戊型肝炎病毒感染的实验室诊断研究进展

[背景]戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV),是全球范围内病毒性肝炎重要病原体之一.HEV感染可以导致急性、慢性戊型肝炎以及许多肝外症状.研究者们开发了HEV RNA、HEV抗原、HEV IgM和HEV IgG等多种实验室检测方法用于诊断HEV感染.[进展]不同HEV指标都有其独特的诊断价值,尤其是HEV抗原.HEV抗原检测的主要靶标为分泌型HEV抗原,而非传统的病毒衣壳蛋白.HEV抗原检测可用于急性与慢性HEV感染的检测,也可用于HEV感染后临床结局的预测以及区分急性与慢性HEV感染,尿液HEV抗原检测为HEV感染提供了一种无创的检测方式.HEV RNA检测在急性与慢性HEV感染以及出现肝外症状的人群中都具有重要的价值,被认为是HEV感染诊断的金标准.HEV IgM和HEV IgG分别是HEV近期感染和既往感染指标,持续时间较长,对HEV现症感染的指示较弱.[展望]随着检测技术的进步和检测新靶标的发现,HEV RNA和抗原作为现症感染的指标越来越受到重视,而HEV IgM和IgG血清学检测作为间接检测指标由于较成熟,商品化试剂较丰富,目前依然在临床检测中广泛使用.了解HEV感染的实验室诊断研究现状和发展动态,可为临床中HEV感染的诊断提供思路和参考.

江苏省东台市农村地区散发戊型病毒性肝炎流行病学特征分析

目的分析2008-2011年江苏省某农村地区戊型病毒性肝炎流行病学特征。方法利用已建立的疑似肝炎症状监测系统主动发现戊型病毒性肝炎患者,并对其流行病学特征进行分析。结果 2008-2011年戊型肝炎所占急性病毒性肝炎比例为27.29%,成为第2个主要病毒性肝炎。戊型肝炎年平均发病率2.2/万,戊肝发病全年散发,冬春季节高发;男性发病率高于女性,发病率随年龄增长逐渐升高,发病平均年龄(55.48±14.32)岁。戊型肝炎病毒株HEV1、4型并存,以HEV4型为主(95.6%)。结论本地戊肝呈散发,中老年高发,男性多于女性,以HEV4型为主。

人乳头瘤病毒衣壳蛋白结构生物学研究进展

人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的感染会导致人类多种疾病,尤其是女性宫颈癌。HPV衣壳是由主要衣壳蛋白L1和次要衣壳蛋白L2形成的T=7的正二十面体结构,L1蛋白具有较强的免疫原性且能在体外自组装形成与天然病毒结构相似的类病毒颗粒(virus like particle,VLP),是目前HPV疫苗的理想形式。此外,L1、L2蛋白在病毒的感染中发挥着重要作用。对HPV衣壳蛋白结构和功能的研究,有助于进一步阐明HPV的颗粒组装机制、致病机理及感染机制,为今后开展HPV相关疾病的研究提供指导方向。本文就HPV衣壳蛋白的结构、病毒颗粒组装及衣壳蛋白间相互作用研究进展进行综述。

复合前列腺特异性抗原的单克隆抗体制备及化学发光法免疫定量检测试剂研究

目的：获得特异性检测复合前列腺特异性抗原（c-PSA）的单克隆抗体配对,建立基于化学发光c-PSA免疫定量试剂。方法：利用市购c-PSA抗原免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,间接法ELISA差异筛选抗c-PSA、游离前列腺特异性抗原（f-PSA）、总前列腺特异型抗原（t-PSA）的抗体,抗体配对后化学发光定量检测血清中c-PSA蛋白。结果：获得抗体配对1A10/7D6-SAE,经c-PSA标准品及临床血清样本初步筛选,该抗体配对适用于基于化学法发光的免疫反应定量检测试剂的开发;血清阳性样本与阴性样本检测结果显示具有统计学意义（P〈0.000 1）;阳性样本定量结果与Siemens公司复合前列腺特异性抗原测定试剂盒（直接化学发光法）的相关系数为0.97;线性范围为0.1~100 ng/ml;检测灵敏度为0.005 ng/ml。结论：成功筛选获得特异性检测c-PSA的抗体配对,并开发c-PSA化学发光免疫定量试剂,其检测能力与国际主流试剂相当。

