淫羊藿总黄酮对大鼠实验性骨质疏松生化学指标的影响

目的 探讨淫羊藿总黄酮防治大鼠实验性骨质疏松症过程中骨代谢生化指标的变化及其意义。方法 采用维甲酸灌胃造成大鼠实验性骨质疏松症模型 ,检测灌服高、中、低 3种剂量的淫羊藿总黄酮后大鼠血清生化指标、尿生化指标、骨矿含量及骨密度指标的变化 ,并与模型组、正常对照组和阳性对照组进行比较。结果 3个剂量组的血清E2 、T和BGP水平均高于模型组 ,尿Ca/Cr、DPD和血清PTH水平均低于模型组 ,股骨Ca、P和骨密度与正常对照组接近 ,与模型组差异有显著性。结论 淫羊藿总黄酮对维甲酸造成的大鼠骨质疏松症有明显的防治作用 ,骨代谢生化指标变化情况与骨密度的变化相一致 。

含淫羊藿总黄酮大鼠血清对成骨细胞发育的影响

目的:研究含淫羊藿总黄酮大鼠血清对体外培养成骨细胞(ROB)增殖和分化的影响。方法:将淫羊藿总黄酮(TFE)以0.1,1,10,100μg.mL-14种质量浓度、含淫羊藿总黄酮大鼠血清(SRAT)以2.5%,5%,10%3种质量浓度分别加入新生大鼠颅骨成骨细胞培养液中,研究它们对细胞增殖和分化成熟的影响。细胞增殖采用MTT法进行分析,细胞分化是于培养第4,8,12,20天分别检测碱性磷酸酶活性(比色法)、骨钙素分泌量(放射免疫法)、钙盐沉积量(比色法)和矿化结节(组织化学法)等。结果:TFE 4种质量浓度均对ROB细胞增殖和分化无明显影响,2.5%和5%SRAT则表现出强烈的刺激细胞增殖活性并显著提高碱性磷酸酶活性、骨钙素分泌量、矿化结节数和钙盐沉积量。结论:淫羊藿总黄酮代谢产物强烈刺激成骨细胞的增殖并促进其分化成熟,说明淫羊藿总黄酮代谢产物具有抗骨质疏松的活性。

淫羊藿总黄酮含药血清促进骨髓间充质干细胞增殖与成骨性分化

目的 研究淫羊藿总黄酮(Total flavonoid extract of Eimedium sagittatum,TFE)对大鼠骨髓间充质干细胞(Mysenchymal stem cells,MSCs)增殖和成骨性分化的影响。方法将TFE和含淫羊藿总黄酮大鼠血清(Serum of rats administered TFE,SES)分别以不同浓度加入大鼠MSCs培养液中,进行细胞增殖和成骨性分化的分析。细胞增殖分析采用MTT法,成骨性分化则检测碱性磷酸酶、骨钙素、钙盐沉积量等分化指标。结果TFE直接加入培养液对:MSCs增殖无明显影响,SES则强烈刺激细胞增殖,成倍增加碱性磷酸酶染色阳性的克隆数。TFE不影响MSCs的成骨性分化,但SES显著提高碱性磷酸酶活性、骨钙素分泌量和钙盐沉积量。结论 淫羊藿总黄酮活性代谢产物强烈刺激MSCs的增殖和成骨性分化,是淫羊藿总黄酮抗骨质疏松症的重要机制。

淫羊藿苷通过OPG/RANKL信号途径调节骨吸收的机理研究

目的探讨淫羊藿苷抑制骨吸收的机理。方法贴壁分离法培养大鼠骨髓基质干细胞,流式检测细胞纯度。加入10-5M淫羊藿苷12 h、24 h、36 h、48 h后用Real-time-RT-PCR检测OPG和RANKL基因表达,Western blotting检测蛋白表达。结果第2代培养细胞的纯度达到95%以上。OPG基因和蛋白表达水平在24 h时明显升高,与对照相比有显著差异。OPG和RANKL的比值显著高于对照组。结论淫羊藿苷主要通过提高OPG及OPG和RANKL的比值来发挥抑制骨吸收的作用。

