多浪羊Fec^(B)基因分子标记辅助育种的初步研究

为了提高多浪羊的养殖经济效益,在新疆麦盖提种羊场和疏附县其木布拉克合作社尝试以Fec^(B)基因突变为选择依据的分子标记辅助育种,将具有Fec^(B)突变的杂合子公羊和母羊进行选配,从而进行多浪羊多胎新品系的培育。结果显示,在麦盖提多浪羊种羊场Fec^(B)突变频率由2005年的3.60%上升到2015年的30.50%,增加了26.90个百分点;产羔率从2005年的107.02%上升到2015年的139.24%,增加了32.22个百分点;产三羔的母羊数从零增加到7只。在疏附县其木布拉克合作社从2012年开始就进行Fec^(B)突变分子育种,到2016年,Fec^(B)突变频率由起初的19.2%上升至34.7%,增加了15.5个百分点;产羔率从起初的121.67%上升至149.40%,增加了27.73个百分点;首次出现1只母羊产4羔的情况,产双羔以上的母羊数量达到45.78%,产三羔的母羊数从2只增加到6只。研究初步证明通过Fec^(B)突变分子标记辅助育种能够培育出产羔多的多浪羊群体。

谷胱甘肽(GSH)对绵羊细管冻精质量的影响

研究了在绵羊冻精稀释液中添加不同浓度(0、1、2、2.5、3 mmol/L)的谷胱甘肽(GSH)对细管冻精质量及体外受精的影响。结果显示:在绵羊精子的冷冻稀释液中添加1 mmol/L GSH具有最好的效果,可以显著地增加冷冻解冻精子的活力以及精子质膜、顶体膜和DNA的完整性,还可以在一定程度上提高体外受精的卵裂率及囊胚率。

羔羊卵巢AMH的免疫组织化学分析

为探讨AMH在羔羊和成年羊卵巢中时间和空间表达变化,揭示卵泡生长发育调控的机制。收集1月龄羔羊和正常成年羊卵巢,采用HE染色观察卵巢的组织学特征,免疫组化法检测绵羊卵巢AMH蛋白表达分布,RT-PCR技术分析卵巢卵丘细胞中AMH基因的表达变化。结果显示,卵巢HE染色后,对外源激素处理有反应的卵巢存在大量的大直径卵泡,且无中等卵泡和小卵泡,也没有黄体化和排卵;对外源激素没有反应的卵巢仅存在原始卵泡和少量的初级卵泡,无有腔卵泡。免疫组化结果显示,AMH存在于生长期的腔前卵泡和小的有腔卵泡,以及卵丘细胞,大多原始卵泡无AMH的表达,而在原始卵泡向初级卵泡转变,外层的颗粒细胞由扁平向柱状转变时AMH有表达,颗粒细胞存在表达AMH和不表达AMH 2种类型。RT-PCR结果显示,羔羊卵丘细胞的表达量高于成年羊。AMH可能参与卵泡发育的启动、向促性腺激素依赖期的转变等过程的调控,其功能作用还有待于深入研究。

IGF-Ι对绵羊冷冻精液质量的影响

【目的】探讨冻精稀释液中添加类胰岛素生长因子-I(IGF-Ι)对绵羊冷冻精液质量的影响,明确最佳的IGF-Ι添加浓度,为提高绵羊冻精受精率和加速其品种改良奠定基础。【方法】以特克赛尔年轻种公羊的精液为试验材料,在冻精稀释液中添加不同浓度(0、50、100、150和250 ng/m L)的IGF-Ι,通过SYBR-14/PI双染法、低渗肿胀试验和吖啶橙(AO)染色法检测解冻精液在孵育0、1和2 h后的顶体完整性、质膜完整性和DNA完整性,并通过体外培养验证其体外受精效果。【结果】Ⅱ组(IGF-Ι添加浓度100 ng/m L)的冷冻精液解冻孵育0、1和2 h后,其精子顶体完整性呈逐渐下降趋势,但整体效果优于其他试验组;在精子质膜完整性和DNA完整性方面,也表现为Ⅱ组高于其他试验组,且孵育时间越短(1 h内),效果差异越明显,均显著高于对照组(P<0.05)。体外受精试验结果显示,5个试验组间的卵裂率和囊胚发育率均不存在显著差异(P>0.05),但以Ⅱ组的体外受精效果略优于其他试验组。【结论】绵羊冻精稀释液中添加IGF-I可有效增强精子活力,改善冻精存活率,维持顶体、质膜和DNA完整性,但要求绵羊冷冻精液须在解冻后1 h内完成相关操作。

