研究生课程《医学分子生物学》教学的探索与实践

分子生物学理论与技术已渗透于医学的各个领域,为了适应现代医学发展的要求,更好地培养新一代从事医疗和科研的高素质人才,福建医科大学分子医学研究中心自1998年将《医学分子生物学》作为硕士研究生的学位课程,经过数年的探索和努力,取得了良好的教学效果。文章就该课程的教学实践进行回顾与总结,提出今后的努力方向。

硫酸胆固醇对桥本氏甲状腺炎小鼠模型的治疗效果及相关机制研究

目的观察硫酸胆固醇(CS)对桥本氏甲状腺炎小鼠的治疗效果。方法选取NOD.H-2^(h4)雌性小鼠饮0.05%碘化钠水持续不同时间,并通过持续2周腹腔注射CS对诱导小鼠进行治疗。HE染色观察淋巴细胞浸润情况并进行甲状腺炎症程度评分;测定血清抗甲状腺球蛋白抗体(TgAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)以及甲状腺功能水平;免疫荧光染色流式细胞仪分析B淋巴细胞、调节性T细胞(Treg)、Th17、Th1、Th2细胞比例的变化。结果HE染色结果显示,在8周组和16周组中,经过CS的腹腔注射后,小鼠甲状腺组织炎性评分显著下降(P<0.05)。而在64周组中,治疗组与诱导组之间无显著差别(P=0.31)。血清学分析显示,经过CS干预后,高碘溶液诱导8周和16周的小鼠体内TgAb、TPOAb水平均显著降低(P<0.05),而小鼠的甲状腺功能(TSH、T4水平)仅在16周组出现显著变化。流式细胞术分析显示,在8周组中,经过CS干预后,小鼠体内B淋巴细胞以及Th1、Th2、Th17和Treg细胞比例均出现显著变化(P<0.05)。结论CS对于桥本氏甲状腺炎早中期的疾病进展具有明显的治疗及缓解效果。

诱导失巢凋亡与肝细胞癌治疗研究进展

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生肿瘤转移,导致肿瘤进展和治疗失败。失巢凋亡是一种基质脱离诱导的凋亡或脱离诱导的细胞死亡机制,失巢凋亡抑制肿瘤细胞从天然细胞外基质逃逸到其他器官,对肿瘤转移具有抑制作用。阐明癌症转移中失巢凋亡的调节因子和机制是治疗HCC的迫切需要。该文总结了HCC中失巢凋亡调节的分子机制,并讨论了药物诱导失巢凋亡治疗HCC转移的现状,表明通过生物活性化合物诱导失巢凋亡是一种很有前途的治疗HCC的途径。

结核分枝杆菌分子分型技术的研究和应用

结核分枝杆菌是引发结核病的病原菌。近年,结核病发病有增加趋势,特别是结核杆菌耐药株增多,这些都提示其分子流行病学特点发生了改变。对不同基因型的结核病患者选取不同的治疗方案,是当今个性化医疗和结核病有效治疗的必然要求。目前广泛使用的结核分枝杆菌基因分型方法主要有插入序列6110限制性片段长度多态性、间隔区寡核苷酸分型法、多位点串联重复序列分析、全基因组测序技术、耐药相关基因突变谱分析、基因芯片分型技术等,这些方法在临床和基础研究中的应用各有利弊。本文对结核分枝杆菌的基因分型技术和应用作一综述,以期为临床工作者和基础研究人员选择适合的分型技术提供理论依据。

结核分枝杆菌耐药分子生物学机制研究进展

由于近年抗菌药物的滥用、耐药结核菌株基因突变和艾滋病共患结核患者的增多等因素,结核病的发病率呈上升趋势,临床出现大量的耐药结核病患者,结核病的预防和治疗存在巨大困难。因此,全面了解结核菌耐药的分子机制对于预防和监测结核病的发生,建立快速耐药结核株分子检测方法和抗结核新药的研发至关重要。本文就耐药结核分枝杆菌常见基因突变和分子作用机制进行阐述。

