兽医PCR实验室的污染控制策略

PCR技术在兽医研究,甚至基层兽医实验室广泛使用,在疾病诊断和检测中发挥着十分重要的作用。但是PCR实验室的污染防控存在较大的漏洞。本文针对此现状,从PCR实验室的设计布局、环境污染、人员培训及规范操作等方面进行污染监控措施分析,力求减少实验室操作污染,确保实验数据的准确性和可靠性。

兽医临床猪繁殖与呼吸综合征病毒血清抗体监测及其变化规律分析

为了掌握猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗体水平变化规律,提出血清PRRSV抗体阳性率、平均值及离散度等数据结果在猪场管理和免疫程序的有效应用。采用ELISA抗体检测方法,对猪场3年的PRRSV抗体水平进行监测,并结合猪场实际生产业绩,统计分析猪群PRRSV的抗体水平、抗体整齐度的变化,总结出判定猪场PRRS疫苗免疫后猪群处于稳定状态时,PRRSV抗体S/P值的范围区间以及离散度分布范围区间。结果显示,具有较好生产业绩的猪场,其PRRSV抗体基准线的区间范围为抗体平均值1.0~2.0,离散度50~70,呈动态平稳变化,强调的是数据结果的变化规律性和动态稳定状态,而非具体的某一阈值。

中山地区猪源大肠杆菌的耐药性分析

中山市地处大湾区核心区域,养殖业的健康发展十分重要。大肠杆菌是兽医临床上最常见的病原细菌之一,其感染严重危害公共卫生安全以及养殖业的健康发展。通过细菌分离、基因测序等方法,从中山地区规模化养殖场分离到43株大肠杆菌。通过琼脂稀释法测定分离菌株对不同抗菌药物的最小抑菌浓度,结果表明43株大肠杆菌对氨基糖苷类、酰胺醇类、磺胺类、喹诺酮类等多种抗菌药物耐药。

坦布苏病毒GX株对雏鸭的感染性和致病性试验

2020年我国南方地区出现了坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)感染引起的以种鸡产蛋下降为主要特征的传染病,为了解其对鸭的感染性和致病性,以鸭源TMUV-JM株为对照,评估引起鸡产蛋下降的鸡源TMUV-GX株对雏鸭的感染性和致病性。结果显示,TMUV-JM株和TMUV-GX株感染组雏鸭均出现了食欲减退、拉绿色稀粪和生长阻滞,肝脏、肺脏、肾脏均表现出相似的病理变化,TMUV GX株感染组脑组织可见小胶质细胞增多;TMUV-JM株和TMUV-GX株感染雏鸭后,在肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和脑组织中均具有较高的病毒载量,感染组间无显著差异。结果表明TMUV-GX株对雏鸭具有较强的感染性和致病性,具有在鸭群中广泛传播的生物学基础。

鸭坦布苏病毒病的研究进展

鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu Virus,DTMUV)病自2010年开始在我国流行,该病能引起蛋鸭产蛋率骤降、肉鸭发育迟缓甚至死亡,给我国养鸭业造成了巨大的经济损失。自该病暴发以来,DTMUV迅速蔓延至我国大部分鸭养殖地区以及临近的东南亚地区。DTMUV宿主范围广泛,除了感染鸭、鹅等水禽和鸡、麻雀等其他禽类外,也可以感染哺乳动物,具有潜在的公共卫生安全风险。近年来研究人员在DTMUV相关的流行病学、与宿主的相互作用机理以及疫苗研制等方面取得了一些进展。综述了DTMUV病原学、流行特点、病毒感染引起的天然免疫反应以及疫苗研制等方面的研究进展,以期为未来DTMUV的深入研究及该病的综合防控提供借鉴。

鸭疫里默氏菌毒力相关因子研究进展

鸭疫里默氏菌(RA)是影响水禽养殖业的重要病原菌之一。该菌感染水禽后特征性病变有纤维素性心包炎、肝周炎和气囊炎。毒力因子在细菌致病过程中起着重要作用,论文主要阐述了近年来鸭疫里默氏菌致病性相关的毒力因子外膜蛋白、脂多糖、荚膜多糖、TonB蛋白、TonB依赖受体TbdR1、铁载体相互作用蛋白SIP、分泌系统相关因子和调控相关因子等的研究进展,并探讨了今后的研究方向,以期为鸭疫里默氏菌病的诊断、防治和相关疫苗研制提供参考。

鸭疫里默氏杆菌弱毒株的发酵培养

1型鸭疫里默氏杆菌在华南地区流行,本试验在获得1型鸭疫里默氏杆菌天然弱毒株SG株的基础上,采用具有在线控制pH和溶解氧(DO)的5 L发酵罐,通过对发酵培养基、发酵培养过程中DO值、发酵培养转速进行优化,获得1型鸭疫里默氏杆菌弱毒株SG株。结果显示:SG株发酵培养的最适培养基配方中每升培养基含胰蛋白胨17.5 g、大豆蛋白胨7.5 g、酵母提取物7.5 g、葡萄糖2.5 g;SG株发酵培养的最适DO值为20%、最适转速为150 rpm,当发酵8 h活菌数达到高峰(1.27×10^(10)CFU/mL);以获得的优化工艺在GMP 生产车间规模化发酵生产 3 批鸭疫里默杆菌弱毒株SG株,收获弱毒菌液的活菌数均高于1.0×10^(10)CFU/mL。本试验为鸭疫里默氏杆菌弱毒疫苗抗原的高效制备提供了指导。

