根管治疗失败病例根管内微生物的分子生物学检测

目的:通过对根管治疗失败病例根管内微生物进行分子生物学检测,研究失败病例根管内各种细菌的检出率及优势菌;分析临床症状和体征与特殊微生物的关系。方法:选择40例根管治疗失败病例共40颗患牙,根据症状分为疼痛组、窦道组和无症状组,去除根管内充填物,根管内细菌取样,PCR检测鉴定。结果:根管治疗失败病例根管主要呈混合感染,共检出6种细菌,粪肠球菌是最常检出的细菌,产黑普氏菌与疼痛、衣氏放线菌与瘘管有一定的相关性。结论:根管治疗失败的主要原因是根管内的微生物感染持续存在,根管治疗失败病例根管内微生物组成有其特殊性。

七年制医学分子生物学实验课改革与实践

分子生物学是一门实践性很强的学科,广泛应用于生命科学的各个领域。在七年制分子生物学实验教学实践中,通过对教学内容、教学手段、考核方法的改革,充分调动了学生学习的积极性,培养了学生科研思维能力和创新能力。

以临床问题为导向的分子生物学综合性实验探索

随着医学的发展,越来越多将分子生物学的理论与技术,应用于疾病的预防、诊断和治疗。从分子水平探讨各种疾病的发生发展的机制,已成为当代医学研究的共同目标。因此作为一名医学院校的学生,掌握与应用分子生物学实验技术,结合临床实践,在分子水平上认知、诊断各种疾病的发生发展机制是十分必要的。改革与优化实验课教学体系,更新实验课教学内容,有利于提高实验教学质量,培养高素质医学人才,在实验教学中培养学生创新意识、训练学生创新能力、培养学生创新品质。

开设硕士研究生分子生物学实验技术课程的几点体会

分子生物学实验技术课程是医学研究生教学中一门应用性很强的基础课，根据我校研究生教学课程的情况，就课程的设置、如何加强实验课中的理论教学、怎样培养学生动手能力和科研创新意识以及评定学生实验课成绩的指标等方面的教学经验进行了总结。

开放式教学法在分子生物学教学中的实践

在分子生物学的教学过程中,我们以鼓励学生的创新能力,提高学生综合素质为目标,在教学资源、教学内容、教学评价、教学方法上尝试了开放式教学法,给学生提供更多的学习机会和环境,激发学生学习的热情,培养学生的自学能力、独立思考和解决问题的能力。

现代分子生物学技术系列讲座之四──反义核酸技术

现代分子生物学技术系列讲座之四──反义核酸技术杜卫东（生物化学与分子生物学研究中心）反义核酸技术是利用人工合成的特异性反义寡核苷酸定向抑制或封闭同的基因（ＤＮＡ或ＲＮＡ）表达的技术。它包括三方面的内容：（１）反义及ＲＮＡ（ａｎｔｉｓｅｎｓｅＲＮＡ），...

中国医学分子微生物学的现状与展望

21世纪是以分子生物学为代表的生命科学的世纪,它将推动生物学由细胞水平向分子水平、基因水平发展。在分子微生物学基础研究方面,目前已搞清大肠杆菌基因约40%,已查明噬菌体的全部基因顺序,大约60%的基因亦已搞清。对某些细菌和病毒的复制、基因克隆、核苷酸序列,编码基因、增强子、启动子的结构与功能进行了深入的研究。在病原微生物检测技术方面,已由过去第一代的微生物常规分离培养技术,第二代的生化等快速诊断技术,第三代的单克隆抗体技术进入目前正在兴起的第四代基因诊断(基因探针和PCR)技术。前三代诊断技术都是以疾病的表型改变为依据。

日本血吸虫成虫体外传代培养细胞的生物学鉴定

本研究结果显示:血吸虫成虫细胞在体外培养中呈半悬浮聚集生长状态,4代内的培养细胞及冻存复苏细胞存活率达90%,并在各代培养中均可见细胞分裂相;传5代细胞的染色体核型为8对16条。超微结构既观察到形态正常细胞,也可见形态异常细胞。表明1640-40特定培养基对血吸虫成虫中的部分细胞体外传代培养获得成功。

c-ski对大鼠皮肤成纤维细胞生物学行为的影响

目的研究原癌基因c-ski对大鼠皮肤成纤维细胞活力、肌成纤维细胞分化、型胶原分泌等生物学行为的影响。方法免疫组化检测皮肤成纤维细胞内c-Ski蛋白的表达,并在转染c-ski基因后,利用MTT法检测皮肤成纤维细胞增殖活力、免疫组化和RT-PCR检测型胶原分泌、α-SMA细胞免疫组化检测肌成纤维细胞分化的改变。结果大鼠皮肤成纤维细胞内有c-Ski蛋白的表达,且主要表达在细胞核内,c-ski可以以剂量依赖的方式增加皮肤成纤维细胞的增殖活力,并可降低型胶原蛋白和mRNA的水平,但不改变皮肤成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化过程。结论c-ski促进细胞增殖但降低胶原分泌的作用可能对促进创伤愈合、降低瘢痕形成有着重要的意义。

