二氧化硅-氧化石墨烯复合物固相萃取-高效液相色谱法检测植物油中黄曲霉毒素B_1、B_2

以二氧化硅-氧化石墨烯复合物为固相萃取材料,建立了植物油中黄曲霉毒素B1、B2的高效液相色谱（HPLC）检测方法。优化的条件为：复合材料的最佳用量为0.15 g,最佳萃取时间20 min,洗脱溶剂为乙腈,洗脱次数为2次。结果表明,在优化条件下,建立的二氧化硅-氧化石墨烯复合物固相萃取-高效液相色谱法对黄曲霉毒素B1、B2的检出限分别为0.17和0.05μg/L。将本方法应用于植物油实际样品的检测中,加标回收率在81.4%~105.3%之间,相对标准偏差为1.3%~8.6%。

农产品中黄曲霉毒素的时间分辨荧光免疫层析快速检测技术研究

【目的】黄曲霉毒素严重污染农产品,威胁人畜生命健康,是政府重视、社会关注的一大焦点问题,因此亟需研究建立黄曲霉毒素高灵敏高快速检测方法。目前已研制出高特异性高灵敏度黄曲霉毒素单克隆抗体,本研究旨在应用该抗体,建立黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析快速检测技术,为农产品质量监管、风险评估提供技术支持。【方法】本研究通过将黄曲霉毒素抗体与乳胶铕进行偶联标记,利用自主研制的黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条进行黄曲霉毒素检测,通过检测线T信号值与质控线C信号值的比值和标准溶液浓度的自然对数值实现定量。针对花生、稻米、植物油等不同农产品,研究建立样品粉碎均质提取一体化技术。对铕标记时间分辨荧光免疫层析检测技术进行方法学考核,以花生、稻米、植物油等为例,进行实际样品检测,并与HPLC法进行结果比对。【结果】在花生、稻米、植物油等农产品实际样品检测中,本研究建立的时间分辨荧光免疫层析检测技术检测黄曲霉毒素B1得到检测限均为0.3μg·kg-1,线性范围分别为0.8—25、0.8—15和0.8—30μg·kg-1。上述3种农产品对应的标准曲线的线性方程分别为y=0.238x+0.654(R2=0.992)、y=0.321x+0.811(R2=0.990)和y=0.146x+0.173(R 2=0.993),标准偏差分别为0.024、0.039和0.021。该方法的批内准确度和精密度添加回收试验结果表明,添加回收率在81.0%—113.0%,变异系数在7.2%—14.2%;批间准确度和精密度试验结果显示,添加回收率在75.8%—114.9%,变异系数在7.7%—15.3%。说明该检测技术批内、批间均具有良好的准确度和精密度。该方法与HPLC法检测结果相比,相对误差小于10%,说明黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析技术与行业标准方法检测结果具有良好的一致性。【结论】时间分辨荧光免疫层析检测技术灵敏度高、线性范围宽,重复性和稳定性好,是一种适合中国国情的实用快速检测技术,具有广阔的应用前景。

石墨烯吸附材料及其在真菌毒素检测中的应用

石墨烯类纳米材料作为一种近十年来兴起的新型吸附材料,被广泛应用于各种有毒有害物质的去除和检测研究。真菌毒素是污染粮油食品的主要危害因子之一,其检测技术研究常常受样品前处理方法的限制。该文介绍了目前作为吸附剂的石墨烯类纳米材料及其样品前处理技术,总结了其在真菌毒素检测中的最新应用进展。

时间分辨荧光免疫层析试纸条在油料饼粕黄曲霉毒素B_1检测中的应用

采用黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条及配套的时间分辨荧光速测仪,对油料饼粕中黄曲霉毒素B1的快速检测进行了应用研究。该时间分辨荧光免疫分析技术是基于时间分辨荧光免疫层析试纸条和载有Eu（Ⅲ）标记特异性单克隆抗体的样品瓶建立的检测技术。时间分辨荧光速测仪可内置标准曲线,直接输出检测结果。对6种油料饼粕做黄曲霉毒素B1添加回收率实验,回收率在70%~120%之间,批间、批内变异系数〈15%。在实际样品的检测中,时间分辨荧光免疫层析试纸条检测技术与液相色谱-串联质谱法相比,检测结果相对误差〈15%。时间分辨荧光免疫层析试纸条检测技术测定快速、准确,技术稳定、可靠,设备经济、小型,适用于大批量油料饼粕样品的快速检测和风险评估。

