连接桥粒斑珠蛋白通过调节HIF2α并降低其稳定性抑制肾细胞癌的肿瘤发生

背景与目的低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor 2α,HIF2α)活性增高常见于肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)的进展过程。HIF2α在ccRCC中的功能和作用机制仍不清楚。本研究阐释了连结桥粒斑珠蛋白(junction plakoglobin,JUP)和HIF2α在ccRCC中的作用。方法采用亲和纯化联合质谱(affinity purification and mass spectrometry,AP-MS)、谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-s-transferase,GST)沉降和免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)法筛选和鉴定出可与HIF2α相互作用的蛋白质。采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和Western blotting法检测人ccRCC样本中JUP的表达情况。采用荧光素酶报告基因、染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)、环己酰亚胺追踪实验、泛素化检测研究JUP对HIF2α活性的调节。采用细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测、集落形成实验、transwell迁移实验、异种移植瘤模型研究JUP敲减或过表达对肾癌细胞致瘤活性的影响。结果我们的研究发现,JUP是一种新的HIF2α结合蛋白,通过将VHL(von Hippel-Lindau,VHL)和组蛋白去乙酰化酶1/2(histone deacetylases 1/2,HDAC1/2)招募到HIF2α并调节其稳定性和转录活性来发挥重要作用。在体内和体外实验中,敲减JUP可促进肾细胞癌的致瘤活性;相反,JUP过表达则可抑制肾细胞癌的致瘤活性。另外,在ccRCC临床样本中JUP低表达,而且其低表达与低氧评分升高及预后更差相关。结论本研究表明JUP在ccRCC进展过程中通过调节HIF2α信号通路发挥重要作用,JUP可作为一个潜在的治疗靶点。