淫羊藿总黄酮对大鼠实验性骨质疏松生化学指标的影响

目的 探讨淫羊藿总黄酮防治大鼠实验性骨质疏松症过程中骨代谢生化指标的变化及其意义。方法 采用维甲酸灌胃造成大鼠实验性骨质疏松症模型 ,检测灌服高、中、低 3种剂量的淫羊藿总黄酮后大鼠血清生化指标、尿生化指标、骨矿含量及骨密度指标的变化 ,并与模型组、正常对照组和阳性对照组进行比较。结果 3个剂量组的血清E2 、T和BGP水平均高于模型组 ,尿Ca/Cr、DPD和血清PTH水平均低于模型组 ,股骨Ca、P和骨密度与正常对照组接近 ,与模型组差异有显著性。结论 淫羊藿总黄酮对维甲酸造成的大鼠骨质疏松症有明显的防治作用 ,骨代谢生化指标变化情况与骨密度的变化相一致 。

含淫羊藿总黄酮大鼠血清对成骨细胞发育的影响

目的:研究含淫羊藿总黄酮大鼠血清对体外培养成骨细胞(ROB)增殖和分化的影响。方法:将淫羊藿总黄酮(TFE)以0.1,1,10,100μg.mL-14种质量浓度、含淫羊藿总黄酮大鼠血清(SRAT)以2.5%,5%,10%3种质量浓度分别加入新生大鼠颅骨成骨细胞培养液中,研究它们对细胞增殖和分化成熟的影响。细胞增殖采用MTT法进行分析,细胞分化是于培养第4,8,12,20天分别检测碱性磷酸酶活性(比色法)、骨钙素分泌量(放射免疫法)、钙盐沉积量(比色法)和矿化结节(组织化学法)等。结果:TFE 4种质量浓度均对ROB细胞增殖和分化无明显影响,2.5%和5%SRAT则表现出强烈的刺激细胞增殖活性并显著提高碱性磷酸酶活性、骨钙素分泌量、矿化结节数和钙盐沉积量。结论:淫羊藿总黄酮代谢产物强烈刺激成骨细胞的增殖并促进其分化成熟,说明淫羊藿总黄酮代谢产物具有抗骨质疏松的活性。

淫羊藿总黄酮含药血清促进骨髓间充质干细胞增殖与成骨性分化

目的 研究淫羊藿总黄酮(Total flavonoid extract of Eimedium sagittatum,TFE)对大鼠骨髓间充质干细胞(Mysenchymal stem cells,MSCs)增殖和成骨性分化的影响。方法将TFE和含淫羊藿总黄酮大鼠血清(Serum of rats administered TFE,SES)分别以不同浓度加入大鼠MSCs培养液中,进行细胞增殖和成骨性分化的分析。细胞增殖分析采用MTT法,成骨性分化则检测碱性磷酸酶、骨钙素、钙盐沉积量等分化指标。结果TFE直接加入培养液对:MSCs增殖无明显影响,SES则强烈刺激细胞增殖,成倍增加碱性磷酸酶染色阳性的克隆数。TFE不影响MSCs的成骨性分化,但SES显著提高碱性磷酸酶活性、骨钙素分泌量和钙盐沉积量。结论 淫羊藿总黄酮活性代谢产物强烈刺激MSCs的增殖和成骨性分化,是淫羊藿总黄酮抗骨质疏松症的重要机制。

淫羊藿总黄酮胶囊对生长期大鼠骨密度和骨形态计量学的影响

目的：研究淫羊藿总黄酮胶囊（ITFC）对生长期大鼠峰值骨密度和骨形态计量学的影响，探索其抗骨质疏松的作用机制。方法：30只雌性SD大鼠按体质量随机分为正常对照纽、ITFC-1组及ITFC-2组。其中。ITFC-1组和ITFC-2组分别以50mg·k-1·d-1ITFC和100mg·kg-1·d-1ITFC灌胃，正常对照组灌服等体积蒸馏水。在灌胃后4、8、12周测定全身骨密度。12周后处死大鼠检测右侧股骨和腰椎骨骨密度；ELISA法检测血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP5b）和骨碱性磷酸酶（BALP）水平；右侧胫骨进行骨形态计量学分析。结果：与正常对照组比较，ITFC-1组和ITFC-2组大鼠体质量增加减少，但差异无统计学意义（均P〉0．05）。4周和8周时，ITFC-1组和ITFc-2组全身骨密度均有所提高，但与正常对照组差异无统计学意义（均P〉0．05）。12周时，ITFC-1组和ITFC-2组大鼠全身骨密度、离体骨密度及血清BALP和骨小梁面积百分比均高于正常对照组（均P〈0．05），骨小梁分离度均低于正常对照组（均P〈0．05）；ITFC-2组大鼠骨小梁宽度和数量均高于正常对照组，血清TRACP5b低于正常对照组（均P〈0．05）；ITFC-2组大鼠离体骨密度、血清BALP、骨小梁数量和面积百分比均高于ITFC-1组，骨小梁分离度和血清TRACP5b均低于ITFC-1组（均P〈0．05）。结论：ITFc有可能通过提高骨密度、增加骨形成、降低骨吸收及改善骨组织微结构来预防老年骨质疏松的发生。