量子点标记荧光免疫法检测花生中黄曲霉毒素B_1

建立了基于量子点标记二抗的间接竞争荧光免疫吸附测定方法(indirect competitive fluorescence-linked immunosorbent assay,cFLISA),并研究检测花生中黄曲霉毒素B1的可行性。采用谷胱甘肽为稳定剂,在水相中直接合成碲化镉(CdTe)量子点,并利用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)与兔抗鼠二抗进行共价偶联,以黄曲霉毒素B1的单克隆抗体建立cFLISA方法。结果表明,该方法的灵敏度和最低检测限值分别为0.023ng/mL和0.001ng/mL,与传统的有机染料FITC-二抗法比较,灵敏度提高了30倍,花生样品加标0.1、0.05和0.025ng/g,回收率范围在88%～116%之间,变异系数均小于10%。建立的cFLISA方法可以较好的检测花生中黄曲霉毒素B1,并为其它真菌毒素的检测提供参考。

农产品中赭曲霉毒素A免疫层析试纸条快速检测技术研究

基于胶体金免疫层析原理建立了一种快速检测赭曲霉毒素A(ochrotaxin A,OTA)的胶体金试纸条的研制方法,包括胶体金的制备、金标记探针的制备、试纸条各条件参数的测试和优化等。试纸条检测OTA的肉眼可视检测限为0.25ng/mL,检测时间为10min,试纸条能特异性识别OTA而不与赭曲霉毒素B及其他真菌毒素发生交叉反应,使用简单、方便、成本低,重复性好,保质期长,尤其适用于农产品中OTA的现场快速筛查。

黄曲霉毒素免疫检测技术研究进展

黄曲霉毒素是迄今发现的毒性最强的一类真菌毒素,对该毒素的检测技术特别是快速检测方法对发展中国家保障农产品及食品消费安全具有特别重要意义。本文介绍了黄曲霉毒素特异性抗体及其免疫快速检测技术研究进展,提出了绿色免疫分析是黄曲霉毒素等剧毒生物毒素免疫快速检测技术的发展方向。

能力验证中粮油真菌毒素检测技术研究进展

完善的实验室能力验证体系是确保真菌毒素检测机构出具准确检测结果的重要前提。本文重点阐述了国内外真菌毒素实验室能力验证的现状,详细介绍了在真菌毒素能力验证中使用的检测技术研究进展。以Z比分数法评价由比利时联邦药物和农业化学研究中心(CODA-CERVA)组织的粮油多种真菌毒素含量测定的国际比对结果,分析粮油样品中多种真菌毒素的测定情况。

农产品与饲料中T-2毒素免疫亲和柱净化-液相色谱串联质谱检测技术研究

利用T-2毒素单克隆抗体2G7和CNBr活化的Sepharose 4B研制出T-2免疫亲和柱，考察了T-2免疫亲和柱的最佳应用条件。利用免疫亲和柱，建立了农产品与饲料中T-2毒素免疫亲和柱净化/液相色谱-串联质谱（ IAC/LC-MS/MS）确证性检测技术，并考察该方法的准确度和精密度。结果表明，T-2毒素在0.5-500.0 ng/g范围内线性关系良好，相关系数为0.9997，检出限为0.05 ng/g，定量下限为0.17 ng/g。大米、玉米、饲料样品在T-2毒素10，50，100 ng/g的加标水平下，回收率为92.9％-109.7％，相对标准偏差为2.1％-8.3％。对市售36份农产品与饲料样品进行测定，检测结果的相对标准偏差均小于10.0％。

黄曲霉毒素B_1标准替代物的制备及其在花生样品检测中的应用

以抗黄曲霉毒素B1(AFB1)单克隆抗体的F(ab')2片段为抗原免疫兔子,得到AFB1抗独特型抗体。经过酶联免疫吸附法(ELISA)条件的优化,建立AFB1抗独特型抗体最佳竞争抑制曲线。该曲线与AFB1竞争抑制曲线相比较可知,AFB1抗独特型抗体与AFB1之间存在指数增长关系,且相关性系数R为0.999 8。以AFB1抗独特型抗体浓度与其相应的抑制率作标准曲线,ELISA法测定花生中AFB1添加回收率,范围在90.4%～100.2%之间。综上,AFB1抗独特型抗体可以作为AFB1无毒替代标准品。

