黄瓜新品种京研冬美9号的SSR纯度鉴定

种子纯度鉴定是保证种子质量的关键环节。田间小区种植鉴定法,周期长、费用高,无法满足种子贸易中快速鉴定的要求,且受环境影响大,结果不够准确。DNA电泳鉴定技术为种子的纯度鉴定提供了一种更为快速、高效的方法。笔者采用72对SSR引物对黄瓜品种京研冬美9号及其亲本进行多态性筛选。结果表明,12对引物在亲本间具有多态性,并都表现出共显性,在杂交后代中表现为清晰、稳定的父母本互补的带型,特异性强,可以用来区别其中混杂的母本、父本及其他品种的种子。这12对SSR引物作为京研冬美9号及其亲本的核心引物,构成的京研冬美9号的SSR指纹图谱,为京研冬美9号杂交种的亲本提纯、纯度检测及真实性鉴定等工作提供了有效的技术支持。其中,2对引物SSR17922和SSR02118特异性强且谱带清晰,利用这2对引物对京研冬美9号黄瓜种子进行检测,鉴定结果与田间鉴定结果一致,被选为鉴定黄瓜京研冬美9号纯度的特异引物。

荧光假单胞菌2P24防控瓜类果斑病机制初探

为初步解析荧光假单胞2P24对瓜类细果斑病的防控机制,测试其次生代谢物2,4-DAPG、MPC对西瓜嗜酸菌Acidovorax citrulli生长的影响,并比较分析2P24及其突变株△phlD(丧失2,4-DAPG合成能力)及△gacS(丧失2,4-DAPG、HCN、蛋白酶合成能力)的病害防控效果和对甜瓜生理生化指标的影响。结果表明,2,4-DAPG及MPC对病原菌的生长、游动性及生物膜的形成均具有抑制作用;与2P24相比,△phlD对病原菌的生长抑制降低,△gacS丧失生长抑制作用。△phlD及△gacS病害相对防治率分别下降了44.3%和77.1%。2P24对于西瓜、甜瓜幼苗有明显的促生作用,可显著提高幼苗株高和鲜重,同时发现2P24可在病原菌接种后诱导甜瓜抗性相关酶SOD、CAT、POD活性提升及3个相关抗性基因MELO3C023441、MELO3C022146及MELO3C004303的表达。本研究结果为瓜类果斑病的生物防治研究提供了参考和理论依据。

TaqMan探针法实时荧光定量PCR检测西瓜潜隐病毒

【目的】西瓜潜隐病毒(Citrullus lanatus cryptic virus,CiLCV)是近年来新发生的一种重要种传病害,研究旨在建立基于TaqMan探针法的实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR with TaqMan probes,TaqMan-qPCR)检测技术,为开展种子、种苗带毒鉴定和病害防控提供技术支撑。【方法】通过基于小RNA高通量测序技术在北京西瓜产地发现了CiLCV,并克隆CiLCV的dsRNA1和dsRNA2全长序列,设计特异性引物建立RT-PCR和TaqMan-qPCR检测方法。以黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottled mosaic virus)、黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus)、甜瓜内源病毒(Cucumis melo endornavirus)、瓜类褪绿病毒(cucurbit chlorotic yellows virus)、南瓜花叶病毒(squash mosaic virus)、番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus)、西瓜花叶病毒(watermelon mosaic virus)、小西葫芦黄花叶病毒(zucchini yellow mosaic virus)8种常见病毒为对照进行检测方法特异性分析;利用建立的实时荧光定量标准曲线对方法灵敏度进行评价;进一步利用TaqMan-qPCR和RT-PCR技术监测我国葫芦科作物主产区的西瓜、黄瓜、甜瓜和南瓜(砧木)种苗带毒情况。【结果】通过分析获得的高质量小RNA数据,发现17条组装的contig与CiLCV基因组有较好同源性。进一步克隆获得CiLCV的dsRNA1和dsRNA2序列全长(分别为1603和1466 nt),发现其与河南省鉴定出的CiLCV同源性高达99.4%和99.8%(GenBank number KY081285、KY081284)。建立的RT-PCR检测技术对CiLCV有单一扩增条带;建立的TaqMan-qPCR检测技术具有较好特异性和灵敏度,且能够检测到最低拷贝数为2×10^(3)的病毒,灵敏度是RT-PCR的100倍。同时,发现有1份来自北京的西瓜种苗检出了CiLCV,而其余地区的西瓜、黄瓜、甜瓜和南瓜(砧木)种苗均未检出该病毒,表明我国葫芦科作物主产区种苗带毒情况总体不高。【结论】建立的TaqMan-qPCR检测CiLCV技术特异性强、灵敏度高,适用于口岸和实验室开展CiLCV快速检测和精准鉴定。鉴于CiLCV可以通过种子、种苗等传播方式快速扩散,我国应重视种子、种苗的带毒检测,防止带毒种子、种苗流入生产环节进而调运扩散至全国,给产业造成重大经济损失。

