单纯疱疹病毒实验室诊断方法的研究进展

<正> 单纯疱疹病毒(HSV)能引起多种疾患,如疱疹性脑炎、疱疹性角膜炎、生殖器疱疹、新生儿感染、胎儿致畸等,已受到医学界的高度重视。为改进实验室诊断方法,为临床提供特异性高、敏感性好、早期、快速的诊断结果,特将本专题介绍于下:1.病毒分离:敏感的细胞系具有很高的检出率,在细胞培养中,只要有1～10个感染性HSV 就可以检出,而ELISA 和核酸杂交则需要10~4～10~6病毒颗粒。HSV 可以在多种动物细胞中增殖,乳地鼠肾细胞(BHK)、非州绿猴肾细胞(Vero)、人胚肺细胞(HEL)、原代兔肾细胞(PRK)、恒河猴胎肾细胞(FRHK)。

烟草花叶病毒运动蛋白cDNA的克隆及融合蛋白的表达

从烟草花叶病毒 (TMV)中提取总RNA ,通过反转录 PCR (RT PCR)扩增得到其运动蛋白 (MP)的基因 ,将扩增产物克隆到pMD 18T载体上。DNA序列分析表明 ,所得到的运动蛋白的基因全长为 80 7bp (GenBank接受号AY30 0 16 1) ,与已发表TMV序列 (GenBank登陆号为NC- 0 0 136 7)和同属的番茄花叶病毒 (ToMV ,GenBank登陆号为NC- 0 0 2 6 92相比核苷酸的同源性分别为 98 0 %和 80 9% ,氨基酸的同源性分别为 99 1%和 80 0 %。将目的片段亚克隆到表达载体pET 30a上 ,并在大肠杆菌JM10 9中诱导表达 ,诱导 9h后 ,融合蛋白表达量最大。诱导后的工程菌超声后经SDS PAGE检测 ,融合蛋白以可溶形式存在。

黄芪对水痘──带状疱疹病毒抑制作用的研究

黄芪对水痘──带状疱疹病毒抑制作用的研究张美芳，徐汉卿，董晓慧西安医科大学第二临床医学院皮肤科（西安７１０００４）本实验采用细胞培养技术，对中草药黄芪在实验室内的抗水痘──带状疱疹病毒（ＶＺＶ）作用进行了研究，现报道如下。１实验材料１．１人胚肺纤维母...

应用原位PCR对鸡传染性法氏囊病病毒早期侵染过程的研究

人工接种 35日龄SPF鸡传染性法氏囊病病毒 ,间隔不同时间采集法氏囊、胸腺、脾、盲肠扁桃体、肾、肝和腿肌进行了原位PCR检测 ,同时观察各组织病理变化。结果无论是H毒株还是Ts毒株 ,接种后 4h肝、肾、脾等组织中即出现明显的阳性信号 ,Ts毒株 4hPI从胸腺、盲肠扁桃体、腿肌等组织中也检出了病毒基因序列。接种H毒株和Ts毒株后 2 8h和 40h ,法氏囊淋巴细胞开始出现变性、坏死。在阳性信号检出的时间上 ,法氏囊较肝、肾、脾等组织是滞后的。H毒株较Ts毒株在早期对法氏囊具有更强的侵染能力。

狂犬病病毒CTN株糖蛋白基因的克隆与序列分析

克隆分离自我国狂犬病病毒固定毒CTN株糖蛋白基因,分析它的主要功能位点表明它具有319位的糖基化位点和完整的抗原位点,说明其具有用作疫苗株的潜力。并与国内外疫苗株、我国的3株街毒株、CVS株和Mokola毒株进行了同源性分析,表明我国疫苗株和CVS株与我国的街毒株相距最远,而CTN株与我国的3株街毒株相距最近,同属一个分支。

香菊流浸膏对水痘─带状疱疹病毒抑制作用的实验研究

采用细胞培养技术，通过五种不同的给药途径，观察香菊流浸膏对分离的水痘－带状疱疹病毒的实验室抑制作用。结果证实香菊流浸膏对水痘－带状疱疹病毒复制的每一环节均有不同程度的抑制作用。

血吸附法浓缩NDV病毒及与其他几种方法的比较

用人O型红细胞吸附—释放病毒的方法纯化被感染的鸡胚尿囊液中的新城疫病毒 (NDV) ,然后分别对纯化的病毒液及弃去的上清进行血凝检测。结果表明 ,使用 1%的红细胞悬液只能吸附部分病毒 ,损失较大 ,只有将红细胞悬液的浓度增加到2 0 %时 ,才基本将病毒全部吸附住。同时还比较了差速离心、PEG沉淀、PEG包埋等方法。

水稻矮缩病毒非结构蛋白基因S6的表达和抗血清的制备

经RT-PCR扩增出水稻矮缩病毒(RDV)中国分离物非结构蛋白基因S6,并克隆至pGEM-Teasy载体上。序列分析表明该基因与日本株具有高度同源性,并且含有较高比例的稀有密码子。将S6基因克隆到表达载体pGEX-6P-1,并转化大肠杆菌,该基因在大肠杆菌以包涵体形式大量表达。以表达的融合蛋白作抗原免疫家兔,制备抗S6蛋白的抗血清,ELISA测定表明,该血清与抗原共价特异性反应,抗血清的效价为1:3000.Western blot印迹实验表明该抗血清能特异性检测RDV感染的水稻组织中的S6蛋白,因而可作为感染RDV的水稻植株的分子手段。