部队医院护理人力需求面临的挑战与对策的思考

目的在新时期的大环境下研究护理人力需求是军队医疗机构适应市场、积极参与竞争和可持续发展的重要内容和环节,其目的是为了合理组织护理梯队,以有限的人力、物力、财力、技术和信息等资源,尽可能的适应军队的新军事变革,满足卫生服务的需求。方法对我军护理人力需求现状进行调查和文献回顾性分析,探讨面对的问题和挑战,思考应对挑战的技术路线。结果新军事变革面临护理人力需求的的挑战和标准化的引入与整体护理的挑战;护理行业缺乏整体的配套的科学发展观,护理人力资源不足未达到国家规定标准,管理者出现了多方面不适应,服务对象出现了诸多不适应,护理专业人才缺乏和流失,专科护理的发展将进入一个瓶颈或是低谷时期。结论调整现有人力资源,制定对策,如建立新型的人文自助式病房,建立医院内、外科护理应急分队,多种聘用制并存,编制标准要根据地区有所不同或侧重,加快护理服务的标准化建设等。积极应对挑战适应变革。

淫羊藿苷调节成骨细胞骨形成和破骨细胞骨吸收的机制

目的探讨淫羊藿苷(ICA)调节骨形成和骨吸收的机制。方法原代培养大鼠颅骨成骨细胞,茜素红钙化结节染色,加入10-5mol/LICA12、24、36、48h后,用real-time RT-PCR检测骨源性分化的调节基因OSX、Runt相关基因2(Runx-2)、碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、骨保护素(OPG)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)基因表达,Westernblotting检测OPG、RANKL和Ⅰ型胶原蛋白表达。加入10-5mol/LICA作用10～90min,流式细胞仪测定细胞内钙离子浓度。结果与对照组相比,ICA能明显促进骨形成,表现为OSX、Runx-2、ALP和Collagen Ⅰ基因表达量及Collagen Ⅰ蛋白表达量明显增加(P均<0.01),同时提高细胞内钙离子浓度。ICA也能明显抑制骨吸收,表现为提高OPG及OPG/RANKL基因和蛋白水平的表达量。结论 ICA可能是通过促进OSX、Runx-2、ALP和Collagen Ⅰ基因表达,提高CollagenⅠ蛋白表达量及细胞内钙离子浓度来促进成骨细胞骨形成;并通过促进OPG及OPG、RANKL基因和蛋白水平的表达量来抑制破骨细胞骨吸收。

