利用SNP和EST-SSR分子标记鉴定荔枝新种质御金球

本研究利用自主开发的荔枝SNP和EST—SSR两种分子标记技术，对近年发掘的荔枝优稀种质御金球进行分子鉴定，明确其与现有的363份荔枝种质的亲缘关系，以探索其是否为新种质，并揭示亲本来源，为进行新品种保护提供分子证据。结果表明，13对EST—SSR引物在364份种质中共产生122条谱带，其中多态性条带112条（91．8％）；筛选出的17对SNP引物均表现为二等位性。御金球与363份荔枝种质的演化分化系数介于0．043～1．924之间，遗传相似性系数介于0．123—0．877之间。可见，御金球与现有的363份荔枝种质在分子水平上存在差异，证实御金球为一份全新荔枝种质。通过对该种质与22份疑似亲本进行EST—SSR和SNP分析，并结合表型资料及品种起源信息，初步认为御金球是杂交后代，且母本为糯米糍，父本为焦核怀枝的可能性最大。SNP分型技术首次成功地用于荔枝新种质御金球的亲本来源鉴定，为今后荔枝种质的鉴别提供了可借鉴手段。

香蕉枯萎病病原菌的研究进展

香蕉枯萎病是香蕉生产中最为严重、具有毁灭性的病害之一,已成为限制世界香蕉产业可持续发展的重要难题。本文根据国内外近年来香蕉枯萎病的研究概况,综述了病原菌的分离、培养和鉴定等基本研究方法,以及病原菌的分类、进化关系和分子鉴定等研究进展,以期能为中国香蕉枯萎病研究工作者提供借鉴,尽早解决香蕉枯萎病难题。

抗感枯萎病香蕉的细胞结构抗性研究

香蕉枯萎病是影响世界香蕉产业的毁灭性病害。本研究对香蕉枯萎病抗病品种抗枯5号香蕉、粉杂一号粉蕉和感病品种巴西香蕉和广粉一号粉蕉的幼苗根系接种后的球茎组织的进行了超微结构变化观察,结果表明清水对照中4个品种球茎组织的细胞形态和结构正常且完整,细胞代谢强;枯萎病原菌侵染处理下,病菌从根部受损部位侵入,穿过薄壁组织后进入维管组织,球茎木质部导管中相继出现侵填体及一些灰褐色物质,质壁分离;感病品种巴西香蕉和广粉一号粉蕉的球茎细胞壁破损断裂,细胞器肿胀变形,膜溶解呈不完整状态;抗病品种抗枯5号香蕉和粉杂一号粉蕉受害较轻,细胞器膜受损较轻,内部结构基本无破损,其维管细胞壁加厚,皮层薄壁细胞壁木栓化,尤其在抗枯5号香蕉品种中出现乳突的抗病特征。抗病品种的这些防卫反应阻碍了病原菌的进一步入侵及输导。

利用SNP分子标记分析鉴定不同形态的化橘红(Citrus grandis var.tomentosa)单株

【目的】在对比化橘红不同品种形态特征的基础上,利用SNP(Single nucleotide polymorphism)分子标记分析其遗传差异,以期获得能准确鉴定化橘红不同品种的有效方法。【方法】依据叶片及果实茸毛特征,从不同果园采集9个代表性的化橘红单株,分别对果实及叶片进行测定。采用14个SNP位点,结合高分辨率熔解曲线分型(High resolution melting analysis,HRMA)技术对供试材料进行遗传多样性分析。【结果】同一采样地‘光青’单株8和9,仅叶片宽度存在显著差异,果实及叶片的其他特性差异不明显;同一采样地单株样4(‘正毛’)与样7(‘副毛’)的叶形指数及果形指数差异不显著,但叶片及果实的其他特性差异显著;同一果园不同品种的单株叶片及果实部分特性差异不显著。不同果园的同一品种单株,因栽培条件及管理等方面的差异,叶片及果实的部分特征存在显著差异。采用14个SNP位点可将9个化橘红样本有效区分,平均PIC(Polymorphism information content)值为0.29,所有SNP位点的平均自交系数为-0.09。【结论】仅凭形态特征很难区分化橘红不同品种的单株,而采用14个SNP位点能有效鉴定化橘红不同品种的单株。

