亚洲1型口蹄疫病毒RS株非结构蛋白P3区基因特征分析

经RT-PCR扩增得到一株口蹄疫亚洲1型流行毒株的非结构蛋白P3基因核苷酸序列,与其他代表性参考毒株的P3基因进行比较,分析该毒株P3区基因特征。结果表明,该毒株P3基因含有2721个核苷酸,编码907个氨基酸;其中非结构蛋白3A的基因长度为459bp,编码153个氨基酸;3个3B(VPg)基因长度分别是69、72、72bp,分别编码23、24、24个氨基酸;3C基因长度为639bp,编码213个氨基酸;3D基因长度为1410bp,编码470个氨基酸。氨基酸序列比较分析显示,3A基因C末端比其他基因更容易变异,根据3A基因构建的系统进化分析提示该流行毒株与YNBS/58和IND 321/01亲缘关系较近,属同一亚系谱。

非洲马瘟病毒群特异性RT-PCR检测方法的研究

非洲马瘟病毒(African horse sickness virus,AHSV)为双股RNA病毒,感染所有马科动物。设计2对位于AHSV基因组S7片段的引物,经RT-PCR扩增,证实2对引物对6种血清型的AHSV RNA均有特异性扩增,且能对同属的蓝舌病病毒(BTV)、鹿出血热病毒(EHDV)进行区别诊断。经序列测定及Blast,证实所扩增的条带确为AHSV S7相应位置核苷酸序列,表明已初步建立AHSV群特异性RT-PCR检测方法。

非洲马瘟病毒分型RT-PCR检测方法的研究

为验证所引进9个血清型的非洲马瘟病毒,并同时对其分型鉴定方法有所探索,根据参考文献设计位于AHSV基因组L2片段的型特异性分型引物,用RT-PCR及测序方法进行实验研究。抽提所引进9种血清型的RNA,经RT-PCR扩增,各引物均有特异性扩增,经进一步的核苷酸序列测定及分析,证实所扩增片段均为非洲马瘟病毒L2基因相应位置片段;同时对AHSV分型RT-PCR检测方法进行了改进优化研究。实验证实分型引物对各RNA均有特异扩增,所引进9个血清型为正确血清型,并建立了适合实验室条件的AHSV分型鉴定方法。