巨细胞病毒实验室检测方法研究进展及其用于新生儿筛查的可行性

人巨细胞病毒(HCMV)感染后大多数无明显的临床症状,但可终身潜伏,并在特定条件下被激活而感染。孕期发生的HCMV活动性感染会导致流产、死胎、出生缺陷等,造成严重的经济和社会负担。由于原发性和继发性HCMV感染均可导致新生儿先天性感染,而目前无有效方法可筛查孕期HCMV继发性感染。因此对新生儿进行全面的先天性HCMV筛查,以便及早干预从而减轻先天性HCMV感染后果。文章对HCMV实验室检测的方法作一综述,并且分析其用于新生儿筛查的可行性,以期为新生儿先天性HCMV筛查方法的选择提供依据。

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的单克隆抗体制备及化学发光免疫定量检测试剂研究

目的获得中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）的单克隆抗体,并对其应用于化学发光定量试剂进行研究。方法利用原核表达系统表达的NGAL重组抗原,经过Ni2＋-金属螯合层析纯化后用于免疫6~8周龄的雌性BALB/c小鼠,完成免疫程序后将其脾脏细胞与杂交瘤细胞进行融合,通过间接法ELISA筛选抗NGAL的单克隆抗体,并结合Western blot鉴定抗体与天然NGAL的反应性。结果获得了由原核表达系统表达的NGAL重组抗原,具有较高的纯度,可形成二硫键交联的二聚体形式;重组抗原具有较好的免疫原性,免疫小鼠多抗血清效价达10^6以上;筛选获得30株单克隆抗体,其中单抗23C12、38D10的EC50分别为0.034、0.022 g/mL;经NGAL标准品及临床尿液样本初步筛选,由38D10/23C12-SAE组成的抗体配对能够很好的适用于基于化学法发光的免疫反应定量检测试剂的开发;尿液阳性样本与阴性样本检测结果显示具有显著的统计学差异（P〈0.001）;对病患组定量结果与Abbott公司的尿NGAL测定试剂盒（化学发光微粒子免疫检测法）的相关系数大于0.97,线性范围为10~1500 ng/mL,检测灵敏度为0.63 ng/mL。结论本研究成功制备了NGAL重组抗原,获得了NGAL特异单克隆抗体,并开发了NGAL化学发光免疫定量试剂,该试剂检测能力与国际主流试剂相当。

聚集诱导发光增强型金属纳米团簇在生物医学领域的研究进展

近年来,具有聚集诱导发光(Aggregation-induced emission,AIE)增强性质的金属纳米团簇由于其高光学稳定性和良好的发光性能在生物医学、环境科学等领域展现出广阔的应用前景。然而,当前对于AIE金属纳米团簇的研究还处于起步阶段,其复杂的表面/界面结构和增强发光机理尚不明晰,对其合理的调控制备仍是重要研究挑战之一。本文基于已成功合成的具有高AIE性能金属纳米团簇的研究报道,综述了硫醇修饰的表面修饰机理和策略;主要介绍了金、银、铜几种AIE金属纳米团簇在分析传感及生物医学领域的应用,并对其他配体修饰的铱配合物的AIE特性及其应用进行了论述;最后阐述了对AIE金属纳米团簇研究现状的看法及展望,旨在为AIE金属纳米团簇未来的研究发展提供思路与参考。

基于苯并噻二唑结构的近红外二区有机小分子在生物成像和治疗中的研究进展

基于光子反射、散射和自发荧光的减弱,近红外二区窗口能够实现高分辨率和信噪比的生物荧光成像,在各种生物医学应用中发挥着重要作用。构建供体-受体-供体结构是设计近红外二区有机小分子的有效方法,基于苯并噻二唑结构的近红外二区有机小分子不仅能够实现光学成像,还能利用光激活的激发态能量转换实现光学治疗。本文总结了基于苯并双噻二唑(Benzobisthiadiazole,BBT)和[1,2,5]噻二唑[3,4-g]喹喔啉([1,2,5]thiadiazolo[3,4-g]quinoxaline,TQ)结构的近红外二区有机小分子在生物成像和成像引导的治疗中的研究进展,并对未来近红外二区有机小分子的设计和应用进行了展望。