茶树油粕水粗提物控制香蕉采后炭疽病害的研究

为探明茶树油粕提取物对香蕉采后主要病害炭疽病的防治作用,通过正交试验优化茶树油粕粗提物的水提取方法,并以茶皂素为对照,研究提取物对香蕉炭疽病菌离体生长和香蕉果实活体接种致病斑的作用效果。结果显示,以料液比1∶7（m∶V）,在85℃条件下,将干燥的茶树油粕浸提2～2.5 h,或95℃条件下浸提1.5 h,粗提物的提取率较高,可达50%以上。获得的水粗提物可抑制离体培养的香蕉炭疽病菌的生长,且浓度越高,抑制效果越明显,当浓度≥0.2 mg·mL-1时,抑制率可达100%;而其10倍浓度的茶皂素（2 mg·mL-1）才具100%的完全抑制效果。茶树油粕水粗提物处理香蕉果实后,可显著抑制活体接种果实炭疽病病斑的扩展,而同浓度的茶皂素没有明显抑制效果。初步研究表明,茶树油粕水粗提物对香蕉炭疽病菌的离体和活体控制效果显著优于茶皂素,说明粗提物中含有除茶皂素之外的抑菌活性组分,且起主要的抑菌作用。

MiAsg分子克隆及与南方根结线虫病害的关系

根结线虫(Meloidogyne spp.)是一种世界性的植物病害。在前期研究中,通过利用生物信息学方法在线虫全基因组中预测了一些功能基因。本研究以预测到的线粒体ATP合成酶g亚基基因(Asg)序列设计特异引物克隆了南方根结线虫(M.incognita)的Asg基因(MiAsg),对其序列进行了特征分析后,利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术,将其导入番茄植株,然后接种M.incognita,研究MiAsg基因与根结线虫病害的关系。结果表明,克隆到的MiAsg基因与预测到的MiAsg基因相似性高达100%。接种M.incognita 60 d后,MiAsg基因沉默的番茄植株根结数分别比空载体对照减少了59.6%,比清水对照降低了59.5%。结果表明,MiAsg基因沉默对根结线虫病害具有很好的防控效果,也说明MiAsg基因可能参与线虫的致病性。

龙眼大枝疏花研究初探

龙眼疏花疏果是提高果实品质、克服大小年的重要措施,但目前龙眼疏花疏果技术的推广应用尚不尽人意,主要原因是疏花疏果费工费时,效率低,加上龙眼树冠普遍较高大,生产上操作实施困难。为此,我们开展探讨龙眼大枝疏花的可行性试验,同时还开展了大枝疏花后枝梢生长对龙眼坐果的影响以及对结果母枝质量的影响试验。通过大枝疏花与传统疏花的比较,大枝疏花可大幅度提高工效4~5倍,使大果园大树冠的疏花能够全面实施。大枝疏花后新梢的生长对龙眼的坐果没有影响。虽然疏除部分大枝对当年的产量稍有影响,但树冠降低、秋梢结果母枝的质量大为提高,使翌年的产量更有保障,是疏花及树冠控制相结合的好措施,值得在生产上推广应用。

‘金丰黄皮’品种选育研究

黄皮Clausenalansium（Lour.） Skeels为我国华南原产，最少已有1500年的栽培历史。广东省种植黄皮历史悠久，是我国主产区之一，主要分布在粤中的广州地区、粤东的潮汕地区和粤西云浮地区的郁南县。广东茂名地区近年发展很快，其他城市也有不同规模的种植。目前，黄皮生产上栽种的品种以鸡心黄皮和郁南无核黄皮为主。因成熟期较集中，且在现蕾期常受天气的影响，容易出现大小年结果，影响果农的收入。为了延长黄皮供应期及克服大小年结果现象，选育早熟、丰产、稳产的优良品种，对发展黄皮生产有重大意义。

