T细胞免疫球蛋白及黏蛋白3在神经系统疾病中的研究进展

神经炎症是神经系统对外界刺激的防御性反应,但过度及持续的神经炎症也是神经系统疾病损伤最常见的病理生理机制之一。神经炎症反应涉及神经胶质细胞(包括小胶质细胞和星形胶质细胞)的激活及炎性因子、趋化因子释放等,与多种神经系统疾病的发生发展密切相关。近年来,神经炎症在神经系统疾病中的作用越来越受到重视,多项基于此机制的免疫治疗方案已进入临床研究阶段。

Tim-3对神经小胶质细胞极化的调控作用及机制研究

目的探究T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域分子-3(Tim-3)对小胶质细胞极化的调控作用及机制。方法借助流式细胞术检测神经小胶质细胞BV-2上Tim-3及其配体的表达情况;利用ELISA、实时定量PCR方法检测阻断Tim-3功能对BV-2细胞因子表达的影响,进而明确Tim-3对小胶质细胞M1/M2极化的调控作用;通过Western印迹阐明Tim-3调控小胶质细胞极化的分子机制。结果 Tim-3及其配体分子半乳糖凝集素-9(Gal-9)表达于BV-2细胞;阻断Tim-3信号显著增强了BV-2细胞M1极化相关的促炎性细胞因子,包括白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、IL-12、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达,抑制了M2极化抗炎性细胞因子,如转化生长因子β(TGF-β)和IL-10的表达,提示Tim-3参与了小胶质细胞极化的调控。同时,分子机制研究发现,Tim-3可能通过抑制小胶质细胞中视黄酸诱导基因蛋白Ⅰ(RIG-Ⅰ)和核因子κB (NF-κB)的表达及活化发挥极化调控功能。结论免疫检查点分子Tim-3参与了BV-2细胞的极化调控。该发现为通过Tim-3探索脑损伤及脑功能障碍性疾病的治疗策略提供了新的实验依据。

Tim-1抗体在防治埃博拉及马尔堡病毒感染中的作用研究

目的利用假病毒方法评价T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域分子1 (Tim-1)抗体在防治埃博拉病毒(EBOV)和马尔堡病毒(MARV)感染中的可能作用。方法通过转染EBOV及MARV糖蛋白质粒,制备埃博拉及马尔堡假病毒,以HEK-293T细胞为靶细胞,利用假病毒评价抗人Tim-1(h Tim-1)抗体对EBOV及MARV的防治作用。结果成功制备了能感染HEK-293T细胞的埃博拉、马尔堡假病毒,发现Tim-1在HEK-293T细胞上的表达水平影响假病毒感染效率。同时,成功表达了抗h Tim-1抗体,ELISA及FACS实验证实了其结合特异性,发现制备的Tim-1抗体能中和埃博拉、马尔堡假病毒的感染,并显示出与埃博拉及马尔堡假病毒抗体的协同作用。结论制备的Tim-1抗体显示了良好的中和活性,为埃博拉、马尔堡假病毒感染的防治提供了新的手段,认为假病毒是可行的抗体功能评价方法。

生物钟对骨骼肌功能调节作用的研究进展

生物钟是使生命机体行为、生理、生化呈现周期节律的定时体系,其破坏会引起体内稳态的紊乱,导致一系列相关疾病的发生和发展。近年研究发现,生物钟基因的缺失或突变,会导致骨骼肌功能的缺陷。分析表明,生物钟通过影响各种蛋白因子的分泌节律,影响骨骼肌功能的完整性。该文就生物节律及生物钟系统对骨骼肌功能的影响进行综述。

Tim-3对巨噬细胞葡萄糖转运体1表达的调节机制研究

目的探讨T细胞免疫球蛋白及黏蛋白结构域分子-3(T cell immunoglobulin and mucin-domain containing molecule-3,Tim-3)对巨噬细胞葡萄糖转运体1(glucose transporter 1,GLUT1)的表达及其对细胞功能的影响,并初步探索其影响机制。方法使用Tim-3 siRNA敲低Raw264. 7细胞系观察GLUT1蛋白的表达,随后使用不同浓度Tim-3融合蛋白、Tim-3激动抗体,阻断和激活小鼠源巨噬细胞系Raw264. 7,在基因和蛋白水平观察GLUT1、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、Tim-3以及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α) 4项指标的变化。结果 Tim-3敲低的Raw264. 7细胞系GLUT1蛋白表达水平明显升高;激活、抑制巨噬细胞Tim-3信号能分别抑制和促进GLUT1、TNF-α的基因和蛋白表达以及GAPDH基因表达,但Tim-3的基因和蛋白水平以及GAPDH蛋白水平并无显著变化。结论 Tim-3负调控巨噬细胞GLUT1表达,进一步影响TNF-α分泌,参与TNF-α转录后调控的GAPDH可能参与其中的调节机制。