基于假病毒的人乳头瘤病毒小鼠感染模型的建立及HPV16VLP疫苗保护性评价

目的建立基于假病毒的人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)小鼠感染模型并应用于HPV16 VLP疫苗的保护性评价。方法利用293FT细胞制备携带Luc报告基因的HPV16假病毒,纯化后检测HPV16假病毒滴度和性质;利用醋酸甲羟孕酮和β-雌二醇处理雌性BAL B/c小鼠,然后用壬苯醇醚-9(N-9)化学损伤BALB/c小鼠阴道,6 h后用HPV16假病毒感染小鼠阴道,48 h后使用活体检测仪检测小鼠阴道中Luc报告基因的表达情况;最后,利用该感染模型评价HPV16 VLP疫苗的保护能力。结果获得了含有Luc报告基因的HPV16假病毒,建立了HPV假病毒纯化方法;Western blot结果显示HPV16假病毒中含有L1和L2蛋白;建立了HPV假病毒感染小鼠模型,并通过不同剂量的假病毒感染实验表明,该感染模型所需的最低假病毒剂量是1.7×104TRLU;利用该模型获知HPV16 VLP疫苗具有较强的抵抗HPV16假病毒感染的能力,当中和抗体滴度为256时即可阻碍HPV假病毒感染。结论本研究成功地建立了HPV假病毒小鼠感染模型,并运用该模型评价了HPV16 VLP疫苗的保护作用,为HPV中和抗体研究和候选疫苗的免疫保护评价提供了有效工具。

埃可病毒25型新型中和实验方法的建立与应用

目的：建立一种新型的快速、高通量的埃可病毒25型（ECHO25）中和抗体检测方法,并初步评价其在ECHO25中和抗体筛选和血清流行病学调查中的应用价值。方法：应用免疫荧光方法筛选ECHO25高亲和性抗体并将其作为检测单抗,结合酶联免疫斑点检测技术（ELISPOT）建立ECHO25中和抗体检测方法;使用不同效价的血清评价该方法的准确性;采用所建立的中和方法对ECHO25单克隆抗体、临床血清样品进行检测。结果：建立了快速检测ECHO25中和抗体的Nt-ELISPOT方法,以ECHO25单克隆抗体5B9作为检测抗体;相比经典的中和实验方法 Nt-CPE,该方法可显著缩短检测时间（从5～7 d缩短至1 d以内）,检测结果具有较好的一致性;采用所建立的Nt-ELISPOT方法首次筛选获得3株对ECHO25具有较好中和能力的单克隆抗体;临床血清样品检测结果显示厦门地区可能存在ECHO25的流行。结论：该方法可以应用于中和抗体筛选和血清学的临床辅助诊断,为ECHO25的防治研究提供支持。

人乳头瘤病毒预防性疫苗的研究进展和应用现状

高危型人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染被证实是诱发女性宫颈癌的主要原因。宫颈癌已成为继乳腺癌之后世界范围内严重威胁妇女健康的疾病。目前宫颈癌治疗效果不佳,因此预防HPV感染尤为重要。国外已上市的3种HPV预防性疫苗显示出良好的安全性和有效性,但由于生产成本和售价较高,阻碍了其在发展中国家和经济较落后的地区推广应用。目前,这些疫苗尚未在我国上市,本文综述了HPV疫苗的研究进展和应用现状,为即将在我国上市的HPV疫苗提供信息。

BK病毒感染诊断与治疗的研究现状

BK病毒(BKV)属于人类多瘤病毒中的一个亚型。BKV在普通人群中隐性感染率高达80%。近年来,随着器官移植术的广泛开展以及强效免疫抑制剂的大量使用,在免疫抑制和免疫低下的人群中,由潜伏于体内的BKV重新被激活而引起的BKV相关肾病(BKVAN)、出血性膀胱炎、输尿管狭窄等疾病越来越受到医学界的关注。目前对BKV感染缺乏明确有效的预防措施及抗病毒药物,因此早期监测器官移植术后患者体内的BKV载量、减少免疫抑制剂的使用量、及时调整免疫抑制剂治疗方案并辅助使用其他抗病毒药物对预防BKV相关疾病的发生尤为重要。文章就BKV感染相关的疾病及其临床症状、生物学特征、感染机制以及当前国内外诊断及治疗研究现状进行综述。