川芎嗪体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的研究

为了探讨川芎嗪体外诱导小鼠骨髓间质干细胞(BMSCs)分化为神经元样细胞的作用,以小鼠骨髓间充质干细胞为研究对象,实验分为空白对照组、β-巯基乙醇(BME)阳性对照组和川芎嗪诱导组。采用荧光免疫化学和Western blot方法,分别检测神经干细胞巢蛋白(nestin)和经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达;RT-PCR检测诱导不同时间对神经细胞相关基因Nestin、NSE、β-微管蛋白III(β-Tubulin III)和核受体相关因子-1(Nurr1)mRNA表达的影响。结果显示川芎嗪诱导间充质干细胞24 h后,细胞形态发生显著改变,细胞突起形成且数目不等,形成神经元样细胞。细胞死亡率低于β-巯基乙醇诱导组。免疫荧光化学法和western blot结果显示:川芎嗪诱导后的细胞nes-tin和NSE蛋白表达呈阳性,且表达丰度显著高于β-巯基乙醇诱导组。川芎嗪作用不同时间的BMSCs表达神经细胞相关基因Nestin、β-Tubulin III、NSE和Nurrl。结果表明川芎嗪能定向诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞,是较理想的诱导剂。

淫羊藿苷与金雀异黄酮骨保护作用的比较研究

目的通过淫羊藿苷(icariin,ICA)和金雀异黄酮(genistein,GEN)对幼龄大鼠和切除卵巢大鼠的药物干预,比较其抗骨质疏松的药理活性。方法 1月龄♀SD大鼠灌服25 mg·kg-1·d-1淫羊藿苷和10 mg·kg-1·d-1金雀异黄酮3个月,6月龄SD切除卵巢大鼠灌服同样的剂量3个月,检测骨密度、股骨生物力学、血清骨钙素与抗酒石酸性磷酸酶5b和骨组织形态。结果与对照组相比较,1月龄大鼠口服淫羊藿苷后,骨密度、股骨生物力学和骨质量均增加,而金雀异黄酮效果甚微。然而,切除卵巢大鼠在口服金雀异黄酮后,比淫羊藿苷更有效的抑制了骨量丢失和骨组织微结构的退化。结论相比较金雀异黄酮,淫羊藿苷有更强的成骨活性,但雌激素活性较弱,能更强地提高幼鼠峰值骨量。切除卵巢大鼠内环境由雌激素主导,因此,金雀异黄酮比淫羊藿苷能更强地减缓骨量丢失。

8-异戊烯基柑橘素促进体外培养成骨细胞成熟矿化的研究

研究8-异戊烯基柑橘素对体外培养大鼠颅骨成骨细胞(rat skull osteoblasts,ROB)的分化成熟及生物矿化的影响.取新生大鼠颅骨多次酶消化法得到成骨细胞,培养于含10%FBS的MEM培养液中,3天后首次换液,待细胞铺满皿底传代培养.以碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)为检测指标,96孔板梯度筛选作用最佳浓度,在最佳浓度作用并成骨性诱导培养的第3、6、9、12天测ALP活性、钙盐沉积量;第12天进行ALP和钙化结节组织化学染色及计数;成骨性诱导后不同时间点提取Total RNA,RT real-time PCR法检测成纤维细胞生长因子(bFGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、成骨相关转录因子Osterix、Runx-2和骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的基因表达情况;成骨性诱导的第4、8、12天裂解获得细胞总蛋白,蛋白质印迹法检测人Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)的蛋白质表达量.研究结果表明:1×10-6 mol/L能显著促进成骨细胞的成熟分化,表现为提高ROB的ALP活性、促进钙盐沉积、增加钙化结节数量;提高bFGF、IGF-1、Osterix、Runx-2和BMP-2 mRNA表达水平;促进COL-Ⅰ的合成.由此可知终浓度为1×10-6 mol/L 8-异戊烯基柑橘素能显著促进ROB的分化成熟及生物矿化,证明8-异戊烯基柑橘素能促进成骨细胞的分化成熟及生物矿化,作为促进骨修复和抗骨质疏松的有效成分具有较大的药用价值.