绵羊转基因技术体系构建及研究进展

转基因技术能够突破种间隔离、实现多基因聚合、按照人类需要改造生物基因组,因而具有广阔的应用发展前景。自从1982年首例转基因动物诞生以来,已先后报道了10余种转基因动物。转基因方法也由早期单一的原核显微注射发展到核移植转基因、病毒载体转基因和基因组编辑技术。转基因目标已由建立动物转基因方法,发展到改良动物生产性能或产品品质、作为生物反应器生产高附加值药用蛋白和培育转基因新品种。文章综述了国内外绵羊转基因技术的研究现状、存在问题和发展趋势,回顾了通过转基因技术培育绵羊新品种或建立动物模型的研究进展,分析了不同转基因方法的技术特点,提出了转基因技术面临的技术障碍和瓶颈问题,尤其对近两年发展起来的基因组编辑技术的特点、发展趋势和应用前景进行了深入探讨。同时,结合中国绵羊转基因技术体系构建工作,分析了构建绵羊转基因技术体系的必要性,总结了中国绵羊转基因技术体系构建的研究现状、技术水平、取得的创新与突破,以及今后的重点发展方向。同时对将来绵羊转基因生物新品种培育潜在的经济、生态和社会效益进行了分析和展望。

补喂瘤胃液制备物对羔羊肠道黏膜及血浆中免疫球蛋白含量的影响

本试验旨在研究补喂瘤胃液制备物对羔羊肠道黏膜和血浆中免疫球蛋白含量的影响,探讨瘤胃液制备物对新生羔羊肠道黏膜免疫及体液免疫的影响。选取50只初生体重接近的新生羔羊为模型动物,随机分为5组,每组10只。试验组羔羊1日龄开始补喂健康成年绵羊瘤胃液制备物[瘤胃液(Ⅰ)、灭菌瘤胃液(Ⅱ)、超声波破碎瘤胃液(Ⅲ)和灭菌超声波破碎瘤胃液(Ⅳ)],对照组羔羊补喂等量生理盐水,每天1次,连续5 d。在24日龄时每组选取3只羔羊屠宰,采集肠道黏膜;在羔羊14和28日龄时颈静脉采血并分离血浆。测定肠道黏膜及血浆中免疫球蛋白含量。结果显示:1)小肠黏膜蛋白质中,各试验组免疫球蛋白A(Ig A)、分泌型免疫球蛋白A(SIg A)和免疫球蛋白G(Ig G)总量均高于对照组。其中,试验Ⅲ组Ig A总量极显著高于对照组(P<0.01),显著高于其他试验组(P<0.05);试验组SIg A和Ig G总量与对照组相比无显著差异(P>0.05)。总体来说,免疫球蛋白含量变化趋势为回肠>十二指肠>空肠,试验Ⅲ组免疫球蛋白总量较对照组增加较多。2)血浆中,羔羊28日龄时免疫球蛋白含量均高于14日龄。14日龄时试验各组血浆中Ig A含量差异不显著(P>0.05),但28日龄时试验Ⅰ组显著高于对照组(P<0.05),极显著高于其他试验组(P<0.01);试验各组Ig G含量在14和28日龄时差异均不显著(P>0.05)。结果表明,给新生羔羊补喂不同处理的瘤胃液制备物均能提高羔羊肠黏膜免疫能力,补喂超声波破碎瘤胃液效果最佳。

TSA对绵羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响

为探讨Trichostatin A(TSA)对绵羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响。以卵母细胞孤雌激活为模型,比较TSA浓度、作用时间对孤雌胚胎发育能力的影响。结果表明:(1)与添加0、50、100、200、500nmol/LTSA相比,300nmol/LTSA能显著提高绵羊孤雌胚胎的囊胚率及囊胚细胞数(P<0.05);(2)与处理0、5和15h相比,300nmol/LTSA处理10h对孤雌激活的卵裂率没有影响,却能显著提高囊胚率(P<0.05);(3)与体外培养阶段添加TSA相比,在体外成熟液阶段添加TSA可降低卵母细胞体外成熟率及胚胎发育能力。因此,在体外培养液中添加300nmol/LTSA,作用10h,能提高绵羊卵母细胞孤雌胚胎发育能力。

