肉桂醛对大肠杆菌和绿脓杆菌的作用机制

本文研究了肉桂醛对大肠杆菌和绿脓杆菌生长、结构和生理指标的影响。采用肉汤稀释法测得肉桂醛对大肠杆菌和绿脓杆菌的最小抑制浓度分别为2.5 mmol/L和5.0 mmol/L,经10.0 mmol/L肉桂醛分别处理2 h和3 h的大肠杆菌和绿脓杆菌的生长完全受到抑制,扫描电镜结果显示此时大肠杆菌细胞表面出现凹陷,绿脓杆菌周围产生了大量絮状物质。在肉桂醛处理后,大肠杆菌的过氧化氢(H2O2)含量、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力均有提高,而绿脓杆菌没有明显变化,表明肉桂醛可能通过氧化胁迫损伤大肠杆菌菌体,并导致其死亡;而绿脓杆菌在肉桂醛作用下,虽能形成菌膜,保护菌体免受氧化损伤,但抑制了其生长。

丁香酚对烟草抗烟草花叶病毒的诱导作用初探

为探讨植物源化合物丁香酚对烟草抗烟草花叶病毒(TMV)的诱导作用,初步研究了丁香酚对接种TMV的烟草叶片中叶绿素和丙二醛(MDA)含量,防御酶苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)和超氧化物岐化酶(SOD)活性,以及病程相关蛋白基因PR-1、PR-3、PR-5表达的影响。结果表明:丁香酚处理可促进叶绿素的合成,减轻烟草体内MDA的积累,提高PAL、POD和SOD的活性,增强PR-1、PR-3、PR-5基因的表达。表明丁香酚可提高植物的诱导抗病性,进而减轻TMV对烟草的危害。

复配植物源杀菌剂的开发研究

研究了植物源化合物肉桂醛、丁香酚、麝香草酚和单宁酸对5种常见致病菌（金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、肠炎沙门氏茵和单核细胞增生李斯特氏菌）的抑制作用。采用肉汤稀释法测定各成分对5种致病菌的最小抑茵浓度（MIC），在浓度范围19．53～2500μg／mL内，各成分对各致病菌均表现出了抑制活性。对化合物之间的相互作用也进行了研究，肉桂醛、丁香酚、麝香草酚和单宁酸两两复配后各成分的最小抑菌浓度都有所降低，采用部分抑菌浓度（FIC）判定表明它们之间存在协同增效的作用。

外源一氧化氮缓解微囊藻毒素对青菜幼苗的毒害效应

微囊藻毒素(MCs)能够诱导青菜幼苗产生氧化损伤,并进一步抑制青菜幼苗的生长。相比较于单独MCs处理,外源一氧化氮(供体为SNP)预处理能够显著降低青菜幼苗体内活性氧(ROS)水平、减缓脂质过氧化反应,从而可以在一定程度上缓解MCs胁迫对青菜幼苗生长的抑制效应。这说明一氧化氮可能作为信号参与了青菜幼苗对MCs的解毒反应。

江苏省畜禽养殖场水环境中四环类抗生素污染研究

2009年在江苏省范围内采集27个规模化养殖场排水口和周围环境水体样品53个,用高效液相色谱-三重四极杆质谱对其中的土霉素(OTC)、金霉素(CTC)、四环素(TC)和强力霉素(DOX)等四环素类抗生素污染进行了检测。结果显示,土霉素、金霉素、四环素和强力霉素在水体样品中的检出率分别为60.4%、60.4%、34.0%和17.0%,污染量分别在0.07～72.91、0.10～10.34、0.08～3.67μg·L-1和0.11～39.54μg·L-1之间,检出率以土霉素和四环素最高;猪养殖场中土霉素、四环素和强力霉素的污染量比牛和鸡场的要高,牛场中金霉素和强力霉素的污染量明显低于鸡场;从区域上看,苏南地区受到的污染明显高于苏北。

金霉素和其代谢物胁迫对小白菜幼苗生长和抗氧化酶活性及累积效应的影响

通过水培实验研究了在1,10和30mg/L浓度下,金霉素(chlortetracycline,CTC)和其代谢物差向金霉素(4-epi-chlortetracycline,ECTC)胁迫对小白菜种子的萌发、幼苗的早期生长、幼苗中抗氧化酶系统活性的变化以及CTC和ECTC积累进行了研究。结果表明,根长较其他指标对CTC和ECTC生态毒性实验更为敏感,小白菜体内SOD、POD和CAT活性被CTC诱导,活性逐渐升高,其中SOD、POD活性均高于对照,低浓度ECTC促进了SOD、POD和CAT活性的升高,高浓度时POD和CAT活性被抑制,且随浓度升高,抑制作用加强,表明小白菜抗CTC胁迫的能力强于ECTC。CTC和ECTC能在小白菜地上部分积累,处理浓度越高,吸收和积累量越多,其中CTC被积累作用强于ECTC。