基于碳纳米材料的黄曲霉毒素电化学检测方法研究现状

黄曲霉毒素是已知真菌毒素中毒性最强的一类。与传统检测方法相比,电化学检测方法因仪器简单、易操作、灵敏度高、选择性好、响应快等优点更受研究者青睐。早期黄曲霉毒素电化学检测方法在抗体固定、信号传输等方面存在不足,为此,碳纳米材料在过去几年被广泛应用其中,具有提升电子传输和界面电催化性能、固定生物识别分子等多重作用,大大改进分析性能。该文总结了当前应用在黄曲霉毒素电化学检测上的三类主要碳纳米材料(石墨烯、碳纳米管和碳颗粒)及应用通用模式,将碳纳米材料与贵金属、电活性物质(如离子液体或导电聚合物)、生物识别材料(抗体或适配体)的一种或多种结合沉积到电极上,通过不同电信号响应建立检测方法。该文总结了现有研究的不足并展望了未来的研究方向,旨在为选择合适的碳纳米材料及其应用方式以提升分析性能提供参考。

农产品中真菌毒素样品前处理和检测方法研究进展

真菌毒素是由真菌产生广泛存在于农产品中的有毒次生代谢产物。真菌毒素污染日益加重,世界各国真菌毒素限量要求逐年降低,迫切需要更加灵敏、更加准确的真菌毒素确证性检测技术。系统综述了农产品中真菌毒素样品前处理方法和检测技术,前处理技术包括:液-液萃取技术、固相萃取技术、QuEChERS前处理技术等;检测技术包括:高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法、液相色谱-同位素稀释质谱法等。并对真菌毒素样品前处理和检测方法进行了总结和展望。

液相芯片及其在粮油主要真菌毒素同步检测中的应用

液相芯片整合了分子生物学、免疫学、高分子材料、微流控技术、高速数字信号处理、计算机分析等多方面技术,可实现少量样本高通量定性定量检测。本文主要阐述液相芯片定性与定量分析的基本原理、特点及其在分析领域的应用现状,探讨液相芯片在小分子高通量分析中的工作模式及其当前技术难点,分析黄曲霉毒素等粮油主要真菌毒素免疫分析研究进展,指出液相芯片在粮油主要真菌毒素检测中将有广泛的应用前景。

氯化钙对花生中黄曲霉毒素B_1提取及其快速检测结果的影响

以氯化钙为蛋白沉淀剂、黄曲霉毒素B1为靶标,探究了70%甲醇水(V/V)提取液中不同含量氯化钙对花生中黄曲霉毒素提取及其免疫检测结果的影响;采用样品加标回收的方法,研究比较了五种不同含量氯化钙对胶体金免疫层析试纸条和ELISA检测结果的影响。研究结果表明,样品经含1%CaCl2(m/V)的甲醇水处理后,用胶体金免疫层析试纸条检测时,试纸条T线颜色梯度变化,不同浓度加标回收率等参数均得到明显改善,前处理效果显著;选取20份花生实际样品,经过这种前处理之后,进行胶体金免疫层析试纸条和ELISA检测,同时将其检测结果与免疫亲和层析高效液相色谱法(IAC-HPLC)进行比对,胶体金免疫层析试纸条与IAC-HPLC检测结果符合率为90%,间接竞争ELISA与IAC-HPLC检测结果相关系数达0.996,表明本研究所改进的样品前处理方法能提高免疫检测准确度,具有很好的应用性。

量子点探针应用于粮油中黄曲霉毒素免疫检测的研究

为改良检测技术,拓宽量子点探针在农产品安全领域的应用范围,制备了用于粮油中黄曲霉毒素检测的2种量子点探针,即碳量子点(CQD)探针和石墨烯量子点(GQD)荧光免疫探针,研究2种探针应用于黄曲霉毒素检测中的可行性。采用绿色合成方法,发现以0.375g/m L柠檬酸水溶液中获得的石墨烯量子点荧光强度最强。利用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCL)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS),将碳量子点和GQD与抗黄曲霉毒素的单克隆抗体1C11进行共价偶联,发现偶联前后量子点的荧光光谱变化趋势一致,而且偶联后均保持了较好的荧光特性,因此均可作为黄曲霉毒素免疫检测的探针,且与抗体偶联后的碳量子点的荧光特性优于石墨烯量子点。