科学监管提高疫苗可及性

疫苗储存运输要遵循冷链运输(cold chain,CC)的要求,这很大程度上限制了疫苗的接种和普及,尤其是在那些贫困偏远地区。为扩大疫苗可及性,世界卫生组织(World Health Organization,WHO)于2012年首次提出了受控温度链(controlled temperature chain,CTC)法规,即在政府部门和WHO的监管下,在有充分热稳定性数据支持的前提下,若申报CTC的疫苗在不低于40℃下存放至少3 d后仍能保证效力,则该疫苗在免疫供应链后期无需冷链运输。CTC法规已成功应用在包括MenAfriVac在内的4个商品化疫苗上。本文介绍了CTC法规的内容和应用情况,通过科学监管提高疫苗可及性,减少不必要的浪费。

人乳头瘤病毒疫苗的临床免疫学研究进展

人乳头瘤病毒（ human papillomavirus,HPV）的持续性感染是导致宫颈癌的主要病因,接种HPV疫苗已成为预防宫颈癌和癌前病变的首选。 HPV特异性抗体水平可间接反映疫苗的保护性,因此在HPV疫苗临床评价过程中,其免疫原性分析至关重要。目前世界范围内已有3种HPV疫苗上市,但尚无统一的免疫原性评价方法,现行的检测方法主要为假病毒中和试验、酶联免疫吸附试验和单表位中和单抗竞争法。本文对这3种检测方法的特点,以及3种HPV疫苗的免疫原性、免疫持久性及其在不同人群中的免疫应答水平和特点进行综述。

戊型肝炎病毒感染实验室诊断方法研究进展

戊型肝炎是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus,HEV)引起的急性病毒性肝炎,已经成为威胁人群健康的公共卫生问题。HEV主要通过消化道传播,但随着HEV输血传播病例的报道,HEV给输血安全带来的风险也受到人们的重视。通过分析戊型肝炎现有的诊断手段,以对献血员的HEV筛查提供借鉴作用,这对输血安全中戊型肝炎的预防和控制具有重大意义。目前常用的戊型肝炎检测指标主要包括:HEV RNA、HEV抗原、抗-HEV IgM、抗-HEV IgG。核酸检测是戊型肝炎诊断的"金标准",对于慢性戊型肝炎患者、免疫缺陷人群及无肝炎症状的HEV感染者都有着特别优势。HEV抗原作为HEV现症感染指标,对于血站HEV筛查和急性戊型肝炎诊断有很好的应用价值。抗-HEV IgM是HEV近期感染的标志,不能作为HEV现症感染的单一指标。而抗-HEV IgG只能指示HEV既往感染,不适用于急性戊型肝炎的诊断。目前,献血员HEV检测主要以核酸检测为基础,而HEV抗原检测可能弥补HEV RNA的检测不足。在未来,抗原检测和抗体检测对于献血员HEV筛查的价值还有待更多的研究评价。

SARS-CoV-2广谱中和抗体性质鉴定

目的:对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)广谱中和抗体XMA09进行性质鉴定,探究其广谱中和突变株的潜在机制,为SARS-CoV-2的疫苗设计与广谱中和抗体筛选提供参考。方法:通过ExpiCHO真核表达系统与Protein A层析柱表达纯化XMA09蛋白;冷冻电镜技术确定XMA09识别的受体结构域(RBD)上的关键氨基酸位点;间接ELISA与表面等离子共振(SPR)技术检测XMA09对SARS-CoV-2及其突变株Spike蛋白的亲和力;采用基于水疱性口炎病毒(VSV)的假病毒系统检测XMA09对SARS-CoV-2野生型及突变株的中和能力。结果:本研究发现XMA09识别的表位较为保守,对多种突变株Spike蛋白均具有强结合能力,能广谱中和关切突变株(VOCs),包括广泛流行的Omicron亚突变株BA.4/5。结论:XMA09是SARS-CoV-2广谱中和抗体,具有作为SARS-CoV-2治疗性抗体的潜力,并可为SARS-CoV-2的广谱疫苗设计与抗体药物开发提供参考意义。

