犊牛腹泻病因分析及诊断防控综述

【现状】犊牛腹泻是以腹泻为临床症状的一类影响养牛业发展的常见重要疾病。【问题】该病严重时可影响犊牛的生长发育,甚至会造成死亡。该病病因复杂,且发病率和死亡率较高,对养牛业造成巨大经济损失。【对策】因此,在实际生产中,对犊牛腹泻病因做出准确判断并采取行之有效的防控措施尤为重要。【结论】本文从传染病学的角度分病毒、细菌、寄生虫三个方面介绍了导致犊牛腹泻的常见病原体,并阐述了几种常见病原的诊断方法和综合防控措施,为犊牛腹泻的科学防控提供借鉴参考。

绵羊源荚膜血清D型多杀性巴氏杆菌的生物学特性及2种候选疫苗的免疫效果评价

旨在研究新疆绵羊源荚膜血清D型多杀性巴氏杆菌(PmD)的生物学特性,探索其灭活疫苗与OmpH重组疫苗对小鼠的免疫保护效果,为防控新疆地区绵羊巴氏杆菌病提供参考。采用细菌分离鉴定、PCR鉴定、药敏试验、耐药与毒力基因检测、致病性试验等方法初步明确PmD的生物学特性;并通过最佳灭活条件和佐剂筛选、安全性试验、原核表达等方法制备PmD灭活疫苗与PmD-OmpH重组疫苗,采取小鼠攻毒保护试验评价2种疫苗的免疫效力。结果:从绵羊肺脏中分离出1株PmD,药敏试验显示,该菌为7重耐药菌,未检测到耐药基因;毒力基因检测显示,该菌具有12种毒力基因(exbB、exbD、hgbA、tonB、fimA、Oma87、OmpH、Psl、sodA、sodC、tbpA、toxA);致病性较强,对小鼠的最小致死菌量为2.2×105 CFU;灭活疫苗和重组疫苗对相同血清型菌株攻毒的保护率分别为80%和10%;灭活疫苗对血清型A、F和未知菌株攻毒保护率分别为0、20%和0,而重组疫苗的保护率则全为0。本研究发现1株强耐药、强毒力的绵羊源PmD,灭活疫苗对同种血清型菌株的保护性远高于重组疫苗,发病地区羊场可采用同种血清型灭活疫苗进行预防和控制绵羊巴氏杆菌病,对多价疫苗和新型疫苗的研制还有待进一步发掘。

1株牛源冠状病毒的分离鉴定及遗传进化分析

【目的】获得新疆地区牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)毒株,探究BCoV体外分离的最佳条件,了解BCoV新疆株的遗传进化情况,为BCoV疫苗候选株提供研究基础。【方法】通过RT-PCR对来自新疆地区7个牛场的腹泻犊牛小肠及其内容物(n=185)进行BCoV检测,将阳性样本经过处理后接种HCT-8细胞,通过间接免疫荧光试验(IFA)、Western blotting和透射电镜对分离的病毒进一步鉴定,通过Reed-Muench法测定分离株的半数组织培养感染剂量(TCID50),将分离毒株进行全基因组测序,并对测序结果进行遗传进化分析。【结果】腹泻样品BCoV检出率为64.9%,接种HCT-8细胞后成功分离到1株BCoV,命名为XJ-SHZ-37(GenBank登录号:OR750853);IFA可观察到孵育病毒的细胞有绿色的特异性荧光,而对照组没有;Western blotting检测结果显示,该分离株与BCoV N蛋白多克隆抗体发生特异性反应;透射电镜可观察到呈皇冠状的病毒颗粒;Reed-Muench法测定分离株的TCID50为10-7.9/0.1 mL;基因组测序及遗传进化结果表明,XJ-SHZ-37与从牛中分离到的冠状病毒科冠状病毒属的BCoV分离株ZJNB2106相似性最高。【结论】新疆地区7个牛场有较高的BCoV检出率,成功分离出1株能稳定遗传且能与BCoV N蛋白多克隆抗体特异性结合的分离株,该分离株有较高的病毒滴度,且通过遗传进化关系表明与中国牛源毒株ZJNB2106株进化亲缘关系最近。

牛肠道大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

【目的】新疆昌吉市周边某牛场大量犊牛严重腹泻,排黄色水样稀便,有的带血,并出现精神萎靡、食欲不振等症状,为确定此次发病的病原并提供治疗参考。【方法】通过对该牛场出现的犊牛腹泻粪样进行细菌鉴定及分型并进行耐药性分析。【结果】PCR鉴定结果显示为大肠杆菌阳性,染色镜检结果符合大肠杆菌形态特征,分离菌株具有K99黏附性基因。药敏试验结果显示该分离菌株仅对多黏菌素B中介(既不敏感也不耐药),对其他所有受试抗菌药物耐药。在致病性试验中,小鼠在15 h内陆续死亡,说明该菌株具有一定致病力。【结论】结果表明,该牛场犊牛腹泻粪便中分离的菌株为产肠毒素性大肠杆菌,携带K99毒力基因,对多黏菌素B中介,具有一定致病力。

肺炎克雷伯菌与链球菌双重PCR检测方法的构建

【目的】旨在建立一种可同时检测肺炎克雷伯菌和链球菌的双重PCR检测方法。【方法】选取肺炎克雷伯菌KP-Khe基因和链球菌EF-Tu基因保守片段,分别合成2对特异性引物,优化双重PCR反应体系,摸索其特异性、最佳退火温度、引物浓度和细菌核酸浓度,并通过该方法对临床样品进行检测验证。【结果】该双重PCR检测方法可有效扩增出肺炎克雷伯菌和链球菌的489bp和197bp的特异性片段,最适退火温度为58℃、最适引物浓度为12ng/µL、最适模板浓度为3ng/µL。将该方法应用于临床对15份样品进行检测,其中2份样品检测出肺炎克雷伯菌呈阳性,1份样品检测出链球菌呈阳性,与分离鉴定结果一致。【结论】该研究建立的双重PCR技术,可为临床诊断肺炎克雷伯菌、链球菌及混合感染提供了一种便捷高效的检测方法,具有一定的应用价值。

