开设硕士研究生分子生物学实验技术课程的几点体会

分子生物学实验技术课程是医学研究生教学中一门应用性很强的基础课，根据我校研究生教学课程的情况，就课程的设置、如何加强实验课中的理论教学、怎样培养学生动手能力和科研创新意识以及评定学生实验课成绩的指标等方面的教学经验进行了总结。

开放式教学法在分子生物学教学中的实践

在分子生物学的教学过程中,我们以鼓励学生的创新能力,提高学生综合素质为目标,在教学资源、教学内容、教学评价、教学方法上尝试了开放式教学法,给学生提供更多的学习机会和环境,激发学生学习的热情,培养学生的自学能力、独立思考和解决问题的能力。

现代分子生物学技术系列讲座之四──反义核酸技术

现代分子生物学技术系列讲座之四──反义核酸技术杜卫东（生物化学与分子生物学研究中心）反义核酸技术是利用人工合成的特异性反义寡核苷酸定向抑制或封闭同的基因（ＤＮＡ或ＲＮＡ）表达的技术。它包括三方面的内容：（１）反义及ＲＮＡ（ａｎｔｉｓｅｎｓｅＲＮＡ），...

质谱和核磁共振成为研究生物大分子的重要方法——简介2002年诺贝尔化学奖得主的贡献

2002年诺贝尔化学奖授予了在质谱和核磁共振领域有杰出贡献的三位科学家。John B. Fenn和Koichi Tanaka发展了质谱鉴定生物大分子质量的方法,Kurt Wüthrich建立了核磁共振测定蛋白质分子溶液三维结构的方法。他们的研究成果是质谱和核磁共振方法发展的里程碑,极大地推动了这两种研究方法的进一步发展。如今,质谱和核磁共振已发展成为认识生物大分子的强劲的研究手段。

中国医学分子微生物学的现状与展望

21世纪是以分子生物学为代表的生命科学的世纪,它将推动生物学由细胞水平向分子水平、基因水平发展。在分子微生物学基础研究方面,目前已搞清大肠杆菌基因约40%,已查明噬菌体的全部基因顺序,大约60%的基因亦已搞清。对某些细菌和病毒的复制、基因克隆、核苷酸序列,编码基因、增强子、启动子的结构与功能进行了深入的研究。在病原微生物检测技术方面,已由过去第一代的微生物常规分离培养技术,第二代的生化等快速诊断技术,第三代的单克隆抗体技术进入目前正在兴起的第四代基因诊断(基因探针和PCR)技术。前三代诊断技术都是以疾病的表型改变为依据。

用RAPD分子标志方法研究氧化亚铁硫杆菌遗传多样性

本文对采自7个不同环境的氧化亚铁硫杆菌进行了随机扩增多态性DNA(RAPD)分析,20个引物中筛选出扩增效果较好的4个引物,每个引物能产生1～9条DNA条带。通过4个引物的RAPD分析获得的平均相似性系数表明不同来源的菌之间的相关系数在44%～83%之间。

洞庭湖日本血吸虫疫区东方田鼠生化与分子遗传学标记的初步研究

目的 建立东方田鼠生化与分子遗传学标记检测法。方法 参考近交系小鼠、大鼠生化遗传标记检测方法 ,对东方田鼠某些同功酶进行活性测定。根据东方田鼠特异DNA序列 ,合成引物 ,扩增东方田鼠基因组DNA ,将PCR产物回收、序列分析并进行生物信息学分析。结果 东方田鼠Trf、Es 3和Ce 2三个生化位点呈现遗传多态性 ,而Id1、Mod 1、Car 2、Gpd 1、Gpi 1、Hbb、Es 1七个生化位点无遗传多态性。用合成的特异引物扩增东方田鼠基因组DNA ,得到了丰富的多态性资料。对其中的 2 0只东方田鼠的扩增产物进行测序并进行多序列比较 ,发现10个等位基因以及 16个单核苷酸多态性 (SNP)位点。结论 初步建立了东方田鼠生化及分子遗传学标记。分子遗传学标记与生化遗传标记相比 ,具有杂合率高、重复性好、易于操作等优点。这些结果为深入研究东方田鼠的遗传背景、生物进化规律积累了基础资料。