蛇床子素与金雀异黄酮对大鼠峰值骨量影响的比较研究

目的:研究蛇床子素(Osthole,OST)与金雀异黄酮(Genistein,GEN)对大鼠峰值骨密度与骨质量的影响。方法:采用随机分组法将36只1月龄SD雌性大鼠(125±3)g分为3组:对照组(CON,等体积蒸馏水,n=12),蛇床子素组(OST,9 mg·kg-1d-1i.g.,n=12),金雀异黄酮组(GEN,10 mg·kg-1d-1i.g.;n=12)。每周监测体重,每月用双能X射线骨密度仪(DEXA)检测全身骨密度。3个月后处死所有动物,采用酶联免疫法测定血清骨钙素(Osteocalcin,OC)和抗酒石酸性磷酸酶5b(Tartaric acid phosphatase 5b,TRACP 5b)含量,用DEXA测定股骨骨密度,用μCT分析股骨组织微结构,树脂包埋不脱钙骨组织切片技术做胫骨骨形态分析,用万能材料试验机测定股骨生物力学,称量心、肝、胃、肾、肾上腺和子宫湿重,计算器官指数,并做常规病理学检测。结果:大鼠的体重、器官指数差异无统计学意义(P>0.05);病理学观察未见异常发生;第1、2个月全身骨密度无明显差异(P>0.05),第3个月后OST组全身骨密度显著高于CON组、GEN组,上述3组中股骨骨密度与全身骨密度的变化呈相同趋势(P<0.05)。与对照组相比,OST组、GEN组血清OC水平升高,而与CON组、GEN组相比,OST组的TRACP 5b含量下降(P<0.05);OST组的骨体积百分率、骨小梁厚度和骨小梁数量均高于CON组,但骨小梁分离度和模型系数均显著低于CON组(P<0.05),OST组与GEN组的上述指标虽未出现统计学差异(P>0.05),但平均值OST组高于GEN组;OST组骨小梁厚度和骨小梁数量均高于CON组、GEN组,但骨小梁分离度低于CON组、GEN组;OST组股骨最大载荷、弹性模量和屈服强度均明显高于CON组(P<0.05),OST组与GEN组虽未出现统计学差异(P>0.05),但平均值OST组高于GEN组。结论:口服蛇床子素能有效提高大鼠峰值骨量,从而为防治骨质疏松的发生提供新思路。

骨代谢相关因子研究进展

骨质疏松症是老年人的一种常见病和多发病,在发病过程受到多个骨代谢相关因子的调控。对骨代谢相关因子进行研究可为骨质疏松症研究预防和治疗提供理论依据。其中骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)、骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic proteins,BMP)、成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factors,FGF)是近年来研究热点。本文对它们的分子结构以及生物学功能做一综述。

50Hz1.8mT电磁场对成骨细胞增殖与分化成熟影响的波形比较研究

在50 Hz 1.8 mT的4种不同波形电磁场(electromagnetic fields,EMFs)中筛选促进体外培养大鼠成骨细胞(rat osteoblasts,ROB)增殖与分化成熟的最佳波形.体外分离培养大鼠颅骨成骨细胞,传代后随机分为5组,分别用频率50 Hz,EMFs强度为0 mT(对照组)和1.8 mT的正弦波、三角波、方波和锯齿波处理ROB,30 min/(次.天).在磁场处理后4～8天细胞呈现特征样分布.方波促进成骨细胞增殖,正弦波抑制成骨细胞增殖.三角波和正弦波增加ALP活性,其中ALP染色、茜素红钙化结节染色和胶原Ⅰ(collagen-Ⅰ)免疫组织化学检测结果与ALP活性一致.在EMFs处理后的24 h、96 h和72 h后EMFs分别提高Runx-2、Opg和Igf基因表达水平,其中尤以正弦波和三角波作用最为显著.上述结果表明:50 Hz 1.8 mT方波促进成骨细胞增殖,正弦波抑制成骨细胞增殖.50 Hz 1.8 mT EMFs能促进体外培养成骨细胞分化成熟,其中尤以正弦波和三角波促进成骨细胞分化成熟作用最为显著.

加速康复外科在人工膝关节置换术的应用研究

目的探讨加速康复外科在人工膝关节置换围手术期的应用价值。方法术前强化心理护理及疼痛治疗理念教育,采用超前多模式联合镇痛方法,预防深静脉血栓,加强康复训练。结果观察组患者术后膝关节功能及术后1个月的疼痛情况均优于对照组(P<0.01),术后2周总体并发症发生率低于对照组(P<0.05)。结论加速康复外科护理可以提高手术疗效,促进患者康复。

