烟草4CL与虎杖STS融合基因的构建、表达及融合蛋白纯化

白藜芦醇具有抗菌、抗癌、抗肿瘤、保护心血管、抗氧化等众多药理作用.4-香豆酰辅酶A连接酶（4-Coumarate-CoA ligase,4CL）和芪合酶（Stilbene synthase,STS）是其生物合成的关键酶和限速酶.本研究利用悬挂PCR （Overlap PCR）技术将白藜芦醇生物合成的最后两个关键酶4CL和STS的基因融合,构建原核表达pET30a-Nt4CL∷PcPKS5重组质粒,原核表达Nt4CL∷PcPKS5融合酶蛋白.预测其共编码945个氨基酸,含15个氨基酸的过渡氨基酸链（Linker）,编码蛋白质分子量（Mr）为102.8 kDa,等电点（pI）为5.69.原核表达筛选结果表明：温度为25℃,IPTG浓度为1.0 mmol/L,诱导起始OD600值在0.4～0.6之间,诱导4h时目标蛋白的表达量最高.细胞破碎后,经Ni2＋亲和柱纯化、PD-10柱脱盐后可纯化得到融合蛋白.本研究为通过分子生物学途径合成白藜芦醇奠定基础.