弓形虫P24基因编码蛋白的分子生物学研究进展

弓形虫P2 4基因编码的致密颗粒蛋白 (GRA1 )是弓形虫速殖子分泌排泄的抗原之一 ,存在于速殖子与缓殖子的致密颗粒中 ,是弓形虫诊断及制备疫苗的重要分子 ,在人体和动物实验感染中具有较强的免疫原性。本文综述了近年来P2 4 ,即GRA1的分子生物学研究进展及其作为钙离子缓冲剂的功能研究。

基于文献计量学的病毒性肺炎免疫应答调节机制研究进展分析

[目的]了解病毒性肺炎及其免疫应答机制的研究现状,分析该领域的热点和研究发展趋势。[方法]检索Web of Science(WOS)核心合集数据库中有关病毒性肺炎免疫应答相关的文献为文献样本,基于文献计量学,利用Citespace对该领域文献进行国家合作、机构合作、关键词等分析。[结果]共检测到相关文献796篇,美国的发文量、研究者数量及研究成果在全球都处于领先地位,美国国立卫生研究院为发文最多的机构;中国研究处于不断发展阶段,与其他国家有良好合作,国内交流有待增强;主要的热点话题有呼吸道合胞病毒、流感、发病机制、细胞因子表达、炎症反应等。[结论]该领域研究受疫情爆发的影响,正处于发展阶段,全球应加国内外强科研合作,提高防治疫情整体研究水平。

医学研究生精准医学思维的培养策略浅析

随着二代测序的快速推进,组学领域呈现了井喷式的发展。医生已能够根据患者的分子指征,更有针对性进行治疗,医疗从传统的循证医学逐渐的进入到了精准医学的范畴。精准医学强调综合个人的检查数据,在正确的时间,以正确的方式,给予病人正确的治疗。这种转变促使当代的医学研究生的培养模式和方式的改进,同时传统的医学思维方式需要改进以适应精准医疗的逐步发展。

肿瘤中m^(6)A修饰调控铁死亡的机制研究进展

铁死亡是一种独特的细胞死亡方式,在机制和形态学上与其他形式的细胞死亡不同,在调节肿瘤生长方面发挥着关键作用,并为化疗耐药性提供了新的机会。表观遗传修饰失调动态驱动异常转录过程,促进肿瘤耐药性、进展和转移。越来越多的研究表明,m^(6)A修饰介导的表观遗传修饰调控肿瘤铁死亡。本文首先简要总结了铁死亡的核心分子机制,然后简要讨论了m^(6)A表观修的作用,最后详细描述了m^(6)A修饰调控铁死亡在肿瘤发生中的作用机制。

microRNAs通过Hippo通路抑制肝细胞癌发生的研究进展

Hippo信号通路下游效应器蛋白Yes相关蛋白(YAP)和转录辅助激活因子(TAZ)的异常激活参与肝细胞癌(HCC)恶性进展。微小RNA(miRNAs)作为抑癌基因通过Hippo YAP/TAZ信号影响HCC增殖、迁移和凋亡等途径调控HCC恶性生物学表型。探索miRNAs调节Hippo YAP/TAZ通路在HCC中的作用可为诊断和治疗HCC提供新的思路。

神经干细胞增殖分化过程中Notch通路信号分子的表达

探讨Notch通路信号分子在神经干细胞增殖分化中的表达变化。以Notch1,PS1,RBPJk和HES1为研究对象,用RTPCR、Westernblot法检测其在神经干细胞增殖分化中的表达。RTPCR结果表明:PS1和RBPJkmRNA表达量在神经干细胞分化第2d明显降低,而在分化其它阶段无显著差异;Notch1和HES1mRNA表达量在神经干细胞各分化阶段无明显差异。Westernblot结果显示:PS1蛋白表达量在神经干细胞分化第2d降低,其它阶段无明显差异。Notch信号通路对于维持体外培养的神经干细胞增殖有重要的作用。