改良前入路髂腹股沟切口治疗骨盆及髋臼骨折的病例对照研究

目的：通过对63例骨盆及髋臼骨折患者手术前入路的治疗过程回顾性分析,获得改良髂腹股沟入路方法.方法：自2006年1月至2013年1月应用髂腹股沟前入路手术治疗骨盆、髋臼骨折63例,男45例,女18例;年龄12～68岁,平均（37.71±13.41）岁.分别选用标准前入路和改良前入路手术处理,标准前入路（A组）手术处理37例,男26例,女11例,年龄（38.49±13.64）岁;改良前入路（B组）手术治疗26例,男19例,女7例,年龄（36.62±13.29）岁.观察比较两组手术切口（从切皮至完成髂腹股沟前方3个“窗口”）暴露时间、其间失血量、切口关闭时间,并采用Majeed功能评分比较两组治疗效果.结果：两组比较,B组手术从切皮至完成髂腹股沟前方3个“窗口”暴露时间较短（P=0.006）,失血量（暴露过程中出血）较少（P=0.002）,关闭髂腹股沟切口时间短（P=0.002）,而两组治疗效果差异无统计学意义.术后全组获得随访,时间3～36个月,平均（18.6±9.2）个月.术后随访期间未发现内固定松动及螺钉钢板断裂.骨折复位情况根据Matta标准评定：A组优28例,良8例,可1例;B组优20例,良5例,可1例.髋关节功能根据Ma-jeed评分标准,A组优20例,良12例,中4例,差1例,平均（82.51±9.72）分;B组优13例,良10例,中3例,差0例,平均分（80.54±10.79）分.结论：改良入路能提供良好的术野暴露范围,不易损伤到腹股沟韧带下方股神经及股动静脉,无须切开腹股沟管,可以避免出现腹股沟疝的发生,也减少了手术步骤,缩短了操作时间.

蛇床子素对青年大鼠骨代谢的影响研究

目的探讨蛇床子素对青年大鼠骨代谢的影响。方法 30只雌性wistar大鼠按体重随机分为A、B、C组,A组为正常对照组给予等体积蒸馏水灌胃,B组给予雌二醇灌胃,C组给予蛇床子素灌胃。3组分别在灌胃后4、8、12周分别测定全身骨密度,并在12周后检测左侧股骨和腰椎骨密度及右侧股骨和第4腰椎生物力学性能;检测血清抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRAP-5b)和骨钙素(OC)含量,分析右侧胫骨骨形态计量学。结果 B、C组灌胃12周后全身骨密度及离体骨密度均高于A组,但C组低于B组(P<0.01)。B、C组生物力学性能指标均高于A组,C组股骨弹性模量和腰椎最大载荷低于B组(P<0.05)。B、C组TRAP-5b水平均低于A组,OC水平高于A组(P<0.01);C组TRAP-5b水平高于B组,OC水平低于B组(P<0.01)。B、C组胫骨骨组织中骨小梁数量密集,骨小梁分离度低于A组,B组骨小梁数量高于C组,骨小梁分离度低于C组。结论蛇床子素能够提高青年大鼠骨密度、生物力学性能及骨组织微结构,增加青年大鼠骨质量,但其作用效果略低于雌激素。

国产95式步枪所致猪肢体软组织贯通伤的MRI表现与病理学研究

目的分析猪肢体软组织枪伤后不同时间弹道及周围组织的MRI表现和病理学变化,为枪弹伤早期救治提供理论依据。方法将17只成年猪静脉麻醉后,取仰卧位,将右后肢悬吊固定于致伤架上,用国产95式步枪致伤,射击距离10m。于伤后2、6、12、24、48h及9、18d分别行MRI扫描和病理学检查。结果伤区组织的病理改变可分为原发弹道区、凝固性坏死区、碎裂区和变形区。凝固性坏死区宽1～3mm,在T2WI及增强T1WI上呈现"双低信号"现象;碎裂区和部分变形区呈现"双高信号"现象,但二者不能区分。结论国产95式步枪贯穿肢体软组织后伤区由内向外依次可分为原发弹道区、凝固性坏死区、碎裂区和变形区;MRI可清楚显示原发弹道和凝固性坏死区;碎裂区和变形区为围绕弹道外围的高信号区,病理组织学分界清楚。

