳米化 HI-6。电镜进行物理表征；测定体外释药速率。观察梭曼染毒（120μg·kg -1，sc）小鼠 iv 给予含恒量 HI-622 mg·kg -1的3种纳米化 HI-6对外周及中枢中毒 AChE 的重活化作用。结果3种纳米载体均符合纳米药物基本特征。体外释药速率为 HI-6＞HSA-HI-6 NP ＞MSN-HI-6＞PLGA-HI-6 NP。对中毒小鼠全血 AChE 的重活化作用结果显示给予 HSA-HI-6 NP，MSN-HI-6及HI-6组中毒小鼠全血 AChE 的重活化率在20％～30％，组间比较无显著差异；但均显著高于 PLGA-HI-6 NP（6．2％）给药组（P ＜0．01）；在中毒小鼠脑 AChE 的重活化作用结果中，HSA-HI-6 NP 组重活化率（15．3％）显著高于 PLGA-HI-6 NP（3．3％）组及 HI-6组（6．3％）（P＜0．01）；MSN-HI-6组（10．2％）则仅显著高于 PLGA-HI-6 NP（3．3％）给药组（P ＜0．01）。结论不同载药模式的纳米化 HI-6对外周及中枢中毒AChE 的重活化效率存在显著差异，HSA-HI-6 NP 对外周及中枢中毒 AChE 均具较高重活化作用。

紫金砂对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察紫金砂(Angelica polymorpha Maxim.)对家兔心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的保护作用。方法 56只新西兰大耳白兔随机分为7组:假手术组、缺血再灌注模型组、复方丹参滴丸(1.0 g/kg)组、维拉帕米(0.2 mg/kg)组、紫金砂(0.25、0.5和1.0 g/kg)组。采用结扎冠状动脉左前降支30 min,再灌注120 min的方法建立家兔MIRI模型。复方丹参滴丸组及紫金砂各剂量组实验前灌胃给药7 d;维拉帕米组于缺血前10 min采用蠕动泵股静脉一次性滴注给药。记录手术前后不同时间点心电图;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色方法测定心肌梗死面积;比色法检测血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。结果与模型组比较,各给药组动物异常升高的T波及S-T段明显降低,心肌梗死面积明显减小(P<0.01);紫金砂各给药剂量组组间比较,紫金砂0.5及1.0 g/kg给药组动物心肌梗死面积明显低于紫金砂0.25 g/kg给药组(P<0.01),但复方丹参滴丸组、维拉帕米组、紫金砂0.5及1.0 g/kg给药组组间比较无显著差异。与模型组比较,各给药组CK、LDH及MDA值明显降低(P<0.01),且SOD活性明显升高(P<0.01);各给药组组间比较,除紫金砂1.0 g/kg给药组动物血清CK值明显低于紫金砂0.25 g/kg组外(P<0.05),其余各给药组血清学指标(CK,LDH,SOD活性及MDA含量)组间比较均无统计学意义。结论紫金砂对MIRI具有明显保护作用,其作用机制可能与其抗氧化作用有关。

HI-6人体血清白蛋白纳米粒的制备及其对梭曼中毒小鼠脑AChE重活化作用评价

迅速恢复中毒乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)活性是神经性毒剂中毒救治最关键的环节.血脑屏障的存在限制了具有重活化作用的抗毒药物以有效治疗剂量进入中枢.本研究以已知重活化作用最强的重活化剂酰胺磷定(HI-6)为目标药物,通过去溶剂化法制备了人体血清白蛋白纳米粒,通过静电作用将HI-6分子装载在纳米粒表面,合成装载HI-6的人体血清白蛋白纳米粒;在斑马鱼及神经性毒剂梭曼染毒小鼠上,对药物穿透血脑屏障能力及中枢中毒AChE重活化作用进行了评价.结果表明,装载HI-6人体血清白蛋白纳米粒在物理表征上符合纳米药物基本特征;相对于自由HI-6,HI-6人体血清白蛋白纳米粒能够透过血脑屏障,并将中枢中毒AChE活性提升2倍以上,表明人体血清白蛋白纳米粒成功携带HI-6分子进入中枢.本文建立了一种无毒、高效、小尺寸中枢靶向性纳米粒的制备方法,基于该方法制备的纳米重活化剂,在脑内可有效释放目标药物并迅速发挥解毒作用.