不同直径卵泡对绵羊卵母细胞体外发育能力的影响

以屠宰场绵羊卵巢为材料,采用抽吸法收集小卵泡、中卵泡、大卵泡卵母细胞,研究不同卵泡直径对卵母细胞回收效果、比例分布以及对卵母细胞直径、谷胱甘肽(GSH)含量和体外发育能力的影响。结果表明,3种卵泡卵母细胞比例分布差异极显著(P<0.01);3种卵泡卵母细胞的回收率无显著差异(P>0.05),但中、大卵泡卵母细胞可用率极显著高于小卵泡卵母细胞(P<0.01);小卵泡卵母细胞的直径极显著小于中、大卵泡卵母细胞(P<0.01);中、大卵泡卵母细胞成熟培养24 h后GSH含量显著高于小卵泡卵母细胞(P<0.05);经孤雌激活体外培养后,中、大卵泡卵母细胞的成熟率分别极显著(P<0.01)、显著(P<0.05)高于小卵泡卵母细胞,中、大卵泡卵母细胞囊胚率极显著高于小卵泡卵母细胞(P<0.01);中卵泡卵母细胞囊胚细胞总数显著高于小卵泡卵母细胞(P<0.05),但与大卵泡卵母细胞差异不显著(P>0.05)。因此,直径≥2 mm的卵泡的卵母细胞适合体外培养和体外胚胎的生产。

绵羊激活素受体IIB(ActRIIB)基因的克隆、序列分析及原核表达

[目的]旨在克隆绵羊激活素受体IIB(ActRIIB)基因,并构建原核表达载体进行体外表达,为进一步验证功能奠定基础。[方法]以绵羊肝脏组织为材料,以提取总RNA反转录得到的cDNA为模板,利用同源序列克隆技术,对绵羊ActRIIB基因的cDNA全长进行克隆,并对其进行生物信息学分析。再根据克隆序列设计引物,将其与原核表达载体pET41a连接,构建重组表达质粒pET41a-ActRIIB,经IPTG诱导后进行表达鉴定。[结果]扩增获得绵羊ActRIIB基因cDNA全长1 564 bp(Genbank登陆号为:JX422071.1),最大开放阅读框为1 539 bp,共编码512个氨基酸;其氨基酸序列与牛的同源性最高(99.6%),ActRIIB的C末端区域高度同源且属于TGFβ家族。原核诱导表达获得符合预期大小(约92 kD)并带有组氨酸标签序列的ActRIIB重组蛋白。[结论]绵羊ActRIIB基因的克隆和表达为进一步研究其生物学功能奠定了基础。

BCB染色液对绵羊不同直径卵泡卵母细胞的筛选作用

为探讨亮甲酚蓝（BCB）染色液对绵羊不同直径卵泡卵母细胞的筛选作用，对筛选后的卯母细胞进行孤雌激活，统计不同组间成熟率、卵裂率及囊胚率的差异。将卵泡直径分为〈2mm、2～5mm、〉5mm共3组，经26μmol／L的BCB染色90min后，结果显示：（1）直径〉5mm卵泡中的卵母细胞阳性率极显著高于5mm以下卵泡组（P〈0．01）；（2）卵泡直径〉5mm中BCB＋组卵母细胞孤雌激活后的体外培养效率显著高于其余2组；（3）不同试验组卵母细胞孤雌激活后获得的囊胚总细胞数在BCB＋组卵母细胞中，直径2～5mm组与〉5mm组间没有显著差异（P〉0．05），但极显著高于直径〈2mm组（P〈0．01）；BcB-卵母细胞在各组间没有显著差异（P〉0．05）；未经染色的卵母细胞中，直径2～5mm组与〉5mm组间没有显著差异（P〉0．05），但显著高于直径〈2mm组（P〈0．05）；此外，〈2mm的卵母细胞，BCB＋组极显著高于对照组和BCB一组（P〈0．01），在直径2～5mm组和〉5mm组，BCB＋组、对照组和BCB-组均差异极显著（P〈0．01）。以上结果说明，直径〉2mm以上卵泡的卵母细胞用BCB染色液筛选后更适合体外培养。

哈萨克羊GDF9、ESR、BMPR-IB基因的PCR-RFLP多态性研究

为了探索绵羊多胎性的分子机理以及为绵羊繁殖力的标记辅助选择和育种提供理论依据,特开展了哈萨克羊品种多胎主效基因筛选和标记辅助育种研究。实验采用PCR-RFLP方法,对哈萨克羊GDF9、ESR、BMPR-IB基因进行PCR-RFLP多态性检测。结果表明:在哈萨克羊群体中GDF9、ESR、BMPR-IB基因的酶切位点上均未发现多态性,说明GDF9、ESR、BMPR-IB基因的酶切位点均不能作为控制哈萨克羊繁殖力的潜在分子标记位点。

