金黄色葡萄球菌B型肠毒素的免疫磁分离间接竞争化学发光检测法

目的建立快速、简便、灵敏度高的免疫磁分离(Immune magnetic separation,IMS)间接竞争化学发光法(Chemiluminescence,CL)检测金黄色葡萄球菌B型肠毒素(Staphylococcal enterotoxin B,SEB)。方法首先,将SEB连接磁球,通过酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)分析确定单克隆抗体的最佳稀释度,然后对不同包被缓冲液、单抗与游离SEB反应时间、单抗与磁球上SEB反应时间、单抗与酶标抗体反应时间及鲁米诺发光系统最佳检测时间进行优化,最后用检测灵敏度、加标回收率以及特异性对该实验方法进行评价。结果结果表明,抗SEB单克隆抗体的最佳稀释浓度为0.82μg/ml,使用浓度为2%的脱脂乳粉作为最佳封闭液,酶标二抗稀释度为1∶4 000,单抗与SEB反应时间、单抗与磁球反应时间、单抗与酶标抗体反应时间、化学发光催化最佳检测时间分别是20、30、15、5 min。该方法的线性回归方程为y=-0.161 6log5x+0.826 6,R2=0.992 4;检出限为4 ng/ml,用本地超市购买的脱脂牛奶、低脂牛奶和鲜牛奶进行加标回收,回收率在89.45%~110.5%之间。结论成功构建了基于免疫磁分离的间接竞争化学发光(Immune magnetic separation chemiluminescence,IMS-CL)检测金黄色葡萄球菌B型肠毒素的方法。