上海市转基因植物研究概况

在国家及上海市各类重大研究计划的持续支持和推动下,上海市转基因植物研究进展迅速,在转基因抗除草剂、抗虫、抗病、抗逆境、品质改良和生物反应器研究等方面取得了一系列进展。通过简要概括上海市科研机构在转基因植物科学领域取得的研究进展,旨在掌握当前该领域的基本现状,分析其发展前景,为转基因植物安全性评价奠定基础。

转基因植物疫苗研究进展

综述了转基因植物疫苗的获取方法和一些重要人用和畜禽用转基因植物疫苗的研究进展,并讨论了转基因植物疫苗的免疫原性和现存问题。

转基因植物口服疫苗研究进展

转基因植物口服疫苗是一种重组蛋白亚单位疫苗。目前,已经有多家科研单位在开展人和动物方面的转基因植物口服疫苗研究。其中,一些重要的人用转基因植物口服疫苗已经成功地完成了Ⅰ期临床研究试验,针对一些动物疾病的转基因植物口服疫苗也已经进入了早期靶动物试验阶段。本文对转基因植物口服疫苗的研究进展进行了综述,并侧重对动物转基因植物口服疫苗的发展前景进行了展望,同时对一些重要的人用转基因植物口服疫苗也进行了讨论。

QX200微滴式数字PCR方法检测转基因大豆GTS-40-3-2

首次以转基因大豆中结构特异性基因为靶基因,建立了特异的微滴式数字QX200 PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)检测方法,对其进行准确定量。结果表明:ddPCR对结构特异性基因的检出限为2拷贝/(20μL),检测灵敏度高于国标中qPCR方法。微滴式数字PCR方法是一种准确、高灵敏度的基因拷贝数的分析方法,操作简便,可在转基因检测领域广泛应用。

转基因香石竹Moonlite品系特异性定性PCR检测方法的建立

以转基因香石竹品种Moonlite(月之伊人)为研究对象,通过TAIL-PCR方法,获得外源基因插入位点的左侧旁邻序列。根据旁邻序列设计引物,建立品系特异性定性PCR方法,其扩增片段覆盖了转化载体及香石竹基因组临界序列。本方法特异性好、灵敏度高,可快速、准确、高效地检测转基因香石竹Moonlite品种。

基因及构建特异性PCR方法检测转基因香石竹

以澳大利亚Florigene公司和日本Suntory公司研发的两种转基因香石竹Moonshade、Moonlite为研究对象,针对内参照基因ANS和外源基因F3’5’H、CHS启动子、D8ter,建立基因特异性定性PCR检测方法。此外,分别在外源MAC启动子和DFR基因上设计PCR引物,开展构建特异性PCR检测,定性PCR方法的检测灵敏度为0.5%。该方法的建立为转基因香石竹的进口检测、中国监管和环境安全评价提供了初步数据。

转基因香石竹中间试验的农艺性状评价

为了研究转基因香石竹品系月之霓裳Moonshade、月之伊人Moonlite及其亲本品种FE123在农艺性状方面是否存在差异,提供转基因香石竹的环境安全性评价数据,对植物生长和开花时期的农艺性状数据进行统计学分析。结果表明:这两个转基因香石竹品系与其受体品种在越夏能力、侧枝数目、植株高度、叶片宽度、叶片厚度、花的直径、花冠高度、花柱数目、花萼数目、雄蕊数目等性状上没有显著差异,而植株茎粗、叶片长度和花瓣数目差异极显著。此外,月之伊人Moonlite的花柱长度小于亲本品种,差异显著。

重组酶聚合酶扩增技术快速检测转基因玉米Bt11

根据外源基因草丁膦乙酰转移酶基因(PAT)与载体骨架连接区序列设计引物,建立了基于重组酶聚合酶扩增技术(RPA)的转基因玉米Bt11特异性快速检测方法。结果表明:该方法可在37℃条件下20 min内完成转基因玉米Bt11的检测,绝对检测限为100拷贝/μL,相对检测限为0.1%。

16S rDNA克隆文库法探索转基因香石竹对土壤细菌群落的影响

【目的】通过研究转基因香石竹对土壤细菌群落的影响,为转基因香石竹的环境安全性评价提供依据。【方法】通过构建16S rDNA克隆文库,分析种植转基因和非转基因香石竹的土壤中细菌的群落结构组成。【结果】转基因和非转基因香石竹土壤中,共有的菌群有变形菌门(Proteobacteria)、浮霉菌门(Planctomycetes)、酸杆菌门(Acidobacteria),其中α-变形菌门、β-变形菌门、浮霉菌门为优势菌群;而在放线菌门(Actinobacteria)、疣微菌门(Verrucomicrobia)及未培养菌(Uncultured bacterium clone)等菌群存在部分差异。【结论】通过16S rDNA克隆文库方法揭示了转基因香石竹的土壤中细菌多样性十分丰富,其栽培对土壤细菌群落结构影响有限。

转基因香石竹中F3’5’H基因的克隆、表达和免疫学鉴定

在研究转基因香石竹品系月之霓裳(Moonshade)、月之伊人(Moonlite)中外源基因F3’5’H的表达中,本文克隆了F3’5’H全长基因1.5kb,构建获得工程菌株Escherichia coli BL21(DE3)(+F3'5'H)。SDS-PAGE分析的结果显示,该菌株高效表达出F3’5’H重组蛋白,约占菌体总蛋白的30%。用经纯化的F3’5’H重组蛋白作为抗原,制备F3’5’H重组蛋白的抗血清,经ELISA免疫学分析表明,该抗血清的效价为1:25600。Western blot结果表明F3’5’H重组蛋白具有良好的IgG结合活性,且抗血清与转基因香石竹品系月之霓裳和月之伊人中的外源基因F3’5’H所表达的蛋白发生明显的抗原抗体反应。这样,月之霓裳和月之伊人用于评价转基因香石竹品系的环境安全性在我国也得到了验证。

香石竹分子育种研究进展

香石竹是当代世界上最重要的切花品种之一。尽管传统育种技术在香石竹遗传改良方面取得了显著成就,但仍不能满足当前香石竹生产优良品种的需求。随着生物技术的发展,以基因工程技术为核心的现代分子育种技术已经成为香石竹育种的重要研究方向。综述了近年来国内外香石竹分子育种的研究进展和成果,简要评述了香石竹分子育种研究中存在的问题并展望其应用前景。