新肝炎病毒TTV在各类高危人群中的感染状况和分子流行病学研究

目的 观察新肝炎病毒 TTV在各类高危人群中的感染状况、基因分型及其在肝病发生和发展过程中的作用。方法 在日本株 TTV ORF1 保守区设计了两对套式引物 ,采用巢式聚合酶链反应扩增血清 TTV DNA,并对产物进行分子克隆和部分基因序列分析。结果 在非甲 -戊型和非庚型肝炎病人、血清HBs A g阳性的肝炎病人、正常献血员、肝炎肝硬化病人、原发性肝癌病人、静脉内吸毒者和女性与男性性乱者中 ,血清 TTV DNA 阳性率分别为 43.2 % (16 /37)、2 8.8% (15 /5 2 )、9.3% (4/4 3)、5 1.9% (14/2 7)、38.5 % (5 /13)、35 .0 % (14/4 0 )、17.3% (8/4 5 )和 18.8% (3/16 )。其中非甲 -戊型和非庚型肝炎病人、血清HBSAg阳性肝炎病人的 AL T平均为 (472± 2 76 ) u· L- 1 和 (385± 2 18) u· L- 1 ;肝炎肝硬化病人 TTV DNA阳性率显著高于 HBSAg阳性肝炎病人。同时 ,从非甲 -戊型和非庚型肝炎病人、血清 HBSAg阳性肝炎病人、正常献血员、静脉内吸毒者和女性性乱者中 ,分别获得 6份 TTV DNA ORF1 克隆 ,其基因序列与日本株TTV ORF1 部分基因核苷酸序列同源性为 97%～ 99% ,均属于 TTV 1a型。结论 TTV感染和 AL T升高存在一定的关系 ;我国各类高危人群感染 TTV以 1a型为主 。

东方田鼠胚胎成纤维细胞的分离培养及生物学特性

目的对影响东方田鼠胚胎成纤维细胞(MfEF)分离和培养的因素进行探索,并观察其生物学特性。方法取室内繁殖饲养不同胎龄的东方田鼠胚胎分离成纤维细胞,通过原代和继代培养,分析比较不同胎龄、不同血清浓度、不同胰蛋白酶浓度等因素对MfEF分离及培养的影响,观察MfEF的生长形态及其生物学特性。结果 MfEF为贴壁型生长,细胞形态多样,呈梭形、不规则多边形;采用0.125%的胰蛋白酶室温消化12～13 d胚胎组织5 min,以DMEM培养基添加15%小牛血清分离培养MfEF的效果最佳;MfEF2～7代增殖最旺盛。结论获得了实验室分离、培养MfEF的有效方法 ,为进一步深入研究东方田鼠抗日本血吸虫机制以及开展不同动物成纤维细胞间比较研究奠定了基础。

脑缺血及缺血再灌注诱导大鼠海马脑区ERK5的激活及其分子机制的研究

目的 研究脑缺血及缺血再灌注大鼠海马脑区细胞外信号调节激酶 5 (ERK5 )的磷酸化 (激活 )规律以及还原剂N -乙酰半胱氨酸 (NAC)对其激活的影响。方法 采用S -D大鼠四动脉结扎模型 ,用免疫印迹法分析不同条件ERK5的蛋白表达量和激活。给药组大鼠在缺血前 2 0min腹腔给药。结果 S -D大鼠缺血时 ,海马脑区ERK5被快速激活 ,3min达最高峰 ;缺血 15min后再灌注 10min至 2 4h ,ERK5被持续激活 ,30min时达到最高激活峰。ERK5的蛋白表达量在以上不同处理条件下没有明显变化。NAC显著抑制了缺血及缺血再灌注后ERK5的激活。结论 脑缺血及缺血再灌注诱导了ERK5的激活 ,这种激活与自由基的产生密切相关。

高压生物科学与技术研究进展

压力生物科学是一个新兴学科,它由纯应用型技术研究拓展到生物化学、细胞生物学和分子生物学等基础生物学科的相关领域。压力作为重要的热力学参数,会影响蛋白质的结构与功能、细胞代谢、基因表达等生物过程,运用科学的方法和手段研究压力生物效应可以更好地认识许多生命现象。

人IL-18突变体D134R的构建及其生物学活性分析

目的研究IL-18结构与功能的关系。方法用重叠延伸PCR定点突变技术构建人白介素18(hIL-18)突变体hIL-18D134R。将突变体cDNA与原核表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌DH5α。经热诱导表达蛋白质,SDS-PAGE证实,表达的目的蛋白质以包涵体形式存在。菌体经超声破碎后,包涵体以2 mol/L尿素洗涤,8 mol/L尿素溶解,并经Sephadex G-75柱纯化及稀释、透析复性。然后以诱导人外周血单个核细胞(PBMC)产生干扰素-γ(IFN-γ)及对核因子-κB(NF-κB)的激活能力为指标,检测突变体的生物学活性。结果构建的突变体hIL-18D134R可在大肠杆菌DH5α中高效表达,经包涵体洗涤和Sephadex G-75柱纯化后,纯度达92%以上。突变体D134R对IFN-γ的诱生能力及对NF-κB的激活能力分别为野生型hIL-18的19%和23%。结论在人IL-18的氨基酸序列中,Asp134对其生物学功能有非常重要的作用。