JAK2/STAT3信号通路介导薯蓣皂苷元对骨性关节炎软骨细胞代谢的影响

目的：在小鼠骨性关节炎（OA）模型中观察薯蓣皂苷元（Dgn）通过酪氨酸蛋白激酶2／信号转导子和转录激活子3（JAK2／STAT3）信号通路对软骨细胞代谢和线粒体抗氧化应激能力的影响，以及Dgn在此过程中的作用。方法：15只C57BL／6小鼠随机分为健康对照组、模型对照纽和Dgn组，相应处理4周后取材，采用免疫组织化学法观察各组大体标本形态学变化，电子显微镜下观察软骨组织超微结构变化。将模型对照组培养软骨细胞随机分为四组：①模型对照组；②Dgn组；@Dgn＋阻断剂组；④阻断剂对照组。运用蛋白质印迹法检测各纽软骨细胞中P-JAK2、p-STAT3、Bax、琥珀酸脱氢酶（SDH）和细胞色素C氧化酶（COX）蛋白表达，并用比色法测定线粒体中超氧化物歧化酶（SOD）的含量及活性。结果：软骨组织形态学方面，模型对照组软骨细胞变化最明显，Dgn组细胞形态维持较好，软骨细胞膜完整；电镜下观察发现，模型对照组软骨组织标本表面损伤较为严重，而Dgn组软骨组织标本表面平整。与模型对照组比较，Dgn组p-JAK2、PSTAT3蛋白表达水平上升（均P〈0．05），Bax蛋白表达水平降低（P〈0．05），SDH、COX蛋白表达水平、SOD含量均较模型对照组增加（均P〈0．05）；而与Dgn组比较，Dgn＋阻断剂组P．JAK2和P-STAT3蛋白的表达减少，Bax蛋白表达增加，SDH、COX蛋白表达水平及SOD含量降低（均P〈0．05）。结论：JAK2／STAT3信号通路与OA软骨细胞病理变化密切相关。Dgn可以通过激活JAK2／STAT3通路，有效减轻OA病理过程中软骨细胞的线粒体氧化应激损伤和细胞凋亡，发挥对OA软骨细胞的保护作用。

人工关节置换术后假体周围感染与术前贫血的研究进展

假体周围感染是人工关节置换术后最严重的并发症。流行病学调查发现,围术期贫血是造成假体周围感染的独立危险因素,其可通过影响细胞机制及自身免疫功能等多个方面发挥重要影响。既往国内外诸多学者对假体周围感染与术后贫血的关系进行研究,但对假体周围感染与术前贫血的相关性探讨较少。术前贫血可使红细胞表面的C3b受体减少,机体免疫功能降低,血源性感染增加,术后康复时间延长,进而诱发假体周围感染。故对于术前合并贫血的患者,除预防性使用抗生素外,术前应补充铁剂、配合促红细胞生成素积极纠正贫血、治疗影响血红蛋白生成的慢性并发症、提高患者自身的免疫状况、对符合输血指征的患者进行相应的输血治疗,从而更好地预防人工关节置换术后假体周围感染的发生,减少二次或多次翻修的概率。

肱骨远端难治性骨不连的修复

目的 探索肱骨远端难治性骨缺损与骨不连的显微外科修复方法。 方法 肱骨远端骨缺损与骨不连 12例 ,均有外科手术史及植骨史 ,病程 8个月～ 3年 10个月 ,平均 12 .5个月。肢体短缩 4～ 11cm,其中 8例假关节形成 ,4例缺损 3～ 5 cm。采用解剖钢板固定为支架 ,取吻合血管的腓骨移植修复 ,移植腓骨长 5～ 15 cm,平均 8.5 cm。 结果 术后 12例均获随访 3～ 18个月 ,平均 8.5个月。移植腓骨 3～ 8个月全部愈合 ,随愈合时间延长 ,移植腓骨增粗 ,髓腔再通。退行变的肘关节面骨质恢复正常 ,肘关节伸屈、前臂旋转功能获得恢复 ,肢体短缩获得纠正 ,持重及精细操作均达到满意效果。 结论 钢板内固定加吻合血管腓骨移植用于邻近关节疑难骨缺损、骨不连的修复 ,可重建关节功能 ,免除关节假体置换。

淫羊藿苷通过OPG/RANKL信号途径调节骨吸收的机理研究

目的探讨淫羊藿苷抑制骨吸收的机理。方法贴壁分离法培养大鼠骨髓基质干细胞,流式检测细胞纯度。加入10-5M淫羊藿苷12 h、24 h、36 h、48 h后用Real-time-RT-PCR检测OPG和RANKL基因表达,Western blotting检测蛋白表达。结果第2代培养细胞的纯度达到95%以上。OPG基因和蛋白表达水平在24 h时明显升高,与对照相比有显著差异。OPG和RANKL的比值显著高于对照组。结论淫羊藿苷主要通过提高OPG及OPG和RANKL的比值来发挥抑制骨吸收的作用。

