人纤维蛋白水凝胶的制备组方对其透明度的影响研究

目的研究纤维蛋白原、凝血酶及无机盐对纤维蛋白水凝胶透明度的影响规律,获得可制备高透明度纤维蛋白水凝胶的组方条件。方法采用单因素实验设计考察不同成分的浓度变化对水凝胶透明度的影响。目力观察水凝胶外观并测定其在全可见光波段(300~800 nm)的吸光度以评价其透明度。利用扫描电子显微镜对水凝胶进行微观结构观察。结果随着纤维蛋白原与氯化钠浓度升高,制得水凝胶的外观变透明、吸光度降低、内部纤维更细、孔径更小。氯化钙浓度升高,水凝胶透明度降低。凝血酶浓度改变对水凝胶透明度无明显影响。结论在高纤维蛋白原浓度(81 mg·mL^(-1))或氯化钠质量浓度≥5 mg·mL^(-1)条件下可制得高透明度人纤维蛋白水凝胶,高透明度人纤维蛋白水凝胶具有较细的纤维与较小的孔径。

纤维蛋白原与凝血酶药物混悬液的制备方法研究

目的使用不同方法制备纤维蛋白原与凝血酶的药物混悬液,优选制备工艺并初步评价该混悬液的制剂性质。方法无水乙醇作为分散剂,采用研磨筛分法、胶体磨研磨法和高速分散均质法制备纤维蛋白原、凝血酶与氯化钙的药物混悬液,考察制得混悬液的粒径分布、沉降体积比、温度、pH、黏度,检测混悬后纤维蛋白原药物的凝固活力,计算药物回收率,并综合以上考察项对该混悬工艺进行评估。结果研磨筛分法回收率低于50%,胶体磨研磨法易引入杂质,最终优选高速分散均质法。研究确定分散机单次处理程序为转速15.0×10^(3)r·min^(-1),粉碎时间2 min,共循环10次,所得混悬液粒径为6.46~161.13μm,中位粒径﹤50μm,5 min沉降体积比高于90%,药液处理前后温度变化控制在5℃之内,pH值范围为7.5~8.5,黏度值范围为20~35 mPa·s,药物回收率高于90%,且纤维蛋白原药物活性符合《中国药典》(2020年版)标准。结论高速分散均质法是1种可行的纤维蛋白原与凝血酶药物混悬液制备方法,所得混悬液的生物活性良好、可用于纤维蛋白止血贴的制备。

基于Vero E6细胞的水痘-带状疱疹病毒抗膜抗原荧光抗体试验的建立与评价

目的 建立并评价基于非洲绿猴肾细胞(Vero E6)的水痘-带状疱疹病毒(VZV)抗膜抗原荧光抗体(FAMA)试验方法。方法 在VZV-Oka减毒活疫苗株在Vero E6细胞中的适应培养毒株VZV-Oka-E6的基础上,首先使用3个不同感染剂量(10、10和10TCID)的VZV-Oka-E6病毒株感染Vero E6细胞,于显微镜下观察病变情况确定最佳的VZV-Oka-E6病毒株感染量;然后对比使用不同固定液固定感染细胞后制备的固定抗原片可检测到的灵敏度确定最优的固定液,从而建立基于Vero E6细胞的中和抗-VZV检测FAMA试验方法;采用建立的FAMA法,检测不同效价的VZV免疫球蛋白国际标准品,确定该方法的敏感性;检测人单纯疱疹病毒(HSV)1、2型特异性抗体,评价该方法的特异性;分别使用同一批次制备和4个不同批次制备的VZV感染细胞固定抗原片检测VZV免疫球蛋白国际标准品的中和抗-VZV,确定该方法的批内和批间重复性;检测已知的3种效价的VZV免疫球蛋白国际标准品,评价该方法的相对准确性。分别应用新建立FAMA法和ELISA法检测20(人)份单采血浆样品的抗-VZV效价,对2种试验检测结果做Spearman相关性分析。结果 通过优化确定了FAMA试验中最佳的VZV-Oka-E6病毒株感染量为10TCID,-20℃预冷的丙酮作为固定液。FAMA试验检测中和抗-VZV效价的灵敏度为31.25 mIU/mL;检测HSV 1、2型特异性抗体时结果为阴性;使用同一批次和4个不同批次制备的VZV感染细胞固定抗原片检测VZV免疫球蛋白国际标准品,变异系数分别为29.95%和26.71%;对3种效价VZV免疫球蛋白国际标准品的检测(值)与其理论值一致;FAMA法和ELISA法对20份单采血浆样品检测抗-VZV结果的相关系数为0.268。结论 所建立的FAMA试验检测中和抗-VZV效价具有良好的敏感性、特异性、重复性和相对准确性,可用于单采血浆和水痘-带状疱疹免疫球蛋白(VZIG)产品的中和抗-VZV效价检测。

血浆冻干制剂的制备与质量评价

目的采用冷冻干燥工艺制备血浆冻干制剂,并对其质量进行评价。方法检测血浆共晶点并设定血浆冻干程序,将血浆样品进行冷冻干燥,对冻干后的血浆外观形态、水分含量、复溶时间进行检测,并对比冻干前后血浆的酸碱度、凝血参数等指标,评价所制备的血浆冻干制剂样品质量。结果利用该研究设定的冷冻干燥工艺制备的血浆冻干制剂外观形态良好,水分含量为(1.955±0.321)%,复溶时间为(12.98±0.56)min;冻干后使用无菌注射用水复溶的血浆酸碱度为8.15±0.10,略高于冻干前;血浆冻干制剂中测定的大部分血浆蛋白(12/15)的活性/含量与冻干前血浆比较无显著差异(P>0.05);仅凝血因子Ⅴ、凝血因子Ⅷ、纤溶酶原活性低于冻干前血浆(P<0.05),回收率分别为80.70%、78.70%和86.70%;凝血酶原时间与冻干前血浆相当(P>0.05),活化部分凝血活酶时间显著延长(P<0.05)。结论建立的冷冻干燥工艺成功制备了血浆冻干制剂,为国内冻干血浆制品的开发奠定了基础。

静注人免疫球蛋白(pH4)中水痘-带状疱疹病毒中和抗体效价的检测

目的分析国内静注人免疫球蛋白(IVIG)(pH4)制品中水痘-带状疱疹病毒(VZV)中和抗体效价水平,为水痘-带状疱疹人免疫球蛋白(VZIG)的研制提供参考。方法采用微量细胞病变中和试验方法检测国内6家血液制品企业生产的15批IVIG(pH4)制品中VZV中和抗体效价,应用VZV免疫球蛋白国际标准品进行标定。结果15批IVIG(pH4)制品中VZV中和抗体平均效价为3.78 U/ml(效价范围1.95~8.06 U/ml),平均比活为72.72 U/g(比活范围39.01~161.16 U/g),远低于国外上市VZIG产品比活。结论国内IVIG(pH4)制品中VZV中和抗体效价水平较低,需筛选含高效价VZV中和抗体的单采血浆作为原料进行VZIG产品的制备。