早期补喂瘤胃液对羔羊血浆免疫球蛋白、细胞因子和小肠黏膜免疫相关细胞的影响

本试验旨在研究早期补喂瘤胃液对羔羊血浆免疫球蛋白、细胞因子含量和小肠黏膜免疫相关细胞数量的影响。选取12只特克赛尔(Texel)初生羔羊,随机分成2组,每组6只。试验组羔羊出生后连续补喂瘤胃液14 d,每天1次,对照组羔羊补喂等量生理盐水。羔羊7、14、21和28日龄时,颈静脉采血并分离血浆;28日龄时,屠宰收集肠道内容物。测定血浆中免疫球蛋白[免疫球蛋白A(Ig A)和免疫球蛋白G(Ig G)]、细胞因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)],肠道内容物中Ig G和免疫球蛋白Fc片段(Fc)含量。结果表明:试验组21日龄血浆中Ig A和Ig G含量显著或极显著低于对照组(P<0.05或P<0.01),其他日龄组间差异不显著(P>0.05);试验组血浆中IL-1β和IL-6含量较对照组高,但差异不显著(P>0.05);试验组血浆TNF-α含量在14日龄时显著高于对照组(P<0.05),在其他日龄差异不显著(P>0.05);试验组羔羊血浆IFN-γ含量低于对照组,但差异不显著(P>0.05);给新生羔羊补喂瘤胃液对28日龄羔羊肠道内容物中Ig G和Fc含量无显著影响(P>0.05);试验组肠道上皮内淋巴细胞数量较对照组增加,尤其在回肠,与对照组差异显著(P<0.05);肠道肥大细胞数量各肠段组间无显著差异(P>0.05)。上述结果表明,早期补喂瘤胃液对羔羊体液免疫无显著影响,可在一定程度上增强由免疫细胞介导的免疫功能;早期补喂瘤胃液对羔羊小肠转运母源免疫球蛋白无显著影响;早期补喂瘤胃液能刺激羔羊小肠黏膜免疫系统的发育,使免疫屏障功能尽早完善。

无角陶赛特绵羊18号染色体微卫星标记与早期生长发育的关系

【目的】分析无角陶赛特绵羊群体的UMP、MNS19A、CSSM18、BDKRB、MULGE6、MULGE5等6个微卫星基因座的基因多态性,并研究这6个微卫星标记多态性对无角陶赛特绵羊早期生长发育的影响。【方法】采集新疆玛纳斯新澳畜牧有限责任公司种羊场163只无角陶赛特绵羊羔羊血液,利用微卫星分型方法分析6个微卫星标记在无角陶赛特绵羊群体中的遗传多态性,利用固定效应模型最大限度地消除或减少非遗传因素对早期生长发育的影响,然后选择基因效应显著影响的生产性状,用最小二乘方差法分析基因多态性与早期生长发育性状的相关性。【结果】微卫星标记UMP、MNS19A、CSSM18、BDKRB、MULGE6、MULGE5的等位基因数分别为3,4,4,5,5,8;平均多态信息含量为0.655,平均遗传杂合度为0.698,这6个微卫星标记在该研究群体均表现中度或者高度多态,且具有比较丰富的遗传多样性。固定效应模型分析结果显示:微卫星标记CSSM18显著影响无角陶赛特绵羊初生体质量(P<0.05);微卫星标记MNS19A显著影响无角陶赛特绵羊初生体质量(P<0.05),极显著影响2月龄胸围(P<0.01);微卫星标记BDKRB极显著影响无角陶赛特绵羊初生体质量、2月龄胸围、3月龄体质量(P<0.01),显著影响3月龄臀宽(P<0.05)。分析比较这3个微卫星基因座不同基因型个体间的平均生产性能,结果显示微卫星标记MNS19A和BDKRB不同基因型间的平均生产性能差异显著(P<0.05)。【结论】微卫星标记MNS19A和BDKRB可以作为无角陶赛特绵羊相应生长性状的分子筛选标记。