福建省大肠癌发病危险因素的病例对照研究

目的探讨福建省大肠癌发生的危险因素。方法采用1∶1匹配的病例对照研究方法,应用统一制订的调查表进行流行病学调查。共调查286对病例和对照。对资料进行单因素和多因素条件Lo-gistic回归分析。结果大肠癌的危险因素有饮用井水(OR=4.05,95%CI:1.50～10.94)和泉水(OR=7.73,95%CI:2.02～29.54),每天吸烟量(OR=4.57,95%CI:2.19～9.54),油腻饮食(OR=5.35,95%CI:2.21～12.99),肿瘤家族史(OR=6.18,95%CI:3.05～12.51),肠道疾病史(OR=6.78,95%CI:3.53～13.07);保护因素有常吃粗粮(OR=0.31,95%CI:0.17～0.53)。结论福建省大肠癌与吸烟,膳食纤维缺乏,饮用井水、泉水,下消化道疾病和肿瘤家族史密切相关。

海马内注射纤丝状Aβ_(42)诱导tau异常磷酸化的研究

目的 观察海马内注射纤丝状Aβ42 后神经元Ser 2 0 2位点磷酸化的tau蛋白 (PS2 0 2 tau)的表达 ,探讨Aβ42 与tau蛋白超磷酸化的关系。方法 应用立体定向技术对老年大鼠进行海马内注射纤丝状Aβ42 ,采用免疫组织化学染色方法 ,显示PS2 0 2 tau的表达情况 ,并进行图像分析。结果 纤丝状Aβ42 注射组双侧海马PS2 0 2 tau的表达明显高于正常组和双蒸水注射组 ,两侧海马PS2 0 2 tau的表达没有明显差异。结论 纤丝状Aβ42 能使PS2 0 2 tau的表达增加 ,提示它具有诱导tau蛋白超磷酸化的效应。

Notch1和Hes1、Hes5在星形细胞瘤中的表达及其相关性研究

目的探讨Notch1受体和其下游信号分子Hes1、Hes5在人脑星形胶质细胞瘤中的表达及其相关性。方法应用免疫组织化学方法检测62例人脑星形细胞瘤和7例正常人脑组织中Notch1和Hes1、Hes5表达情况。结果星形细胞瘤组Notch1、Hes1和Hes5的表达均显著强于正常脑组织组(P<0.05)。在各级星形细胞瘤中,Notch1和Hes1的表达水平Ⅱ～Ⅲ级显著高于Ⅳ级(P<0.05),Hes5的表达在2组间差别无统计学意义(P>0.05)。在星形细胞瘤组中Notch1的表达与Hes1一致性较好(k=0.503),与Hes5的表达一致性差(k=0.216)。结论Notch1表达与星形细胞瘤的发生有关,与星形细胞瘤的病理分级无关。Notch1可能主要是通过下游分子Hes1而非Hes5发挥作用。

眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶诱导人胃癌细胞MGC-803细胞凋亡的实验研究

目的:研究眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶(NA-LAAO)对人胃癌细胞MGC-803的细胞毒性、诱导凋亡作用及可能机制。方法:采用CCK-8法测定细胞毒性;采用DNA倍体分析和An-nexin V/碘化丙啶染色测定细胞凋亡;采用发色底物法测定Caspase-3酶活性;采用Western-blot方法测定聚二磷酸腺苷核糖多聚酸-1(PARP-1)切割。结果:NA-LAAO可抑制MGC-803细胞增殖,6、12、24h的IC50分别为(2.48±0.41)、(1.74±0.27)和(0.83±0.19)mg/L;NA-LAAO可使细胞DNA分布出现亚二倍体凋亡峰,并可促使细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻;NA-LAAO可激活Caspase-3并可促使其底物PARP-1降解。结论:NA-LAAO可能通过激活Caspase-3这一分子机制而诱导细胞凋亡,从而抑制肿瘤细胞增殖。

血浆中辛伐他汀分析方法及药代动力学研究

采用GC/MS的SIM(选择离子监测)定量模式,以洛伐他汀做内标,经乙酸乙酯萃取后,测定人体血中辛伐他汀的浓度.标准曲线在0.27～54μg/L之间呈良好的线性关系,r>0.999,高中低3个浓度点的日间日内RSD(相对标准偏差)小于5.2%,回收率可达96%～103%,并应用在10例健康志愿者口服40mg辛伐他汀的药代动力学的研究.