Tim-3调控T细胞IL-2表达的机制研究

目的探究T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(Tim-3)对白细胞介素-2(IL-2)的调控作用及机制。方法通过酶联免疫吸附实验(ELISA)、流式细胞术(FACS)以及实时定量荧光聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测T细胞活化后,Jurkat高表达Tim-3(Jurkat^Tim-3-high)与低表达Tim-3(Jurkat^Tim-3-low)细胞系中IL-2的基因转录及蛋白表达水平;使用中和性抗人Tim-3抗体阻断Jurkat细胞系中Tim-3功能,ELISA及RT-PCR方法检测IL-2蛋白分泌及转录水平变化;通过Western蛋白免疫印迹法检测Tim-3对IL-2表达调控相关分子[包括蛋白激酶C(PKC)β1及核因子(NF)-κB亚基P65]的磷酸化的影响。结果ELISA、FACS和RT-PCR结果均表明,Tim-3抑制IL-2的表达,使用抗人Tim-3抗体阻断后,IL-2的表达上调;Western印迹结果显示,与Jurkat^Tim-3-low细胞相比,Jurkat^Tim-3-high细胞中蛋白激酶PKCβ1及NF-κB亚基P65的磷酸化受到明显抑制。使用中和性抗人Tim-3抗体阻断后,PKCβ1及P65的磷酸化明显增强。结论Tim-3对IL-2的基因转录及蛋白表达起负性调控作用,并且可能是通过抑制NF-κB(NF-κB/p65)及PKCβ1的磷酸化,从而抑制IL-2的产生。

睡眠剥夺对大鼠肝脏生物钟基因表达水平的影响

目的探讨72h睡眠剥夺（sleepdeprivation，sD）对大鼠肝脏生物钟基因表达水平的影响。方法将12只大鼠随机分为正常对照组和SD组。SD组大鼠使用SD仪进行SD72h后，暴露腹腔取肝，用RT—PCR方法检测大鼠肝组织中生物钟基因mRNA表达水平的变化，并对生物钟基因的蛋’白表达产物进行免疫印迹分析。结果与正常对照组相比，sD组大鼠肝脏生物钟基因clock、npas2、rev—erbct的mRNA表达水平呈显著下调，per1、per2、rorwmRNA表达水平显著升高，而bmall和crylmRNA表达水平无显著变化。与正常对照组相比，72hSD后肝组织BMALl、CLOCK、NPAS2、CRYl、REV-ERBa蛋白表达水平显著下调，而PERl、PER2、RORa蛋白表达水平显著升高。结论72hSD可同时存St-景知翻谣7k罩椿导女翕肝g种枋．c0辟物钟其阁古白异膏嘉扶．

睡眠剥夺对大鼠脾脏淋巴细胞生物钟基因表达水平的影响

目的探讨72 h睡眠剥夺(sleep deprivation,SD)对大鼠脾脏淋巴细胞生物钟基因表达水平的影响。方法将大鼠随机分为正常对照组和SD组。SD组大鼠使用SD仪进行睡眠剥夺72 h后,取脾脏制备成单细胞悬液,利用淋巴细胞分离液获得淋巴细胞;分别通过RT-PCR和免疫印迹方法检测大鼠脾淋巴细胞中生物钟基因mRNA和蛋白水平的变化。结果与正常对照组相比,SD组大鼠脾脏生物钟基因bmal1、clock、per2、rev-erbα的mRNA相对表达水平呈现显著下调,而npas2、per1、rorα、cry1 mRNA相对表达水平无显著变化。与正常对照组相比,72 h SD后脾脏淋巴细胞BMAL1、NPAS2、CRY1、RORα蛋白表达水平显著下调,PER1蛋白表达水平呈升高趋势,而REVERBα蛋白表达水平无显著变化。结论 72 h SD应激条件可在转录和翻译水平诱导大鼠脾多种核心生物钟基因表达水平发生异常改变。

急性睡眠剥夺对胆汁酸转运体振荡表达的影响

目的探讨急性睡眠剥夺(SD)应激条件下大鼠肝组织胆汁酸转运体昼夜振荡表达的变化规律。方法将大鼠随机分为对照组和实验组。实验组大鼠使用SD仪在24 h昼夜周期内进行急性SD。分离血清后,利用胆汁酸检测试剂盒分析血清中总胆汁酸水平;取肝组织,加入TRIzol试剂后利用组织匀浆仪裂解细胞,通过RT-PCR方法检测肝组织中胆汁酸转运体振荡表达变化。结果与对照组相比,在SD 16 h后总胆汁酸水平显著升高。SD应激条件下,肝组织中胆汁酸转运体钠离子-牛磺胆酸协同转运蛋白(NTCP)和有机阴离子转运多肽(OATP)昼夜振荡变化规律消失,表达水平呈现降低变化;胆汁酸转运体胆盐输出泵(BSEP)和多药耐药相关蛋白2(MRP2)昼夜振荡表达受SD影响相对较小,但MRP2表达峰值呈现一定降低。结论急性SD应激条件可能通过影响胆汁酸转运体NTCP和OATP的振荡表达导致血清总胆汁酸水平异常升高。