Ⅰ亚群D种禽腺病毒的研究进展

自2015年以来,Ⅰ亚群D种禽腺病毒在我国开始流行,该病毒不仅会引起宿主严重的包涵体肝炎,还能抑制宿主的免疫系统,病死率为10%~30%,给我国的养禽业造成了一定的经济损失。本文针对近年来国内外D种禽腺病毒的研究报道,对该种病毒的病原学、流行病学、致病性研究、检测方法以及疫苗等方面进行综述,比较全面地阐述了该种病毒的研究进展,以期为我国Ⅰ亚群D种禽腺病毒病的预防和治疗提供理论依据。

猪流行性腹泻病毒在稳定表达猪ACE2基因的IPEC-J2细胞中的增殖研究

为获得稳定表达猪源血管紧张素转换酶2(ACE2)的细胞株,用以增殖猪流行性腹泻病毒(PEDV)。构建了稳定表达猪源ACE2的猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2),并对PEDV在该细胞上的增殖进行了分析。将重组表达质粒pCMV3-porcine-ACE2-GFP转染至IPEC-J2细胞后,经潮霉素B筛选和单克隆细胞培养,获得IPEC-J2-ACE2细胞系。通过荧光定量RT-PCR和Western blot对单克隆细胞中ACE2基因的mRNA转录和蛋白表达水平进行鉴定。以PEDV-WH株感染IPEC-J2-ACE2细胞,通过间接免疫荧光试验和荧光定量RT-PCR检测发现,PEDV-WH株在IPEC-J2-ACE2细胞中比在IPEC-J2细胞中的增殖能力高。

鸭甲肝病毒1型和3型HRM检测方法的建立

本研究根据鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)和3型(DHAV-3)的5′UTR基因的保守区域,设计了1对特异性的引物,扩增目的片段大小约为199 bp。通过优化反应条件,建立了基于高分辨率熔解曲线(HRM)分析的鸭甲肝病毒1型和鸭甲肝病毒3型的鉴别检测方法。特异性试验结果表明,该方法能特异性地检测出DHAV-1和DHAV-3,检测其它常见鸭源病毒不能形成特异性的熔解峰;敏感性和重复性试验表明,对p-DHAV-1和p-DHAV-3阳性质粒的最低检测限分别为220 copies和28 copies,对不同批次的样品扩增效果良好,具有良好的批内和批间重复性。采用该方法检测临床样品,与传统的二重PCR方法比较,符合率为100%。该方法为DHAV-1和DHAV-3的临床疑似病例的鉴别检测、快速诊断以及分子流行病学调查等提供了技术支撑。

新型鸭腺病毒4型Fiber2蛋白的表达

Fiber2是鸭腺病毒4型(DAdV-4)的主要结构蛋白和免疫原性蛋白。本研究以DAdV-4毒株DNA为模板进行PCR扩增Fiber2基因片段,转化DH5a,通过EcoRI和HindII酶切后与pET28α载体通过T4DNA连接酶进行连接,构建重组表达载体,经序列测序鉴定后转化BL21(DE3)构建重组表达菌,利用IPTG诱导表达Fiber2重组蛋白,经用SDS-PAGE电泳检测,结果显示,Fiber2重组蛋白能在大肠杆菌以包涵体形式表达。上述研究为鸭腺病毒4型的防控提供物质基础。

规模化种猪场猪瘟血清抗体水平变化规律的分析

为了解猪场猪瘟免疫抗体的现状,掌握规模化种猪场猪瘟强制免疫后其病毒血清抗体水平的变化规律,为制定疫苗精准免疫方案提供科学依据,本研究选取2个规模化种猪场开展猪瘟血清抗体监测工作。采用ELISA抗体检测方法,并结合猪场实际生产业绩,分析猪群猪瘟抗体分布趋势、抗体阳性阻断率、离散度等指标的变化。结果显示,猪场免疫过猪瘟疫苗后,相应抗体平均阻断率高于50%,且离散度CV值低于25%,可视为免疫效果良好;同时猪瘟疫苗有效免疫率高于85%,对应猪瘟发生机率较小。而猪瘟抗体平均阻断值在70%以下,离散度CV值大于30%,尤其阻断值大于50%的个体占群体的80%以下时,猪群免疫失败,猪瘟发生几率风险较大。综合以上分析结果认为,猪场应通过注重生物安全管理,优化免疫方案等措施,有效降低猪群猪瘟的发生率。