烟叶中高效氯氟氰菊酯残留半定量ELISA检测方法的建立

以高效氯氟氰菊酯为供试药剂,分别建立了烟叶基质和PBS缓冲液中高效氯氟氰菊酯的ELISA检测标准曲线。并在线性检测范围内,连续3 d添加3个浓度的高效氯氟氰菊酯,研究烟叶基质对ELISA检测的影响。结果表明,烟叶基质和缓冲液中高效氯氟氰菊酯的回收率分别在94%～157%和87%～118%,变异系数分别是6.8%～22.1%和3.5%～6.6%。这表明烟叶基质对ELISA检测干扰较大,在净化的条件下,定位为高效氯氟氰菊酯的半定量筛选检测较为合理。以空白烟叶添加适当浓度的高效氯氟氰菊酯(如设定的超标限量)为对照,间接竞争ELISA法检测待测样品,建立了烟叶中高效氯氟氰菊酯的半定量ELISA筛选方法,制定了结果判断标准。对50个高效氯氟氰菊酯施药后的烤烟烟叶同时采用ELISA法和气相色谱法(GC)分析,结果表明,ELISA法检测样本超标检出率为34%,GC法检出率为22%。以GC法为参照,ELISA法假阳性率为12%,假阴性率为0,表明该方法可以用于大量烟叶样本中的高效氯氟氰菊酯快速筛查。

微囊藻毒素MC-LR通过NO引起青菜幼苗的氧化胁迫反应

研究了微囊藻毒素(MC-LR)对青菜幼苗的胁迫效应。通过回归方程计算得出,浓度为4.23 mg/L的MC-LR处理5 d使青菜幼苗生长减少50%。通过特异性荧光探针DCFH-DA和DAF-2DA实时监测青菜幼苗体内活性氧(ROS)和一氧化氮(NO)含量,发现MC-LR处理能够诱导ROS和NO的产生。抑制剂研究结果表明,MC-LR胁迫下,NO主要通过硝酸还原酶(NR)途径产生。采用NR抑制剂结合MC-LR共同处理,能够显著缓解MC-LR单独处理引起的ROS含量上升和抗氧化酶基因(Cu/Zn-SOD、CAT、APX)的转录水平升高。这些结果表明,微囊藻毒素MC-LR通过NO引起青菜幼苗的氧化胁迫反应。

金霉素和4-差向金霉素对油菜生长的影响及其在幼苗体内的积累

以油菜为材料,研究不同浓度金霉素(chlortetracycline,CTC)和代谢物差向金霉素(4-epi-chlortetracycline,ECTC)胁迫对其发芽、生长和抗氧化酶活性的影响,以及CTC和ECTC在幼苗体内的积累。结果表明:随着处理浓度的升高,种子发芽率、发芽势没有显著差异,但株高和根长受到明显抑制;在1～30mg.L-1处理浓度下,CTC和ECTC诱导的幼苗体内抗氧化酶SOD、POD、CAT活性均高于对照组;幼苗体内CTC、ECTC积累含量随着处理浓度的升高而增加,表明CTC和ECTC可在油菜幼苗体内积累,这可能产生潜在食品安全风险。

基因突变技术在抗体亲和力体外成熟中的应用

从天然抗体库中筛选得到的抗体通常亲和力较低,在微摩尔水平;同时,经过多次免疫获得的天然抗体也存在100 pmol/L的亲和力极限。然而,以抗体亲和力体内成熟为理论基础的亲和力体外成熟技术,可以模拟体细胞高频突变和克隆选择过程。该技术可以解决库来源抗体亲和力不高、实际应用难的问题,也可以帮助天然抗体突破其亲和力极限。抗体基因体外突变技术可以模拟自体高频突变过程,是抗体亲和力体外成熟的重要手段,常见的抗体基因体外突变技术可以分为易错聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、DNA改组、突变株、定点突变和链替换等方法。易错PCR可以在抗体基因全长或部分区域随机引入突变,但随着突变率的增加,阳性克隆数量呈指数性递减。DNA改组包括抗体片段随机化切割和重组步骤,可以加快抗体的体外进化速度。突变株法易于构建超大容量的抗体库,但有害突变和突变率难以控制。定点突变的区域通常选择与抗原直接接触的互补决定区(complementary determination region,CDR)或自体突变热点进行操作。链替换通常保留母体抗体的一条重链或轻链,而对另一条链进行随机化组合。这些基因突变方法在提高抗体亲和力中获得了不同程度的应用,但也存在效率不高,且方法选择较为盲目等问题。可是,采用抗体X射线晶体衍射和计算机模拟等方法,却可以帮助预测抗体结合部位,为突变位点的理性设计和方法选择提供有效信息,因而成为亲和力体外成熟技术未来发展的趋势之一。