东方田鼠胚胎成纤维细胞的分离培养及生物学特性

目的对影响东方田鼠胚胎成纤维细胞(MfEF)分离和培养的因素进行探索,并观察其生物学特性。方法取室内繁殖饲养不同胎龄的东方田鼠胚胎分离成纤维细胞,通过原代和继代培养,分析比较不同胎龄、不同血清浓度、不同胰蛋白酶浓度等因素对MfEF分离及培养的影响,观察MfEF的生长形态及其生物学特性。结果 MfEF为贴壁型生长,细胞形态多样,呈梭形、不规则多边形;采用0.125%的胰蛋白酶室温消化12～13 d胚胎组织5 min,以DMEM培养基添加15%小牛血清分离培养MfEF的效果最佳;MfEF2～7代增殖最旺盛。结论获得了实验室分离、培养MfEF的有效方法 ,为进一步深入研究东方田鼠抗日本血吸虫机制以及开展不同动物成纤维细胞间比较研究奠定了基础。

兔源内毒素结合蛋白的提取纯化及体外生物学活性研究

目的 从烧伤合并内毒素血症损伤兔的血清中分离纯化出内毒素结合蛋白 (Lipopolysaccharide BindingProteinLBP) ,以研究LBP在烧伤复合内毒素血症中的作用。方法 兔血清中蛋白质通过二步离子交换层析 (Bio Rex 70Resin、Mono Q)及凝胶过滤来分离纯化 ,并经流式细胞分析实验、绵羊红细胞凝聚实验、氨基末端氨基酸残基测序等方法鉴定 ,再将LBP作用于体外培养的人单核细胞 (U93 7) ,观测其分泌TNFα等细胞因子的状况。结果 获得一种分子量为 60× 10 3蛋白质 ,其N端 10个氨基酸序列为TNPGLITRIT ,与NCBI蛋白质库中有关兔的氨基酸序列进行比较 ,发现其与LBP的序列相同 ,它能促进脂多糖 (LipopolysaccharideLPS)与外周血单核细胞 (PBMC)结合 ,并能促进U93 7在极低浓度的LPS用下分泌TNFα。结论 从血清中分离纯化带有生物活性、全长LBP是可行的 ,LBP能促进极低浓度的LPS与单核细胞结合 ,介导炎性因子的分泌 ,从而促进炎症反应的发生。

人IL-18突变体D134R的构建及其生物学活性分析

目的研究IL-18结构与功能的关系。方法用重叠延伸PCR定点突变技术构建人白介素18(hIL-18)突变体hIL-18D134R。将突变体cDNA与原核表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌DH5α。经热诱导表达蛋白质,SDS-PAGE证实,表达的目的蛋白质以包涵体形式存在。菌体经超声破碎后,包涵体以2 mol/L尿素洗涤,8 mol/L尿素溶解,并经Sephadex G-75柱纯化及稀释、透析复性。然后以诱导人外周血单个核细胞(PBMC)产生干扰素-γ(IFN-γ)及对核因子-κB(NF-κB)的激活能力为指标,检测突变体的生物学活性。结果构建的突变体hIL-18D134R可在大肠杆菌DH5α中高效表达,经包涵体洗涤和Sephadex G-75柱纯化后,纯度达92%以上。突变体D134R对IFN-γ的诱生能力及对NF-κB的激活能力分别为野生型hIL-18的19%和23%。结论在人IL-18的氨基酸序列中,Asp134对其生物学功能有非常重要的作用。

新生大鼠不同脑区内神经前体细胞生物学特性比较

为了观察海马、中脑和顶叶皮质内神经前体细胞的体外生长特性及其分化后所产生的神经元的形态特征,本研究使用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)体外扩增细胞技术和克隆形成实验分析了神经前体细胞的自我更新特性;采用神经前体细胞和骨髓基质细胞共培养方式,通过免疫细胞化学染色方法,研究了神经前体细胞的分化特点。结果发现:(1)新生大鼠海马、中脑和顶叶皮质内的神经前体细胞,在体外的分裂增殖能力无明显区别;(2)新生大鼠海马、中脑和顶叶皮质内的神经前体细胞在相同的条件下,其后代细胞中,神经元和胶质细胞所占的比例基本相同,但不同脑区内神经前体细胞所产生的神经元的形态却表现出明显不同。这些结果提示新生大鼠不同脑区内神经前体细胞的分化潜能已有了一定限制。