育苗温室辣根素消毒处理效果研究

辣根素是从十字花科植物中提取的一类次生代谢产物,是一种新型速效、高效和低毒农药。本研究选取北京大兴区、通州区的3个育苗专用日光温室开展试验,研究了辣根素药剂喷雾处理方式下日光温室消毒效果。通过对比消毒处理前后温室内环境、设施设备表面微生物的数量及种类,发现消毒处理后温室沉降平板真菌、细菌数量均显著降低;另外,棚膜及苗床表面细菌总量均有所下降,其中部分温室育苗床表面消毒前后细菌数量差异显著;进一步结合真菌形态与ITS序列分析鉴定主要分离真菌有:Alternaria属、Curvularia属、Rhizopus属、Aspergillus属、Penicillium属,其中含有Alternaria tenuissima、Alternaria alternate 2类链格孢属植物致病菌,其数量和分离比率在消毒处理后均有所降低。本研究证明,辣根素作为育苗温室消毒药剂对温室环境及设施表面有较好的消毒效果。

侵染山东黄瓜的西瓜银斑驳病毒分子鉴定

0引言西瓜银斑驳病毒(watermelon silver mottle virus,WSMoV)属于番茄斑萎病毒科(Tospoviri-dae)正番茄斑萎病毒属(Orthotospovirus)确定种,主要通过蓟马以持久性方式进行传播[1]。该病毒含有3条单链RNA(L,M,S)。L RNA为负义链,含有1个开放阅读框架(open reading frame,ORF),负责编码RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp);M RNA为双义链,含有2个ORF,编码M链非结构蛋白(non-structural protein on the M segment,NSm)和病毒膜蛋白Gn/Gc的前体蛋白;S RNA也是双义链,含有2个ORF.

甜瓜内源病毒CmEV的TaqMan RT-qPCR检测方法研究

甜瓜内源病毒(cucumis melo endornavirus,Cm EV)是近年来发现的寄主广泛、发病率高、种传率高的重要病毒。利用Cm EV基因组的序列信息设计特异性引物和探针,建立基于探针法的实时荧光定量PCR(Real-Time Fluorescent Quantitative PCR with Taq Man probes,Taq Man RT-q PCR)的检测方法。该方法可以检测出1×10^(-2)ng·μL^(-1)的RNA和1.8×10^(3)copies·μL^(-1)的质粒,灵敏度是普通PCR的100倍。利用该方法检测了在北京、山东、辽宁、海南瓜类种苗主产区的甜瓜、西瓜、黄瓜与南瓜砧木11份种苗带毒情况,发现山东和海南各有1份甜瓜种苗携带Cm EV。本研究建立的CmEV TaqMan RT-q PCR方法特异性好、灵敏度高,可为开展病毒精准鉴定、科学防控以及从源头遏制病毒传播提供技术支撑。