2017年深圳市学校乙型/Yamagata系流感传播动力学研究及防控措施评价

目的探讨2017年深圳市乙型Yamagata系(B/Y)流感在学校暴发疫情中的传播能力,评价疫苗接种和隔离措施的防控效果。方法运用SEIAR动力学模型对暴发现场调查数据进行模拟,计算疫情的基本再生数(R0)评价B/Y的传播能力;设计SEIARV疫苗接种模型和SEIARQ隔离模型,计算累计罹患率(TAR)和暴发持续时间(DO),评价疫苗接种与隔离措施的防控效果。结果 2017年深圳市B/Y流感暴发疫情的R0为5.97(95%CI:3.66~8.28);无干预措施下模拟疫情将持续52 d,TAR为99.57%。模拟单独采取在疫情发生前接种流感灭活疫苗(IIV),当接种比例为30%、50%和70%时,接种三价流感灭活疫苗(IIV3)或四价流感灭活疫苗(IIV4)的TAR分别为80.51%/76.81%、65.07%/58.48%和44.06%/33.77%;模拟单独采取疫情发生后应急接种,当接种比例为30%、50%和70%时,接种IIV3/IIV4的TAR分别为85.94%/82.46%、73.55%/67.03%和57.90%/47.54%;当接种比例≥50%,如采取疫情发生前疫苗接种+隔离的联合干预措施,TAR均<1%;如采取疫情发生后应急接种+隔离,TAR均<5%。结论 2017-2018年流感季B/Y在学校暴发疫情中传播能力较强;无论接种IIV3或IIV4,高覆盖率的疫苗接种结合隔离措施是有效的流感防控措施。

干扰素刺激基因及临床意义研究进展

干扰素(Interferon,IFN)作用于靶细胞表面受体后,通过一系列信号传导激活干扰素刺激基因(Interferon stimulated genes,ISGs)的表达。干扰素刺激基因及其表达产物具有抗病毒、免疫调控等多种生物学功能,是干扰素发挥功能的重要效应分子,同时具有潜在的临床意义。众多国内外研究发现ISGs对Ⅰ型干扰素临床抗病毒效果具有预测意义,同时可能成为某些自身免疫疾病临床诊断的新靶标以及作为一些肿瘤治疗药物新靶点等潜在应用价值。本文将从干扰素刺激基因的诱导产生、抗病毒等生物学功能以及潜在临床意义方面展开综述。

SEIAR传染病动力学模型的建立及实现

目的利用Berkeley Madonna软件建立SEIAR模型,梳理建模步骤及代码。方法收集荆州市一起流感暴发疫情病例发病时间资料,利用Berkeley Madonna软件分别建立无干预措施的模型(SEIAR0)、采取病例隔离控制措施的模型(SEIAR_I)、采取班级停课的模型(SEIAR_C)和同时采取两种干预措施的模型(SEIAR_M)。选择累计罹患率(TAR)和疫情持续时间(DO)比较采取干预措施对暴发疫情的影响。模型参数β经曲线拟合获得,余参数参考同类研究并进行敏感性分析。结果该起疫情自2017年11月12日出现病例,11月17日、21日分别采取病例隔离和班级停课的控制措施。参数β最优值为0.00105,SEIAR0模型的TAR为85.90%,DO为49 d。SEIAR_M、SEIAR_I、SEIAR_C较SEIAR0的TAR分别下降95.25%、89.94%和73.32%;DO依次为29 d、78 d和39 d。敏感性分析结果显示,参数变化时,TAR介于71.42%~86.02%。结论Berkeley Madonna软件建立SEIAR模型简单、易行,适于评价干预措施的效果。

酶联免疫吸附分析双抗夹心法检测临床鼻咽抽吸物中呼吸道合胞病毒

呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是引起5周岁以下儿童下呼吸道感染的主要病原体.目前常用的试剂盒是美国Diagnostic Hybrids公司研发的7项呼吸道病毒检测试剂盒,但其价格昂贵,且需荧光显微镜辅助诊断,不利于在基层医疗机构中推广,国内尚无上市的快速诊断试剂用于临床检测.为此建立用于RSV抗原检测的早期快速诊断试剂,并以反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测为参比,同时使用酶联免疫吸附分析(ELISA)双抗夹心法和免疫荧光法对112份临床鼻咽抽吸物(NPA)样本进行检测.ELISA双抗夹心法和免疫荧光法的灵敏度分别为79.31%和74.14%,特异度分别为100%和96.30%,Kappa值分别为0.787 1和0.689 5,两者均与RT-PCR检测结果具有高度一致性.此外,将ELISA双抗夹心法与免疫荧光法比较,两者无显著差异(p>0.05).综上,ELISA双抗夹心法操作简便,特异性高,有望代替进口检测试剂盒完成RSV感染的早期快速诊断.