多孔明胶微球/磷酸钙骨水泥的制备及其性能研究

[目的]制备多孔明胶微球/磷酸钙骨水泥,并于体内体外研究其各种性能。[方法]双相乳化冷凝聚合法制备明胶微球,以不同比例与磷酸钙骨水泥复合(0%,2.5%,5%),制备多孔磷酸钙骨水泥,测定材料孔径率及抗压强度,筛选出最佳比例。消化法培养成骨细胞接种于常规及多孔磷酸钙骨水泥支架上,扫描电镜观察细胞形态;不同材料浸提液(0%,2.5%明胶微球/磷酸钙骨水泥及聚苯乙烯)分别与成骨细胞共培养,以MTT法测定细胞增殖率,试剂盒检测碱性磷酸酶水平。将磷酸钙骨水泥及2.5%明胶微球/磷酸钙骨水泥分别植入山羊椎体内,6个月后收集标本,分别进行X线影像学及组织学观察,评估其降解情况。[结果]不同比例明胶微球/磷酸钙骨水泥的总孔径率、大孔率及抗压强度分别为:38.7%、0%、12.1MPa(0%);67.5%、40.6%、8.0MPa(2.5%);72.2%、45.6%、5.0MPa(5%)。成骨细胞在明胶微球/磷酸钙骨水泥上生长良好,细胞增殖及碱性磷酸酶水平均明显高于单纯磷酸钙骨水泥组,与聚苯乙烯组未见明显差异。多孔明胶微球/磷酸钙骨水泥6个月后在体内大部分已降解,而磷酸钙骨水泥未见明显降解。[结论]复合明胶微球可显著提高磷酸钙骨水泥的孔径率促进其降解,增加其生物活性,这种多孔磷酸钙骨水泥可作为非负重部位的骨替代物。

淫羊藿苷通过PI3K/AKT-eNOS信号途径促进大鼠骨髓基质细胞的成骨性分化

目的研究淫羊藿苷(Icariin,ICA)促进体外培养大鼠骨髓基质细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化的信号传导机制。方法贴壁分离法培养rBMSCs,传至第2代后用流式法鉴定细胞纯度并用于机制研究。细胞铺满皿底后分为ICA组(1×10-5mol.L-1)、LY294002组(5×10-5 mol.L-1)、ICA+LY294002组和空白对照组。不同处理24 h后分别用Real-time PCR法检测ALP、eNOS和iNOS的基因表达水平,用Western blot法检测p-AKT、eNOS和iNOS蛋白表达量,同时测定TNOS、iNOS活性和NO生成量。结果基因表达和蛋白质检测结果均显示,10-5mol.L-1ICA明显提高rBMSCs的ALP表达水平(P<0.01),PI3K的特异性阻断剂LY294002可抑制ICA对ALP的提高作用,亦明显降低p-AKT的表达水平。ICA可提高rBMSCs的eNOS和iNOS表达水平,但LY294002只能抑制eNOS的增加,对iNOS无影响。TNOS和NO与eNOS和ALP的变化趋势一致,iNOS活性不受LY294002的影响。结论 ICA通过PI3K/AKT-eNOS途径促进rBMSCs的成骨性分化。

Ca^(2+)信号介导红景天苷促进小鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞的定向分化

背景:大量文献报道具有抗氧化作用的传统中药单体能促进骨髓间充质干细胞向神经细胞定向分化,红景天苷作为红景天的有效成分,具有较强的抗氧化功效。目的:探讨红景天苷影响小鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞定向分化的分子机制。方法:体外培养的小鼠骨髓间充质干细胞达80%融合后,设立3组,空白对照组加入细胞完全培养液,诱导组、阳性对照组分别在其基础上加入20mg/L红景天苷、0.1mg/L神经生长因子,培养12h,采用RT-PCR和Westernblot法检测诱导后神经细胞相关基因和蛋白的表达。取诱导组细胞,分别加入含EGTA(细胞外Ca2+螯合剂)、Nifedipine(L型Ca2+通道阻断剂)、LY294002(IP3受体阻断剂)作用12h,进行生物学信号传导通路检测。结果与结论:①诱导组可见神经元特异性烯醇化酶、β-TubulinⅢ和Nurr1mRNA的表达,阳性对照组上述基因的表达丰度均低于诱导组,空白对照组未见上述基因的表达;各组GFAPmRNA表达丰度均极低,诱导组c-fosmRNA呈高丰度表达。②与阳性对照组比较,诱导组能明显促进骨髓间充质干细胞神经元特异性烯醇化酶蛋白的表达;空白对照组无神经元特异性烯醇化酶蛋白的表达。③EGTA,Nifedipine,LY294002分别阻断细胞外Ca2+、L型Ca2+通道、IP3受体后,神经元特异性烯醇化酶和Nurr1基因、蛋白的表达均显著下调。结果证实红景天苷能使骨髓间充质干细胞定向分化为神经细胞,其生物学信号的传导与Ca2+信号有密切关系,IP3依赖的Ca2+信号途径是实现信号传导的重要方式之一。