BMP-2和EGF对神经干细胞向神经元分化及Notch信号分子表达的影响

采用BMP-2(bonemorphogeneticprotein2)和EGF(epidemicgrowthfactor)诱导体外培养的神经干细胞分化,通过免疫荧光染色以及细胞计数方法,观察其分化为神经元的情况;用RTPCR和Westernblot检测Notch信号分子Notch1、PS1、RBPJk和HES1的表达水平。结果表明:BMP2组分化为神经元的比例明显高于对照(control,Ctrl)组和EGF组;EGF组分化为神经元的比例与Ctrl组相比无显著差别;与Ctrl组相比,BMP-2组和EGF组中Notch通路4种信号分子的mRNA表达量均无显著差异;PS1蛋白表达量也无明显差异。结果提示,BMP-2对神经干细胞分化为神经元的诱导作用强于EGF和自主分化,其分化为神经元的比例增加与Notch信号分子的表达水平无关。

SARS患者合并肺炎支原体感染的临床研究

目的探讨在本院由SARS(severeacuterespiratorysyndrome)冠状病毒引起的99例SARS患者合并肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae,MP)感染的临床情况变化。方法运用肺炎支原体抗体凝集实验,检测受SARS病毒感染的99例患者发病后的肺炎支原体抗体和滴度。结果99例SARS患者部分出现MP合并感染,阳性患者数为47例,总的阳性率为47.5%。在SARS发病前阶段,合并MP感染阳性率为69.3%(39/56),占整个阳性率的83.0%,并以高滴度分布较多;发病后阶段,合并MP感染阳性率为18.6%(8/43),占整个阳性率的17.0%,滴度较第一阶段偏低,两者有显著性差异(P<0.01)。结论SARS患者合并肺炎支原体感染,其感染率有阶段性差异,表明在前期感染SARS冠状病毒的患者毒性较强,对患者肌体影响较大,易出现肺炎支原体合并感染,而在后期的SARS冠状病毒感染者中,可能因毒性减弱,合并肺炎支原体感染率降低。

苯中毒与多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶假基因多态等的相关性研究

目的探讨慢性苯中毒与微核率、姊妹染色单体互换(SCE)、多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)假基因多态的关系,为寻找苯中毒的易感者提供依据.方法对33例苯中毒病例与83例对照组进行微核率、SCE、PARP假基因多态的测定,并对其分布进行统计学分析.结果苯中毒病人外周血淋巴细胞微核率为0‰～6‰、中位数为2‰,对照组0‰～3‰,中位数为1‰;苯中毒病人SCE率为(6.31±1.26)次/细胞,对照组(5.59±0.18)次/细胞;苯中毒组与对照组微核率、SCE率差异有显著性(P＜0.05);苯中毒组和对照组的PARP假基因中B基因频率分别为0.104和0.116,苯中毒组与对照组PARP假基因多态分布一致(P＞0.05).结论慢性苯中毒可引起微核率、SCE的增高,未发现PARP假基因多态与慢性苯中毒有关联.

Hv古细菌SRP19基因的克隆、表达、重组蛋白的纯化及生物学活性的研究

目的:构建Hv古细菌SRP19蛋白的表达载体pET23d-Hv SRP19并在大肠杆菌中表达后进行纯化和研究其生物学活性,为研究SRP循环的分子机制奠定基础。方法:用体外合成的重组DNA技术,先合成具有重叠碱基的10个寡核苷酸短序列,通过拼接,获得Hv SRP19基因全长DNA后,克隆到pET23d载体上。重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中的大量表达产物经Q-Sepharose离子交换层析柱纯化后再用蔗糖密度梯度超速离心法分析其生物学活性。结果:正确构建了pET23d-Hv SRP19表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中获得良好的表达;成功地纯化了表达产物,纯度达95%;证明了具有SRP19蛋白的生物学活性,能够与Hv SRP RNA相互作用形成SRP19-SRP RNA的复合物。结论:纯化的Hv SRP19蛋白与Hv SRP RNA相互作用所形成的复合物,被认为是启动SRP颗粒形成和功能发挥的开始。