韭菜对香蕉枯萎病菌的拮抗及其对盆栽香蕉枯萎病发生的抑制作用

通过韭菜粗提取液与香蕉枯萎病生理4号小种(Foc4)的互作及大棚盆栽试验,研究韭菜对Foc4的抑制作用及其在盆栽条件下对香蕉枯萎病的防控效果。结果表明:韭菜粗提取液能够有效地抑制Foc4菌落的生长,对其有显著的致死效应;盆栽试验显示:在人工接菌的泥炭土和自然带菌的田园土中,韭菜提取液和韭菜残体处理均能显著降低‘巴西(’AAA)香蕉和‘广粉1号(’ABB)粉蕉的枯萎病发病率,降低植株病情指数,从而达到高效的防控效果。

龙眼密闭园树冠改造模式

在多年试验基础上,介绍果园间伐以及全回缩、轮边回缩、压顶回缩、枝条轮换回缩等修剪模式的使用方法,探讨龙眼密闭园树冠改造模式,并提出枝条轮换回缩新的修剪模式。

泰国龙眼反季节栽培技术及对我国龙眼栽培的启示

经过连续几年的技术合作指导研究,对泰国龙眼反季节栽培技术有了较深入的了解。文章从泰国龙眼采果后修剪、枝梢培养、反季节催花技术、成花后的管理、采收及存在的问题展开详细介绍,并提出一些与我国龙眼栽培不太一样的技术措施,供大家学习参考。

泰国龙眼生产优势及对我国龙眼产业的启发

总结了泰国龙眼生产状况,分析其生产优势,并借鉴泰国龙眼产业成功的经验,对我国龙眼产业发展提出相应的建议。

一种适用于龙眼人工杂交的改良方法

传统龙眼人工杂交存在效率低下、坐果率较低等问题。为了提高杂交效率,作者研发了一套改良型的人工杂交新方法。具体操作方法:在龙眼母本植株的花穗定型后将要开花前,采用多效唑处理母本植株,大量减少雄花数量,促使单一花穗的雌花集中开放;采摘雄花盛开的父本花穗枝条,对着母本花穗轻轻摇动,使花粉飘散,完成人工杂交授粉,然后去除剩余的花蕾,套袋即可。与传统杂交方法相比,改良人工杂交新方法可以大幅度提高工作效率,将传统单个花穗完成授粉时间从4~6 d减少到2 d,同时达到提高坐果率的目的,在龙眼杂交育种上具有较好的推广前景。

利用SNP分子标记分析化橘红种质资源

本研究利用高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)方法对21份化橘红及3份近缘种质蜜柚和黄皮的25个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点进行了基因分型。结果表明,所有样品在其中21个SNP位点表现出较好的多态性,共呈现出11种基因型,其中化橘红基因型有9种,SNP位点平均杂合度为0.363 1,多样性信息含量(PIC)平均值为0.266 3;21个SNP位点可将24份样本分为3类,化州橘红种质单独聚为一类,表明SNP分子标记将成为化州橘红种质资源评价及品种鉴定的一项重要工具。另外,化橘红种质资源可能存在更多的品系,而不止是当前认为的"正毛"、"密叶正毛"、"副毛"、"光青"、"假西洋"、"黄龙"6个品系,且化橘红种质资源存在着同名异物和同物异名的现象。本研究为化橘红种质资源鉴定提供了有效的方法和依据,应用前景广阔。