噬菌体免疫PCR技术及其在真菌毒素检测中的应用

噬菌体免疫PCR(Phage-mediated immuno-polymerase chain reaction,PD-IPCR)技术融合了噬菌体展示技术、特异性抗原-抗体和PCR技术,是三者相结合而派生出来的一项新分析技术。本文介绍了PD-IPCR技术的发展历程、技术原理及类型和技术流程中的关键实验方法,列举了一些噬菌体免疫PCR技术及其在真菌毒素检测中的应用,并结合PD-IPCR技术特点,分析了PD-IPCR技术在真菌毒素混合污染同步检测和污染预警研究等方向上的重要应用前景。

食品中邻苯二甲酸酯类塑化剂检测技术研究进展

邻苯二甲酸酯类塑化剂在工业上被广泛使用,作为一类典型的环境激素,具有极强的生殖发育毒性,可通过多种途径进入食物链,严重威胁人体健康。本文对食品中邻苯二甲酸酯类塑化剂的污染途径,危害和限量标准进行了简要阐述,重点对现有的检测技术进行了综述,以期为食品中邻苯二甲酸酯类塑化剂污染的发现与防控提供参考。

农产品黄曲霉毒素风险评估研究进展

黄曲霉毒素具有强毒性和强致癌性,不仅严重影响中国花生等农产品质量安全水平与国际贸易,还严重威胁人类和动物健康,受到社会的广泛关注。本文对国内外黄曲霉毒素风险评估研究进展进行综述,分析开展黄曲霉毒素风险评估的现状、技术难点和未来发展方向,以期促进中国农产品和食品中黄曲霉毒素风险评估工作的进一步发展。

中国花生黄曲霉毒素风险评估中膳食暴露非参数概率评估方法

基于2009年、2010年对全国13个花生主产省155个县市2 571份代表性花生样品检测分析获得的12 855个黄曲霉毒素检测数据,以及卫生部2002年、2004年中国居民营养与健康状况调查报告中膳食消费数据,采用Monte Carlo模拟和Bootstrap抽样方法量化人群花生黄曲霉毒素膳食暴露量的变异度和不确定度,构建了中国花生黄曲霉毒素风险评估中膳食暴露非参数概率评估模型,依据年龄段、地区间和收入水平差异的人群花生黄曲霉毒素膳食暴露量,分析了各暴露量分布的指标统计量和90%置信区间。评估结果显示,2～5岁儿童为花生黄曲霉毒素膳食摄入的高暴露人群,其高端暴露量(P97.5)中位值为每千克体重每天1.342ng(表示为ng.kg-1.d-1,下同),四分位间距为0.151ng.kg-1.d-1;18～45岁成人中,城市人群花生黄曲霉毒素膳食暴露量高于农村,其高端暴露量(P97.5)中位值为0.695ng.kg-1.d-1,四分位间距为0.078ng.kg-1.d-1;中等收入水平人群花生黄曲霉毒素膳食暴露量最高,其高端暴露量(P97.5)中位值为0.874ng.kg-1.d-1,四分位间距为0.086ng.kg-1.d-1。花生黄曲霉毒素膳食暴露非参数概率评估方法克服了点评估方法不能定量评估结果变异度和不确定度的缺点,结果更为精确。

在线固相萃取富集-高效液相色谱法快速测定牛奶中黄曲霉毒素M_1

目的:建立在线固相萃取富集-高效液相色谱法(On-line SPE-HPLC)测定牛奶中黄曲霉毒素M1。方法:固相萃取富集柱填料为SB-C18,上样溶剂和淋洗溶剂均为纯水,转移溶剂为乙腈-水(20:80,V/V),分析测定溶剂为乙腈-水(15:85,V/V)。结果:黄曲霉毒素M1检测的线性方程为Y=2.52746X 0.067,相关系数为0.99906;检出限为0.04μg/kg;定量限为0.10μg/kg;基质4个水平添加回收率(n=6)在98%～105.7%;6次加标回收相对标准偏差在0.79%～2.56%。结论:此方法简便、准确、重现性好,能够满足对日常牛奶中黄曲霉毒素M1的定量检测。