鲟源致病性嗜水气单胞菌X1的分离鉴定与药敏特性研究

从患细菌性败血症的西伯利亚鲟(Acipenser baerii)的体内分离到一株致病菌株X1,其对西伯利亚鲟的半数致死浓度(LC50)为5.62×105CFU/mL,具有较强毒力;菌株X1为革兰氏阴性杆菌,菌体大小为1.0μm～1.2μm×2.1μm～2.4μm,周生侧鞭毛,在兔血琼脂平板上能形成明显的β-溶血圈,经ATB细菌鉴定仪鉴定和16SrDNA序列分析,菌株X1为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)(登录号:EU669667);其系统发育分析表明,菌株X1与嗜水气单胞菌ATCC35654(登录号:X74676.1)的亲缘关系最近,其同源性为99%。此外,菌株X1对先锋必、左氟沙星等2种药物高度敏感,对妥布霉素、氟哌酸、舒普深、卡那霉素、庆大霉素、复达欣、万古霉素、新霉素、多粘菌素B、洛美沙星等10种药物中度敏感。

恩诺沙星及其代谢产物在中华绒螯蟹血淋巴中的比较药代动力学

研究了不同水温(16℃、25℃)、不同给药剂量(10 mg/kg、20 mg/kg)和不同给药方式(肌注、口灌)等条件下,恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星在中华绒螯蟹体内的药代动力学,比较了不同条件下药物在蟹血淋巴中的吸收、分布和代谢的差异。结果表明,恩诺沙星在蟹血淋巴中的药-时数据符合开放式二室模型。16℃时以10 mg/kg剂量肌注给药后,恩诺沙星在蟹血淋巴的主要药代动力学参数为:AUC96.818 mg/(L.h),Cmax6.54μg/mL,t1/2α0.851 h,t1/2β95.415 h;25℃时以10 mg/kg剂量肌注给药后,恩诺沙星的主要药代动力学参数为:AUC168.457 mg/(L.h),Cmax7.12μg/mL,t1/2α0.58h,t1/2β88.833 h;25℃时以20 mg/kg剂量肌注给药后,恩诺沙星的主要药代动力学参数为:AUC155.612 mg/(L.h),Cmax11.045μg/mL,t1/2α5.239h,t1/2β88.378 h;25℃时以10 mg/kg剂量口灌给药后,恩诺沙星的主要药代动力学参数为:AUC86.525 mg/(L.h),Cmax3.469μg/mL,t1/2α8.071h,t1/2β61.842 h。不同条件下,恩诺沙星在蟹血淋巴中的主要药代动力学参数差异较大。恩诺沙星的活性代谢产物环丙沙星在各种给药条件下的蟹血淋巴中均能检出,但含量均处于较低值,且药-时数据不能用房室模型拟合,表明恩诺沙星在蟹体内只有极少部分代谢为环丙沙星。

微生物显色法快速检测水产品中恩诺沙星残留

针对水产品中恩诺沙星残留,通过筛选药物敏感菌株和显色剂,建立了一种基于显色反应来判断结果的微生物检测方法。以腾黄八叠球菌(Sarcina ureae)为指示菌株,以氯化三苯四氮唑显色为显色剂,阳性样品呈肉眼可辨的红色,阴性样品呈无色,最低检测限可达50μg/kg。经酶联免疫法(最低检测限可达12μg/kg,回收率在74.25%～93.38%之间)和高效液相色谱法(最低检测限可达5.0μg/kg,回收率在78.20%～91.27%之间)验证,该方法准确、可靠。不同于传统的方法,该方法更为快速、便捷、易于结果判定,是对现有检测方法的一种有益的补充和完善,极其适合在生产、销售、流通等非实验室条件下作为初筛方法使用。

