人工老化甜菜种子基因组DNA损伤的ISSR研究

本文以甜菜种子为研究对象，对经过高温高湿（40℃，RH100％）处理后的种子基因组DNA提取方法及DNA损伤的ISSR指纹图谱进行了比较研究。研究结果表明：在改良CTAB法基础上，用25：24：1的Tris饱和酚／氯仿／异戊醇抽提三次，并在提取出的DNA中加入1ml的RNA水解酶，用此方法提取甜菜干种子中的DNA纯度高、破损小、完整性好。此外，筛选出适合老化甜菜种子ISSR分子标记分析的5条引物即u824、u827、u834、u835、u857，并建立了甜菜种子老化处理后的ISSR特异性谱带。通过对谱带的分析发现DNA的损伤区域主要为高分子量（2000—750bP）。随着种子老化程度的加深，ISSR条带减少，亮度变浅甚至消失。

甜菜SSR—PCR反应体系优化及基于DNA混合池的SSR引物快速筛选

应用L16（4^4）正交设计对影响甜菜SSR—PCR的主要参数进行优化，建立适于甜菜的SSR反应体系和扩增程序。20ul反应体系中含有模板70ngDNA，150umol／LdNTP，0．7umol／LSSR引物，0．5TaqDNA聚合酶／U，10×PCRBuffer（含Mg^2＋）2．0ul。以选择的87对SSR引物为对象，对10个甜菜基因组DNA样品等量混合，进行PCR扩增筛选引物，结果表明，与常规筛选方法相比，DNA混合池方法大幅度缩短了实验周期，显著减少了实验资源的消耗，可用于大量甜菜SSR引物的快速高效筛选。