绵羊不同部位脂肪沉积表型性状的相关分析

通过F1代横交获得特克塞尔羊和哈萨克羊的F2代337只,对8月龄F2代羔羊胴体5个不同部位的脂肪沉积性状(尾部脂肪重、背部脂肪厚、肾脏脂肪重、肠系脂肪重及胴体脂肪含量值)进行相关性分析,从而筛选活体状态下可测量的、与脂肪沉积密切相关的表型及参数。结果表明:横交F2代不同部位的脂肪沉积表型存在显著差异,背部脂肪厚与其他各部位脂肪沉积变化均显示出极显著正相关(P<0.01);筛选可活体测量的早期生长性状出生重、断奶重、活重和眼肌面积,其中,活重与各部位脂肪沉积量均达到极显著相关(P<0.01),眼肌面积与背部、肾脏和肠系呈极显著相关(P<0.01);通过回归分析将背部脂肪厚和活重确定为解释参数。

特克塞尔与哈萨克羊杂交F_(2)代胴体性状的多元分析

实验旨在研究特克塞尔×哈萨克羊杂交F_(2)代的尾部脂肪大小对胴体性状的影响。选用体况良好的520只8月龄羔羊,运用SPSS与R语言对羔羊的表型数据进行主成分与聚类分析,研究尾部脂肪的分化情况,并对杂交F_(2)代各类型尾脂羊屠宰前体重、胴体重、断奶重及脂肪沉积性状进行差异比较分析。结果发现,主成分分析中41个表型值提取到9个主成分,累计贡献率达到87.694%,屠宰前体重、胴体重、断奶重与5个脂肪表型性状的特征值较高;聚类分析结果可将杂交F_(2)代分为A型、B型、C型和D型4个类型;D型的屠宰前体重、断奶重与A型屠宰前体重、断奶重差异不显著,C型背膘厚极显著高于A型,B型的屠宰前体重、胴体重、断奶重极显著高于A型、C型和D型。B型、C型和D型间背膘厚差异不显著。综上,杂交F_(2)代的尾部脂肪发生性状分离,屠宰前体重随着尾部脂肪的增加而下降,结合特克塞尔与哈萨克羊的体型外貌特征,C型和D型更趋近于哈萨克羊,B型则更趋近于特克塞尔羊。

伊犁不同地区绵羊消化道线虫和球虫感染的季节动态调查

为了解伊犁不同地区绵羊消化道线虫和球虫季节性感染情况,在2019年的春、夏、秋、冬4个季节采集伊犁昭苏和尼勒克地区7337份粪便样本,采用饱和盐水漂浮法鉴定感染种类,采用改良麦克马斯特法定量检测,计算感染率及感染强度。结果表明:伊犁两个地区绵羊消化道线虫和球虫的感染率较高,消化道线虫呈中度感染,球虫呈轻度感染,初步鉴定出9种消化道线虫和12种绵羊艾美尔属(Eimeria spp.)球虫;昭苏地区绵羊消化道线虫平均感染强度极显著高于尼勒克地区(P<0.01),尼勒克地区球虫感染率和平均感染强度极显著高于昭苏地区(P<0.01);两个地区绵羊消化道线虫和球虫平均感染强度呈现出春季最高、夏季次之、冬季最低的流行规律;春季和冬季,昭苏地区绵羊消化道线虫平均感染强度极显著高于尼勒克地区(P<0.01);除了冬季,其他季节尼勒克地区球虫平均感染强度极显著高于昭苏地区(P<0.01);使用驱虫药伊维菌素和阿苯达唑后,绵羊消化道线虫和球虫的平均感染强度均显著降低(P<0.01),但消化道线虫虫卵转阴率、减少率均高于球虫。可见伊犁两个地区因气候温度等的不同,对绵羊消化道线虫和球虫感染情况有一定的影响。

影响绵羊超数排卵和人工授精效果因素的研究(英文)

[目的]获得低成本高效率的绵羊超数排卵处理方案和较好人工授精效果的方法。[方法]使用常规超数排卵和人工授精的方法,从可能影响其效果的FSH激素与海绵栓的组合、发情时间间隔、输精次数、公羊个体等4个方面进行研究分析。[结果]海绵栓结合北京产FSH组合的超排效果最差,显著低于其他试验组(P<0.01),使用宁波生产的FSH,结合海绵栓或者CIDR栓,都能获得较好的超排效果;最后一次注射FSH后12h发情的细毛羊供体超排效果最好,显著高于36h组(P<0.01),与0和24h间没有差异;人工输精2次的怀孕率显著高于输精1次(P<0.01);不同公羊个体的受精效果不同。[结论]使用国产FSH和国产海绵栓的组合,能在不影响超排效果的前提下显著降低成本;选择受精效率高的公羊个体,连续输精2次能获得较好的受胎效果。