壳聚糖对异育银鲫和中华绒螯蟹淋巴细胞部分特性的影响

通过体外及体内实验2种途径,探讨了壳聚糖对异育银鲫(Carassius auratus gibelio)和中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)的血淋巴细胞部分特性的影响。体外实验通用3H-TdR、14C-UR、3H-Val掺入法研究了不同剂量[0μg/mL(对照)、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL和100μg/mL]的壳聚糖对异育银鲫PHA和LPS刺激的淋巴细胞DNA、RNA和蛋白质增殖的影响。结果表明,随着蟹血淋巴中壳聚糖剂量的增加,检测到3H-TdR、14C-UR、3H-Val的放射强度逐渐增强,当壳聚糖终质量浓度达20μg/mL时,PHA和LPS刺激的DNA、RNA、蛋白质增殖作用达到最大值,而壳聚糖的终质量浓度达到100μg/mL时,放射强度低于不添加壳聚糖时,表明此时的壳聚糖剂量抑制了淋巴细胞DNA、RNA和蛋白质的增殖。同样,随着鲫血淋巴中壳聚糖剂量的增加,检测到3H-TdR、14C-UR、3H-Val的放射强度也逐渐增强,当壳聚糖终质量浓度达10μg/mL时,经PHA和LPS刺激的放射强度达峰值,其每分钟放射性计数(cpm)分别为11133、8882,8457、6726,5964、4286,而壳聚糖的终质量浓度达到100μg/mL时放射强度甚至低于不添加壳聚糖时,表明此时的壳聚糖剂量抑制了淋巴细胞DNA、RNA和蛋白质的增殖。同时,利用流式细胞仪技术,检测了以壳聚糖(100mg/kg)投喂鲫和蟹不同时间(7～30d)后淋巴细胞的细胞周期(Cellscycle)、增殖指数(PI)和凋亡指数(AI)的变化情况。结果表明,各采样时间蟹淋巴细胞的细胞周期、增殖指数(PI)和凋亡指数(AI)与对照组无显著差异(P>0.05);日粮中添加壳聚糖后对鲫淋巴细胞AI没有显著影响(P>0.05),但对PI则显著提高(P<0.05),对鲫淋巴细胞周期中的G2/M和S时相的比例显著或极显著提高。实验结果提示,壳聚糖可促进鲫和蟹淋巴细胞的增殖,从而增强其免疫机能,但不同水产动物对壳聚糖的免疫刺激作用敏感性不同。

恩诺沙星对蛭弧菌生长及吸附的影响

本实验通过观察不同浓度恩诺沙星对固体培养条件下蛭弧菌产生噬斑和液体培养条件下蛭弧菌增殖的情况,以及蛭弧菌在不同浓度恩诺沙星下吸附到载体上的情况,研究了恩诺沙星对蛭弧菌BDF-H16生长及吸附的影响。实验发现:2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL和50μg/mL恩诺沙星对蛭弧菌BDF-H16噬斑的产生及增殖均具有抑制作用(P<0.05)。在固体培养72h后,随着恩诺沙星浓度逐渐增大,蛭弧菌BDF-H16产生的噬斑数目逐渐减少;在液体培养72h后,随着恩诺沙星的浓度逐渐增高,蛭弧菌BDF-H16的增殖浓度不断减少,但10μg/mL恩诺沙星并没有改变蛭弧菌BDF-H16的生长趋势。此外,以沸石作为吸附载体,2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL和50μg/mL恩诺沙星降低了蛭弧菌BDF-H16吸附量,随着恩诺沙星浓度的增大,蛭弧菌BDF-H16的吸附量逐渐降低,而蛭弧菌BDF-H16的吸附率却在一定恩诺沙星浓度(2μg/mL～20μg/mL)下却有所升高(P<0.05)。以上结果表明,恩诺沙星对蛭弧菌BDF-H16噬斑的产生及增殖具有抑制作用,但在有载体存在的情况下,蛭弧菌的吸附能力在一定恩诺沙星浓度范围内有所增强,添加载体沸石有助于降低恩诺沙星对蛭弧菌BDF-H16的不良影响。

噬菌蛭弧菌对鲟鱼免疫相关酶活性的影响

试验对鲟鱼基础饲料喷洒蛭弧菌制剂,喷洒量分别为0(对照组)、3、6、9mg/g,于30d后分别测定血清中免疫相关酶的活性,结果表明,相对于对照组,试验组的溶菌酶活性、AKP活性都极显著的增强(P<0.01);试验组的POD活性有显著的增强(P<0.05)。综合本次研究结果表明,饲料中添加蛭弧菌能对鲟鱼体内免疫相关酶系统产生积极的调理改善作用,使其非特异性免疫力得到改善与提高。结合养殖成本与文章结果得出的最低有效浓度,建议其适宜添加量为5～8mg/g。