二倍体香蕉种质资源花粉活力检测方法的筛选

本研究利用4种父本育性较强的二倍体香蕉(Musa spp.)种质,比较不同染色法和离体萌发法检测香蕉花粉活力的效果,以期筛选适合香蕉花粉活力快速检测的方法。结果显示:醋酸洋红和I-KI染色法处理后的香蕉花粉形态较模糊,而TTC法与MTT法的染色效果较好,花粉形态较清晰,容易区分染色与未染色的花粉;适合香蕉花粉离体萌发的培养基中,蔗糖浓度为15%,pH值为5.8;MTT染色法结果与离体萌发法结果相关性最好,说明MTT染色法的结果较其他染色法准确、可靠。利用MTT染色法,本研究比较了17份二倍体香蕉种质的花粉活力,结果显示:‘Calcutta 4’(M.acuminata ssp.burmannicoides(AA))、BGY3(M.balbisiana(BB))、Malaccensis(M.acuminata ssp.malaccensis(AA))、Balbisiana(M.balbisiana(BB))等4份野生类型种质,以及双单倍体种质‘CIRAD 930’(M.acuminata ssp.malaccensis var.DH Pahang(AA))的染色率超过50%,而3份改良二倍体种质和4份栽培类型种质的染色率低于30%。

利用SNP标记鉴定荔枝杂种后代

本研究利用SNP标记对‘白糖罂’ב禾虾串’、‘禾虾串’ב白糖罂’及‘白糖罂’ב无核荔’3个荔枝杂交组合F_1代共131个单株的真实性进行了鉴定。利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术,从155个均匀分布在荔枝基因组的SNP标记中筛选出在上述杂交亲本中表现为不同纯合基因型的SNP位点;结合高分辨率熔解曲线技术,利用上述SNP位点对各个组合的杂交苗F_1代进行了SNP分型。SNP分型结果显示,杂种F1代的基因型呈现杂合基因型、父本纯合基因型和母本纯合基因型3类。针对‘白糖罂’ב禾虾串’、‘禾虾串’ב白糖罂’及‘白糖罂’ב无核荔’3个杂交组合,均只利用一对纯合共显性SNP标记即成功完成所有F_1代单株的鉴定,真杂种率分别为93.6%、96.8%和72.5%。SNP标记首次成功应用于荔枝3个F_1杂交群体的鉴定,为今后荔枝杂交育种中的真假杂种鉴定提供了可借鉴手段。

荔枝新种质‘燎原’的分子标记鉴定

本研究利用特异性EST-SSR和SNP分子标记,对云南保山地区发现的荔枝新种质‘燎原’进行分子鉴定。通过研究其与现有367份荔枝种质(栽培品种与野生半野生种质)的亲缘关系,以明确其是否为一份新的种质,并揭示其亲本来源。基于34对EST-SSR标记和21对SNP标记的分析,燎原与其他367份荔枝种质的遗传相似系数介于0.289~0.849之间,遗传分化系数介于0.071~0.643之间,证实燎原应是一份与现有荔枝种质资源完全不同的新种质。进一步对燎原及其22份疑似亲本进行EST-SSR和SNP分析,并结合品种起源信息、果实成熟期以及植株表型特征,本研究推测‘燎原’是云南本地种质与外来广东栽培品种的杂交后代,即其母本为元矮,一个从本地半野生褐毛荔枝中选出的矮化变异品种,父本则为大造或中山状元红。

香蕉A基因组6个品种的核型分析

以6个A基因组香蕉(Musaspp.)品种为材料,采用改良的去壁低渗法对其核型特征进行分析。‘天宝蕉’(AAA)核型公式为2n=3x=33=3M+27m(3SAT)+3sm,属"1A"核型;‘海南贡蕉’(AA)核型公式为2n=2x=22=2M+18m(2SAT)+2sm,属"2A"核型;‘玫瑰蕉’(AA)、‘贡蕉’(AA)、‘抗枯1号’(AAA)和‘抗枯5号’(AAA)核型公式分别为2n=2x=22=2M+16m(SAT)+2sm+2st,2n=2x=22=4M+16m(SAT)+2sm,2n=3x=33=6M+15m(3SAT)+12sm和2n=3x=33=6M+15m(3SAT)+12sm(3SAT),属"2B"核型。基于核型分析结果,绘制了6个香蕉品种的核型模式图。