芒柄花素对体外培养成骨细胞缺氧损伤的保护作用

目的研究芒柄花素在缺氧培养条件下对成骨细胞增殖、细胞周期、凋亡和成骨分化等的影响。方法采用酶消化法分离培养SD大鼠颅骨成骨细胞,并用三气培养箱建立缺氧模型。将细胞分为常氧对照组、缺氧对照组和缺氧加药组,其中缺氧加药组进一步分为10-6、10-5和10-4 mol·L-1组,分别加入10-6、10-5和10-4 mol·L-1芒柄花素。于缺氧处理36 h后分析各组的细胞存活率、LDH漏出率、细胞凋亡、细胞周期等,并用RT-PCR法检测缺氧诱导因子-1α、Bcl-2及Caspase-3的基因表达情况。缺氧处理48 h后检测ALP活性、钙化结节面积等成骨分化指标。结果与缺氧对照组比较,芒柄花素可提高细胞存活率,降低LDH漏出率,减少细胞凋亡并提高G1期细胞百分比,提高HIF-1α和Bcl-2mRNA的表达水平,抑制Caspase-3 mRNA的表达水平,对ALP活性和钙化结节面积等也有提高作用,且均呈现出剂量依赖性特点。结论芒柄花素对成骨细胞缺氧损伤具有明显保护作用。

正弦波电磁场激活一氧化氮信号通路促进大鼠成骨细胞成熟与矿化

研究正弦波电磁场(SEMF)促进成骨细胞成熟矿化是否与一氧化氮(NO)信号通路相关.首先检测成骨细胞经正弦电磁场作用0h、0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h、3.5h和4h后一氧化氮合酶(NOS)的活性,以探明电磁场是否影响NO的合成;其次,在细胞培养液中加入NOS的阻断剂L-NAME以阻断NO信号通路,观察电磁场促进骨形成作用是否受到影响.结果发现,经正弦波电磁场处理后,NOS活性升高,在0.5h达到峰值,与空白对照组差异极显著(P<0.01),Osterix基因的表达量、碱性磷酸酶活性和钙化结节数等均显著高于对照组.L-NAME组各项指标均低于空白对照组,SEMF+L-NAME组则略高于空白对照组而低于SEMF组.以上结果表明SEMF促进成骨细胞成熟矿化过程中NO信号通路被激活,如该通路被抑制,则SEMF的促成骨作用被抵消.

大鼠骨髓基质细胞体外定向诱导成骨

将大鼠骨髓单细胞悬液静置培养 36h,利用骨髓基质细胞贴壁能力强的特点对其进行纯化和扩增培养 .采用爬片培养、HE染色、组化染色以及碱性磷酸酶活性和钙含量测定等手段研究培养骨髓基质细胞的形态、分化和分泌基质情况 .结果表明 ,非诱导培养条件下骨髓基质细胞呈梭形 ,部分传代细胞中可观察到脂肪细胞和肌细胞 .经成骨性诱导培养后 ,骨髓基质细胞发生明显的形态学变化 ,碱性磷酸酶活性上升 ,钙含量增加 ,最终形成典型的矿化结节 .提示培养大鼠骨髓基质细胞具有分化成脂肪细胞和肌细胞的能力 ,但其分化成骨的潜能最为强大 .本实验诱导骨髓基质细胞分化为成骨细胞的模式有可能适用于骨组织工程研究 .

β-七叶皂甙钠对肢体缺血再灌注损伤的保护作用

目的 :观察 β 七叶皂甙钠对肢体缺血再灌注损伤的保护作用。方法 :用兔造成肢体缺血再灌注损伤动物模型。实验分对照组、缺血再灌注组和 β 七叶皂甙钠组。取血浆测定丙二醛、肌酸磷酸激酶、谷草转氨酶和乳酸脱氢酶含量。取骨骼肌标本测定丙二醛、髓过氧化酶活性、肌细胞线粒体钙含量和组织湿 /干重比值。结果 :缺血再灌注组与对照组比较 ,血浆和骨骼肌的各项生化指标显著增高 (P <0 .0 1) ;使用 β 七叶皂甙钠后 ,血浆及骨骼肌各项测定指标较缺血再灌注组相比明显降低 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。结论 :β 七叶皂甙钠可减轻肢体缺血再灌注损伤 。