4种藏药提取物对产气荚膜梭菌生物被膜及孢子形成的影响

为了探究4种藏药提取物对产气荚膜梭菌生物被膜及孢子形成的影响,试验利用银染法鉴定产气荚膜梭菌Nyingchi-C20株的生物被膜,采用结晶紫法检测生物被膜形成能力,采用微量肉汤稀释法检测4种藏药提取物的最小抑菌浓度(MIC)。选取抑菌效果较好的藏药提取物稀释后分为6组,分别为液体硫乙醇酸盐培养基(TSB)组、1/8 MIC组、1/4 MIC组、1/2 MIC组、MIC组和抗生素万古霉素MIC(VAN)组,每组接种菌悬液300μL后加入各组药液至30 mL,培养后取各组生物被膜悬液,采用实时荧光定量PCR检测其对生物被膜形成及孢子形成相关基因表达的影响。结果表明:马兜铃甲醇提取物及诃子、波棱瓜子、白豆蔻75%乙醇提取物MIC分别为0.2 mg/mL、0.8 mg/mL、0.4 mg/mL、1.6 mg/mL。与TSB组相比,马兜铃甲醇提取物各MIC组agrB基因与htrA基因(除1/8 MIC组和1/4 MIC组外)的表达水平显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),1/2 MIC组和MIC组sigK基因的表达水平显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01);诃子75%乙醇提取物1/8MIC组(除ribD、codY、spo0A基因外)、1/4MIC组(除ribD基因外)、1/2MIC组、MIC组agrB、htrA、abrB、ribD、codY、spo0A基因表达水平显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01);波棱瓜子75%乙醇提取物1/4 MIC组、1/2 MIC组及MIC组agrB基因相对表达水平极显著降低(P<0.01),1/8MIC组、1/4 MIC组、1/2 MIC组及MIC组minD基因相对表达水平极显著升高(P<0.01);白豆蔻75%乙醇提取物1/2 MIC组argG、ribD基因及MIC组argG、ribD、ribE基因相对表达水平显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01)。说明4种藏药提取物对Nyingchi-C20株具一定的抑制作用,对其生物被膜及孢子形成相关基因表达有不同程度的影响。

4种藏药提取物与抗生素对产气荚膜梭菌生物被膜的影响

采用微量肉汤稀释法测定3种方法提取的4种藏药提取物及12种抗生素对(Clostridium perfringens,C.perfringens)的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),棋盘法检测藏药提取物与抗生素的联合抑菌效果,结晶紫染色法测定20株牦牛源产气荚膜梭菌生物被膜(biofilm,BF)成膜能力,并检测藏药提取物与抗生素单用及联合使用对BF的抑制效果。结果显示:水提诃子对45.0%的C.perfringens的MIC≤0.80g/L;波棱瓜子75%乙醇提取物及马兜铃甲醇提取物对20株C.perfringens的MIC均≤0.40g/L;强力霉素和氨苄西林对19株C.perfringens的MIC≤0.25mg/L,万古霉素的MIC均≤0.50mg/L;诃子75%乙醇提取物与庆大霉素联用抑菌效果较好,对70.0%的C.perfringens产生协同作用;20株产气荚膜梭菌均具有BF成膜能力,55.0%的菌株呈强成膜能力;被检抗生素中多黏菌素B对BF的抑制作用最强,在1/4MIC处有强抑制效果;被检藏药提取物中马兜铃甲醇提取物与诃子75%乙醇提取物在1/2MIC处对BF具有强抑制效果;庆大霉素与诃子75%乙醇提取物联用及多黏菌素B与马兜铃甲醇提取物联用在两者均为1/4MIC时对BF仍有强抑制效果。结果表明,4种藏药提取物对C.perfringens具有抑菌效果,对其BF的形成具有抑制作用,与抗生素联用能增强抑制效果,需进一步对藏药抑菌机制进行研究。