绵羊源溶血性曼氏杆菌A2型的分离鉴定及耐药性分析

【目的】新疆某羊场的羊出现精神沉郁、咳嗽气喘、消瘦等症状,为确定此次发病病原。【方法】该羊场共送检4份病羊肺脏,从肺脏中分离培养了一株细菌并对其进行培养特性观察、PCR鉴定、血清型鉴定、药敏试验和动物致病性试验。【结果】结果显示分离出的一株革兰氏阴性菌,其形状及大小疑似溶血性曼氏杆菌;PCR鉴定结果显示为溶血性曼氏杆菌,分离菌株血清型为A2型。该分离菌株对青霉素、头孢唑林、氨苄西林等敏感;在致病性试验中,小鼠在15 h内陆续死亡,说明该菌株具有一定致病力。【结论】该病例致病原为A2型溶血性曼氏杆菌,对青霉素、头孢唑林、氨苄西林等敏感。

荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌与牛肺炎支原体混合感染犊牛的诊断分析

新疆某牛场的犊牛出现咳喘、鼻镜干燥、精神不振、食欲减退、呼吸困难甚至死亡的症状,通过剖检、细菌分离鉴定、PCR鉴定等方法对其进行检查。结果显示:死亡牛只肺部可见明显出血并且伴有肺部实质性肝变;牛肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌PCR检测都为阳性,溶血性曼氏杆菌PCR检测为阴性。通过实验室诊断,最终确定本次疾病为多杀性巴氏杆菌和牛肺炎支原体引起的混合感染。本研究通过病理变化、实验室诊断等方法找到病因,为此类疾病的防控提供借鉴。

羊巴氏杆菌病研究进展

羊巴氏杆菌病是一种羊常见多发疫病,在全球范围内广泛流行,主要病原为多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm),其中A型和D型是Pm最主要的致病血清型。巴氏杆菌病患羊临床症状以高热、肺炎、顽固性腹泻、关节炎、精神沉郁、高死亡率等为主,是当前致哺乳期羔羊死亡的最主要疫病,严重制约养羊业的发展,目前国内外对羊巴氏杆菌病的深入研究及报道甚少。本文对羊巴氏杆菌病病原学及流行病学、诊断方法、防治措施等进行综述,旨在为进一步深入开展该病的研究提供借鉴。

一例多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌及肺炎支原体混合感染绵羊的诊断

【目的】2022年7月新疆某地区羊场600只2月龄羔羊,其中100只出现反应迟钝、食欲下降、腹泻、体温高达40℃、死亡羔羊高达60只,部分出现不同程度的气喘、流鼻液和呼吸障碍,为了诊断该羊场出现的疾病。【方法】通过观察患病羊群的临床发病情况、对病死羊群的解剖检查、流行病学研究以及实验室检查。【结果】根据临床症状和解剖特征初步判断为肺炎,细菌检测为杆状革兰氏阴性菌,PCR检测多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌为阳性、绵羊肺炎支原体检测为阳性。【结论】确定了新疆某地区羊场的呼吸道病变是由多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌及绵羊肺炎支原体的混合感染造成的。

阿勒泰地区犊牛腹泻临床样品病原学检测与分析

【目的】犊牛腹泻是一类以腹泻为临床特征的犊牛常见重要疾病,在西北地区较为多发,了解致犊牛腹泻不同病原的流行特点和规律对于政府制定针对性综合防控措施具有重要意义。【方法】本研究对阿勒泰地区6个不同区域采集的30份犊牛腹泻临床样品进行牛冠状病毒、牛轮状病毒、牛病毒性腹泻病毒、大肠杆菌、沙门菌、产气荚膜梭菌、巴氏杆菌、曼氏杆菌等8种病原监测分析。【结果】数据显示,本次犊牛腹泻为病毒、细菌混合感染,由冠状病毒、轮状病毒、大肠杆菌引起。【结论】本次致犊牛腹泻的八种传染性病原检测阳性率为86.67%。近三年阿勒泰地区养牛业规模快速增加,频繁的市场流通和品种引进加快了犊牛腹泻病原的地域间传播,是阿勒泰地区犊牛腹泻发病和多重感染增加的重要原因。

牛源大肠杆菌的分离鉴定与耐药性分析

【目的】新疆某牛场的犊牛发生严重腹泻,出现排血便、黄色水样稀便、精神萎靡、食欲不振等症状。为了确定此次发病的病原做了此实验。【方法】无菌采集了20份犊牛粪便样品,从粪便中分离纯化出1株细菌,并对其进行培养特性观察、PCR鉴定、黏附性基因检测、药敏试验和动物致病性试验。【结果】结果显示分离到了一株革兰氏阴性菌,根据形状和大小判断疑似大肠杆菌;PCR鉴定结果显示为大肠杆菌,分离菌株具有F41黏附性基因。该分离菌株对多黏菌素B、阿米卡星、头孢他啶、头孢哌酮等敏感;在致病性试验中,小鼠在15h内陆续死亡,说明该菌株具有一定致病力。【结论】结果表明,此次牛场犊牛腹泻分离的菌株为产肠毒素性大肠杆菌,携带F41毒力基因,对多黏菌素B、阿米卡星等抗生素敏感,具有一定致病力。