转基因玉米59122品系的特异性检测

使用反向聚合酶链式反应(PCR)技术克隆了转基因玉米59122的外源基因与玉米基因组之间的两段侧翼序列,并据其左侧侧翼序列设计了具品系特异性的引物,运用半巢式PCR技术建立了59122的品系特异性二重PCR检测方法,扩增片段100bp,横跨pat终止子与转基因玉米侧翼基因之间。以转基因玉米59122、MON863、MON810、GA21、NK603,转基因大豆Roundup Ready和转基因油菜GT73等为材料,证明本方法与其他转基因作物具有高特异性。本方法在检测59122时,确定出连接体系中线性DNA的最佳质量浓度为1ng/μL左右,检出限达到0.1%,灵敏度为38个单倍体基因组拷贝数。因此可准确、快速、高效地检测转基因玉米及其产品,或作为常规PCR定性检测后的验证方法。

标准分子构建及其在转基因玉米59122定量检测中的应用

根据转基因作物59122的外源基因与玉米基因组之间的左侧侧翼序列设计具品系特异性的荧光探针及引物,以实时荧光PCR技术建立59122的品系特定量检测方法,以重组PCR技术成功获得了标准分子（整合了内标基因序列与左侧翼序列）梯度范围为10^1～10^5,定量范围为0.01%～100%;建立了玉米内源基因与侧翼序列的标准曲线,变异系数CV值、标准偏差SD以及相关系数R2均可接受;检测5个已知转基因含量（0.1%、0.5%、1%、2%、5%）的混合样品中的转基因含量,结果分别为0.12%、0.56%、1.04%、1.61%、4.66%,实验误差小于25%,结果可信。