人PSP94与TNFα衍生物联合治疗人前列腺癌的实验研究

构建了表达人 PSP94、TNFα衍生物 ( TNFα D1 1 a)及 PSP94与 TNFα D1 1 a( PSP94- TNFαD1 1 a)双功能蛋白真核表达质粒 pc DNA- TNFα D1 1 a、pc DNA- PSP94和 pc DNA- PSP94- TNFαD1 1 a,与 rh PSP94和 rh TNFα D1 1 a蛋白分别在人前列腺癌裸鼠移植瘤动物模型上进行了 PSP94与 TNFαD1 1 a联合治疗人前列腺癌的实验研究 .当动物肿瘤直径长至约 1 0 mm时 ,将以上 3种真核表达质粒分别以 50 μg/只的量给相应组动物的左右四头肌内注射一次 ,同时设 pc DNA3.0空载体对照组 ;rh PSP9450μg/kg、rh TNFαD1 1 a 1 0 0万单位 /kg、rh PSP94和 rh TNFαD1 1 a以同样剂量联合给药 ,肌肉注射 ,每 d一次 ,连续 1 0 d,同时设环磷酰胺阳性对照组和生理盐水阴性对照组 .基因治疗动物给药后第 1 5d处死 ,蛋白治疗组停药后第 2 d处死 ,观察疗效 ,计算抑瘤率 .结果显示 ,以上述方式给药 ,无论是基因治疗组还是重组蛋白组 ,给 PSP94的动物肿瘤虽然未见明显缩小 ,但肿瘤组织均出现不同程度的坏死和液化现象 ;给 TNFαD1 1 a的未见明显的抑瘤效果 ;PSP94-TNFαD1 1 a融合基因或 rh PSP94+ rh TNFαD1 1 a联合给药 ,不仅肿瘤有所缩小 ,而且也有不同程度的坏死和液化现象出现 .初步认为 :( 1 )

脑缺血/再灌注损伤小鼠生物学特性及稳定性

建立稳定的脑缺血/再灌注损伤小鼠模型,对于研究缺血性脑病具有至关重要的意义。为了建立一种易操作、成功率高、稳定性好的脑缺血再灌注损伤小鼠模型,使用70只无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级健康雄性C57小鼠,随机分成假手术组(n=10)、颈总动脉(common carotid artery,CCA)进线组(n=30)及颈外动脉(external carotid artery,ECA)进线组(n=30),参照Zea Longa法,在线栓的选取、血管分离及处理、线栓插入方式等方面进行探讨,通过神经功能缺损评分、TTC染色检查脑梗死体积及苏木素/伊红染色观察脑组织形态学上的病理改变来分析确证模型成功率及稳定性。结果表明:ECA进线组神经功能缺损评分在2~3分比率占70.0%,CCA进线组占43.3%;ECA组和CCA组术后存活率分别为90%和66.7%,两组之间存在显著性差异(P<0.05);脑梗死体积和组织病理学,ECA进线组与CCA进线组之间均无差异(P>0.05)。采用颈外动脉进线方式与颈总动脉进线相比,脑梗死体积同样稳定且存活率更高。

慢性粒细胞性白血病急变的相关分子研究进展

慢性粒细胞性白血病（ＣＭＬ）是由ｔ（９，２２）（ｑ３４，ｑ１１）易位引起的一种血液系统恶性疾病。该易位重排形成的ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因及其所编码的Ｐ２１０蛋白在ＣＭＬ发生中的作用已被确认。近年研究表明ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因、抑瘤基因（如ｐ５３，Ｒｂ，ｐ１６等）及其它分子（如ＥＶＩ１，ｃｍｙｃ等）均与ＣＭＬ急变有关。分析这些相关分子对ＣＭＬ急变的直接或间接影响，对ＣＭＬ的分子病理学及其治疗研究均具指导意义。

毛囊形态学发生期的分子调控研究进展

动物的毛囊(hair follicle)是皮肤表皮向真皮下陷而形成的重要附属结构,毛囊的底部可深达皮下组织内,是毛发生长起点.毛囊的生长发育能力很强,而且在动物皮肤中终生成周期性生长变化的器官.毛囊被认为是起源于神经外胚层和中胚层,并且相互作用而形成的微小器官[1],毛囊的形态发生起始于早期胚胎阶段,是干细胞研究及系统生物学研究的理想模型[2].对于动物来说,其毛发的品质及商品价值的高低主要取决于毛囊的结构和特性,因此,研究毛囊的发育生物学及其分子调控是研究各种动物毛发变化的基础,也是提高动物毛发产量和质量的主要研究点.现对毛囊结构、毛囊生长周期变化及调控毛囊发育的信号分子研究等方面的最新进展进行综述.

生物芯片技术、原理及在胃肿瘤研究中的应用

进一步阐述生物芯片在胃癌研究中的发展及应用

p73基因在血液系统恶性肿瘤中的生物学行为

p73是肿瘤抑制基因p53家族新成员,它表达多种具有不同功能特点的蛋白质异构体.综述p73蛋白的分子结构、功能以及在血液系统恶性肿瘤中的生物学行为,旨在探索p73与血液系统恶性肿瘤的关系,为血液系统恶性肿瘤的诊断、治疗及预后提供理论依据.