脑缺血/再灌注损伤小鼠生物学特性及稳定性

建立稳定的脑缺血/再灌注损伤小鼠模型,对于研究缺血性脑病具有至关重要的意义。为了建立一种易操作、成功率高、稳定性好的脑缺血再灌注损伤小鼠模型,使用70只无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级健康雄性C57小鼠,随机分成假手术组(n=10)、颈总动脉(common carotid artery,CCA)进线组(n=30)及颈外动脉(external carotid artery,ECA)进线组(n=30),参照Zea Longa法,在线栓的选取、血管分离及处理、线栓插入方式等方面进行探讨,通过神经功能缺损评分、TTC染色检查脑梗死体积及苏木素/伊红染色观察脑组织形态学上的病理改变来分析确证模型成功率及稳定性。结果表明:ECA进线组神经功能缺损评分在2~3分比率占70.0%,CCA进线组占43.3%;ECA组和CCA组术后存活率分别为90%和66.7%,两组之间存在显著性差异(P<0.05);脑梗死体积和组织病理学,ECA进线组与CCA进线组之间均无差异(P>0.05)。采用颈外动脉进线方式与颈总动脉进线相比,脑梗死体积同样稳定且存活率更高。

质谱和核磁共振成为研究生物大分子的重要方法——简介2002年诺贝尔化学奖得主的贡献

2002年诺贝尔化学奖授予了在质谱和核磁共振领域有杰出贡献的三位科学家。John B. Fenn和Koichi Tanaka发展了质谱鉴定生物大分子质量的方法,Kurt Wüthrich建立了核磁共振测定蛋白质分子溶液三维结构的方法。他们的研究成果是质谱和核磁共振方法发展的里程碑,极大地推动了这两种研究方法的进一步发展。如今,质谱和核磁共振已发展成为认识生物大分子的强劲的研究手段。

大、小剂量TGF-β1刺激大鼠皮肤成纤维细胞24h后检测c-Ski和Smad3的表达及其生物学意义

目的:探讨大、小剂量转化生长因子β1(TGF-β1)刺激大鼠皮肤成纤维细胞24h后检测c-Ski和Smad3的表达及其生物学意义.方法:大、小剂量TGF-β1刺激体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞,24h后采用WesternBlot和荧光实时定量PCR观察c-Ski,Smad3,CyclinD蛋白和c-Ski,Smad3mR-NA水平的变化情况;pcDNA3.0-LacZ报告基因免疫组化染色来确定转染效率,BrdUELISA法检测c-Ski和Smad3质粒分别转染或转染同时加大、小剂量TGF-β1刺激后细胞增殖的变化.结果:不同剂量TGF-β1刺激24h后,小剂量刺激可显著提高c-Ski,CyclinD的表达水平,而Smad3表达水平无显著变化;大剂量刺激可显著提高Smad3的表达水平和显著降低CyclinD的表达水平,c-Ski表达水平无显著变化.转染c-Ski可以促进细胞增殖,但同时降低了大、小剂量TGF-β1调节细胞双向增殖的幅度;转染Smad3可以抑制细胞增殖同时也降低了大、小剂量TGF-β1调节细胞双向增殖的幅度.结论:大、小剂量TGF-β1刺激24h后引起Smad3和c-Ski表达不同变化决定了细胞的增殖状态,这也是大、小剂量TGF-β1双向调节细胞增殖作用的可能机制之一.

人肾癌细胞系RLC-310的建立和生物学特性

新建成的RLC-310细胞系来自人原发性肾透明细胞癌组织,在体外经过2年的连续培养,已传代130次。细胞可重叠生长,群体倍增时间32小时,集落形成率44％,具有超二倍体核型,染色体众数64。细胞没有支原体污染,有特异性的LDH同功酶谱,培养上清中可测得高浓度的白细胞介素6(IL-6)活性。细胞接种Balb/c裸鼠可形成移植瘤,并具有原发肾癌的组织学结构。

抗重组人白细胞介素12单克隆抗体的制备及其生物学特性

目的:以纯化的重组人白细胞介素12(rhIL-12)蛋白为抗原,制备具有生物活性的rhIL-12单克隆抗体(McAb),并对其特性进行研究鉴定,为肿瘤及免疫相关性疾病的诊断与治疗提供具有实用价值的研究工具。方法:以纯化的rhIL-12p70免疫BALB/C小鼠,采用杂交瘤技术,用间接ELISA法筛选抗体阳性的杂交瘤细胞及多次克隆化,培养制备杂交瘤细胞系,用clutathione sepharose 4B进行纯化。采用间接ELISA及Western blotting等方法对McAb的Ig亚类(型)腹水效价及特异性进行鉴定。结果:建立了3株持续分泌rhIL-12p70McAb的杂交瘤细胞株,3株细胞染色体数目均为100条左右,证实为杂交瘤细胞,所分泌的抗体为2株IgG1亚类及1株IgG2a亚类,轻链属k型,小鼠腹水效价测定分别为1∶5.9×106、1∶2.9×107、1∶3.6×107,亲和力依次为EM5>EM6>EV9。结论:成功地制备了3株能稳定分泌抗rhIL-12p70的杂交瘤细胞株,产生的McAb特异性好,亲和力高。

p73基因在血液系统恶性肿瘤中的生物学行为

p73是肿瘤抑制基因p53家族新成员,它表达多种具有不同功能特点的蛋白质异构体.综述p73蛋白的分子结构、功能以及在血液系统恶性肿瘤中的生物学行为,旨在探索p73与血液系统恶性肿瘤的关系,为血液系统恶性肿瘤的诊断、治疗及预后提供理论依据.