玉米赤霉醇特异性单克隆抗体及其胶体金检测试纸的研制

为了研究国内制备的玉米赤霉醇单克隆抗体,与其同系物玉米赤霉烯酮交叉反应严重,实际检测存在假阳性的问题,本试验开展了玉米赤霉醇特异性识别单克隆抗体及其胶体金检测试纸的研制工作。试验采用玉米赤霉醇-16-羧丙基醚与牛血清白蛋白偶联,免疫雌性Balb/c系小鼠;利用单克隆抗体技术完成杂交瘤融合,并用非竞争及竞争ELISA法,对阳性克隆进行鉴定。杂交瘤诱生腹水后,经亲和纯化,用于15 nm胶体金标记,制作玉米赤霉醇胶体金检测试纸。融合细胞经筛选,最终对3株杂交瘤细胞建株,结果均为Ig G1型。其中Mab-1A8诱生腹水效价高达1∶1.28×10^7,对玉米赤霉醇抑制中浓度（I50）为10.25 ng·m L^-1,检测灵敏度（I10）为1.96 ng·m L^-1,线性检测范围在2.96-35.46 ng·m L^-1,对同系物玉米赤霉烯酮的交叉反应率小于0.1%。试验研制的玉米赤霉醇胶体金试纸,检测阈值为2.5μg·m L-1,检测时间为10 min。本研究制备了一种新型玉米赤霉醇特异性单克隆抗体,并研制了以单抗为基础的玉米赤霉醇胶体金快速检测试纸,为玉米赤霉醇残留快速检测提供了灵敏、便捷的新方法。

新型保鲜剂1-甲基环丙烯的顶空气相色谱测定方法研究

研究建立了新型保鲜剂1-甲基环丙烯的气相色谱顶空气检测方法。采用活性氧化铝填充柱(3 m×3 mm,30～60目)分离,配有氢火焰离子化检测器(FID),异丁烯外标定量。异丁烯和1-甲基环丙烯浓度与检测峰面积值呈良好的线性关系。方法简便、快速、准确。

水溶性有机质对金霉素在猪粪中吸附-解吸附行为的影响

选择来自猪粪和稻草的水溶性有机质(DOM),用室内模拟试验方法研究了我国常用抗生素金霉素(CTC)在受到内源和外源DOM作用下在猪粪中的吸附和解吸附行为。研究表明,金霉素能被猪粪便快速吸附,等温线呈非线性,用Freundlich方程可以很好地拟合吸附数据;添加DOM能抑制猪粪对CTC的吸附,其能力大小与加入的DOM种类有关,其中内源性猪粪DOM的解吸附效果明显大于外源性稻草DOM;形成阳离子复合体和加入DOM的性质可能是抑制CTC在猪粪便上吸附的主要机制。

基于基因工程抗体的磺胺二甲嘧啶时间分辨荧光免疫分析方法的建立

采用从合成抗体库中筛选得到的磺胺二甲嘧啶Fab抗体,建立了磺胺二甲嘧啶一步竞争时间分辨荧光免疫分析方法。实验用羊抗鼠IgG预包被酶标板,加入镧系元素Eu标记的磺胺二甲嘧啶与磺胺二甲嘧啶标准品共同竞争结合Fab抗体,建立了用于磺胺二甲嘧啶检测的时间分辨荧光免疫分析方法。该方法检测灵敏度（I10）为0.4μM,抑制终浓度（I50）为13.5μM,线性检测范围在10.6~173.7μM之间。方法用于多种基质样本中的磺胺二甲嘧啶的快速筛查检测。

人源化抗苏云金芽孢杆菌Cry1Ab毒素单域抗体的筛选及活性鉴定

以Cry1Ab毒素作为抗原,将扩增后的噬菌体单域抗体库与固相化包被的Cry1Ab毒素特异性结合,利用噬菌体展示技术从人源化噬菌体单域抗体库(DAB)中筛选抗Cry1Ab毒素的单域抗体。采用正负筛选方法,经4轮"吸附-洗脱-扩增"后,富集特异性识别Cry1Ab毒素的噬菌体单域抗体。第4轮筛选得到的单菌落经单克隆ELISA鉴定,获得6株对Cry1Ab毒素具有较强结合活性的阳性单域抗体菌株,经PCR鉴定和DNA测序,均有完整的单域抗体基因片段插入。对6株阳性克隆的氨基酸序列进行比对分析,其序列差异主要存在于单域抗体的CDR区。