大鼠颅骨成骨细胞和骨细胞的分离纯化与比较研究

目的探讨大鼠颅骨中骨细胞和成骨细胞的分离纯化方法,并分别比较细胞形态、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性和成骨特异性蛋白的表达情况。方法分别采用序列酶消化和EDTA螯合法,从SPF级新生SD大鼠的颅骨中分离培养骨细胞和成骨细胞,对其进行HE染色、Ⅰ型胶原免疫组化染色、骨钙素(BGP)免疫荧光染色;采用偶氮偶合法对两种细胞ALP进行染色,并检测其活性;应用蛋白质印迹(Western blot)检测两种细胞的Ⅰ型胶原和BGP的表达量。结果细胞形态学观察及HE染色表明,骨细胞多呈星状或树枝状且有较多突触,而成骨细胞呈长梭形且突触较少;Ⅰ型胶原免疫组化染色与Western blot结果表明,Ⅰ型胶原在成骨细胞中表达量较高,呈棕黄色,骨细胞中表达量较低;而BGP免疫荧光染色与Western blot显示,成骨细胞中BGP表达较低,而在骨细胞中表达较高,细胞荧光染色与HE染色结果相似;ALP染色结果表明,ALP在成骨细胞中表达较高,骨细胞中表达较低;ALP活性检测与ALP染色结果相似。结论采用序列酶消化及EDTA螯合法,可以从大鼠颅骨中分离得到较纯的骨细胞及成骨细胞,利用HE染色、免疫组化、免疫荧光染色、Western blot等技术,可以对骨细胞和成骨细胞进行分离纯化与研究。

脉冲电磁场对去势大鼠血清ALP及体外培养骨髓破骨细胞变化的研究

目的:观察脉冲磁场对去势大鼠血清碱性磷酸酶(ALP)变化规律及骨髓源性破骨样细胞(OLC)形成的影响。方法:3月龄Wistar雌性大白鼠18只,分为A组(伪去势组)、B组(双卵巢切除+脉冲电磁场治疗组)和C组(双卵巢切除组)。B组置电磁场仪处进行治疗3个月。眼眶取血测ALP,并对骨髓细胞进行培养,2周后对培养细胞进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色并计数。结果:C组ALP值与A组及B组比较有明显升高(P<0.05),B组ALP值与A组比较虽有差别,但无统计学意义。破骨细胞计数C组与A组比较有显著差异(P<0.01),C组与B组比较有明显差异(P<0.05)。结论:脉冲电磁场能使去势大鼠血清ALP水平降低和骨髓体外培养破骨细胞形成减少。

脉冲电磁场与正弦交变电磁场对成骨细胞增殖与成熟矿化的比较研究

目的探讨0.6 m T 50 Hz脉冲电磁场和1.8 m T 50 Hz正弦交变电磁场对大鼠颅骨成骨细胞增殖与成熟矿化的影响。方法采用酶消化法分离大鼠乳鼠颅骨成骨细胞,接种培养于10%胎牛血清（FBS）的α-MEM培养基中,成骨细胞融合到80%～90%,传代培养,随机分成3组,分别为对照组、脉冲电磁场组和正弦交变电磁场组,分别测定细胞增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性,并进行碱性磷酸酶染色和茜素红钙化结节染色。结果脉冲电磁场组OD值明显高于正弦交变电磁场组和对照组（P〈0.01）,正弦交变电磁场组明显低于对照组（P〈0.01）;第6天脉冲电磁场组ALP活性明显高于正弦交变电磁场组和对照组（P〈0.01）,第9天脉冲电磁场组和正弦交变电磁场组ALP活性均明显高于对照组（P〈0.01）。脉冲电磁场组和正弦交变电磁场组ALP染色、茜素红面积和克隆数均显著高于对照组（P〈0.01）。结论脉冲电磁场和正弦交变电磁场都能最终促进成骨细胞的成熟矿化,使其形成新骨,但其作用机理不同。

金雀异黄酮对体外培养成骨细胞抗缺氧的机制研究

目的:观察金雀异黄酮对缺氧成骨细胞的抗缺氧作用。方法:以大鼠成骨细胞为材料,用三气培养箱建立缺氧模型。设常氧对照组、缺氧对照组和含不同浓度金雀异黄酮的缺氧加药组。比较各组缺氧36 h后细胞活力、ROS含量、细胞凋亡、细胞周期、PCNA表达i、NOS活性和钙化结节面积等,荧光定量PCR检测HIF-1α、BCL-2及Caspase-3 mRNA的表达。结果:金雀异黄酮显著提高缺氧成骨细胞存活率、G1期细胞百分比、钙化结节面积、HIF-1α和BCL-2 mRNA的表达水平,降低凋亡、ROS含量、PCNA表达量i、NOS酶活性和Caspase-3 mRNA表达。结论:金雀异黄酮能保护缺氧成骨细胞并促进其分化。