绵羊Follistatin基因不同功能区片段的原核表达与纯化

为了研究绵羊Follistatin基因的功能及与MSTN的结合能力,克隆了FS结构域1及结构域2,构建了405 bp插入序列的原核表达重组质粒pET-FS N+D1,以及630 bp插入序列的pET-FSN+D1+D2。通过SDS-PAGE及Western blot检验,在IPTG诱导表达。结果显示:分别获得了带有6×His的45 kDa和51 kDa融合蛋白,融合蛋白主要以包涵体形式存在。经His亲和层析分别纯化了pET-FSN+D1,pET-FSN+D1+D2,目的蛋白含量分别达2.58μg/mL和5.98μg/mL,为进一步研究Follistatin基因的功能及与MSTN的结合能力提供了基础。

慢病毒生产卵泡抑素转基因绵阳PCR检测方法的建立(英文)

[目的]建立稳定快速的慢病毒转基因羊DNA水平检测方法。[方法]采集初生转基因羔羊的子叶、脐带、尾组织以及死亡羔羊的全身各组织,提取基因组DNA作为模板进行PCR检测,以Follistatin基因N+D1片段特异性引物进行PCR检测;同时,对慢病毒载体的CMV启动子、5’-LTR等结构元件进行PCR检测;提取死亡羔羊的全身组织以及转基因羔羊的活体肌肉组织总RNA,进行RTPCR检测。[结果]采用试剂盒提取的基因组DNA比常规方法提取的DNA快速、高效,且更易被检测,扩增时的引物采用载体上游与目标基因下游的组合大大增加了检测的特异性,避免了内源性目标基因的干扰而造成假阳性;初生转基因羔羊的尾组织可作为PCR检测的组织样品,其结果可靠、准确;对CMV启动子及5’-LTR等结构元件作PCR检测为转基因动物的安全性考察提供了数据,同时验证了转基因羔羊目的基因的检测结果;对转基因羔羊肌肉组织提取总RNA后进行RT-PCR检测,其中有3只羔羊没有检测到转录产物,其他均有转录。[结论]该研究建立的转基因绵羊PCR检测方法高效、快速且准确,为进一步蛋白水平检测提供试验依据,也为建立转基因绵羊系统性多层次的检测方法奠定基础,还为转基因绵羊的安全监测提供了稳定的技术平台。

牛杀菌/通透性增加蛋白对脂多糖介导的炎性细胞因子表达的影响

杀菌/通透性增加蛋白(Bactericidal/permeability-increasing protein,BPI)能结合并特异地中和来自革兰氏阴性菌外膜的脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)。为了研究牛源BPI蛋白及其N端结构域在LPS介导的免疫应答中的作用,本文将BPI全长1 449 bp编码区序列(BPI)和其N端714 bp的编码区序列(BPI714)分别导入m HEK293细胞,分析了稳定表达的BPI或BPI714对LPS介导的炎性细胞因子表达的影响。首先将构建的p LEX-BPI/p LEX-BPI714载体分别转染m HEK293细胞,获得稳定表达牛源BPI或BPI714的m HEK293细胞;然后用LPS刺激上述细胞,分别收集刺激前、刺激后1 h、3 h、6 h、12 h、24 h、36 h和48 h的细胞,并同时收集未表达BPI或BPI714的m HEK293细胞在各时间点的样品作为对照;采用定量RT-PCR检测上述细胞中炎性细胞因子IL-8、IL-1β、TNF-α、NF-κB-1、NF-κB-2的相对表达水平,比较LPS刺激前后表达BPI/BPI714和对照细胞中上述基因转录水平的变化规律。研究表明,LPS刺激后,对照细胞中IL-8、IL-1β、TNF-α、NF-κB-2表达水平在不同时间点均显著提高(P<0.05),并呈现规律性变化;而稳定表达BPI/BPI714的细胞在同样刺激条件下,IL-8、IL-1β、TNF-α、NF-κB-2基因的转录水平均未发生显著变化(P>0.05)。根据我们的实验结果,在m HKE293细胞模型中BPI或BPI714均能显著降低LPS介导的炎性细胞因子表达,抑制LPS介导的免疫应答。这不仅为进一步研究BPI抑菌机制和利用其抑菌功能提供了可靠的实验依据,也为分析抗菌蛋白的抗菌效果提供了一种可靠的实验方法。