人乳头瘤病毒16型E7变异株免疫原性研究

采用分子克隆技术,构建E7变异株重组质粒[pcDNA3.1-(by)E7]和E7标准株重组质粒[pcDNA3.1-(ys)-E7],并将两种质粒分别皮下免疫Balb/c小鼠,免疫后于不同时间提取小鼠血清和制备脾淋巴细胞悬液,分别用ELISA法和MTT比色法检测特异性抗体和特异性淋巴细胞增殖反应。基因免疫后,ELISA法显示,HPV16E7变异株和标准株均能诱导特异性抗E7抗体;MTT比色法显示,E7标准株免疫组脾淋巴细胞在体外受到变异株E7蛋白的再次刺激后出现特异性淋巴细胞增殖反应,变异株E7免疫组脾淋巴细胞经过同样处理后,出现非特异性淋巴细胞增殖反应。结果表明HPV16E7变异株能诱导特异性体液免疫应答而不能诱导特异性细胞免疫应答,HPV16E7变异株无论在结构还是免疫原性上均与标准株有差异。由此推测,HPV16E7变异可能导致其逃逸机体自然感染或疫苗诱导的免疫应答。用基因免疫方法研究E7变异株免疫原性也为其它不能或难以进行体外培养的病毒变异研究提供借鉴。

用细菌/杆状病毒系统在昆虫细胞中表达GFP与HCV抗原融合蛋白

用细菌／杆状病毒（Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ）系统在昆虫细胞中高效表达了绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）与ＨＣＶ抗原的双功能融合蛋白，经ＥＬＩＳＡ测定和荧光显微镜观查证实，表达产物既能发射易于检测的绿色荧光，又具有ＨＣＶ的抗原活性，实现了用绿色荧光蛋白等分子标记抗原，为免疫诊断新方法的建立打下了理论基础．

陈株肾综合征出血热病毒感染乳鼠的血管、细胞膜通透性的示踪观察

作者分别用辣根过氧化物酶(HRP)、胶体硝酸镧及胶体金等作为示踪剂,光镜结合电镜,对陈株肾综合征出血热病毒实验性感染的BALB/c乳鼠血管及细胞膜的通透性进行了观察.结果发现,乳鼠感染HFRSV后其血管及细胞膜的通透性有明显的增加,而正常对照动物无变化,这对HFRS患者及自然感染HFRSV大鼠存在血管及细胞膜通透性的改变在动物实验中得到证实.结果提示,这种血管及细胞的通透性增加可能与组织细胞的病毒感染有关.

狂犬病分子流行病学的研究进展

狂犬病是一种危害严重的人兽共患病。以往主要用血清中和试验和单克隆抗体方法进行狂犬病病毒分型和流行病学调查。近年来，由于狂犬病在野生动物中发生流行以及狂犬病病毒分子生物学研究的迅速发展，单纯用常规方法已不能满足对狂犬病病毒分型及其流行病学调查和研究的需...

水痘—带状疱疹病毒分离及中药抗病毒作用

水痘和带状疱疹是临床常见的两种疾病,均由同一种病原体“水痘—带状疱疹病毒(VZV)”所致.水痘多见于儿童,初次感染可发生水痘,愈后可长期携带病毒,当机体免疫功能低下时,病毒又可重新激活,导致带状疱疹发生。这两种疾病一般情况下症状较轻,但严重者可引起脑炎、肺炎、宫内胎儿感染等严重疾病.

水痘-带状疱疹病毒的分离培养与鉴定

从 9例带状疱疹患者皮损的水疱液中分离出 2株病毒。经过典型细胞病变、电子显微镜、间接免疫荧光技术、酶免疫测定的鉴定 ,结果证实这 2株病毒是水痘

表达乙肝病毒YVDD变异株肝癌细胞模型的建立

目的:建立能稳定表达乙肝病毒(HBV)YVDD变异株的细胞模型,为研究HBV YVDD变异株的生物学特性和进行抗病毒药物筛选提供细胞模型。方法:以pcDNA3·1-HBV-YVDD为模板设计两对引物,扩增带不同酶切位点的HBV全基因,扩增产物纯化后,经酶切、连接,得到pcDNA3·1-HBV-YVDD重组体。采用脂质体转染技术,将pcDNA3·1-HBV-YVDD重组体转染体外培养的HepG2细胞。细胞培养上清液中HBsAg和HBeAg的检测用酶联免疫吸附法(ELISA)法,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HBV多聚酶的表达。结果:建立了HBV-YVDD变异株体外感染的细胞模型HepG2-2HBV-YVDD。该细胞模型能表达较高水平的HBsAg和HBeAg,并能检测到多聚酶的表达。结论:成功构建了能较稳定表达HBV-YVDD变异株的细胞模型。

一种独特的疱疹病毒—鸡传染性喉气管炎病毒

作者对鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)从以下4个方面进行了综述:①ILTV宿主的高度特异性;②病毒感染细胞的特殊途径;③病毒基因组内的基因容量和排列;④ILTV与其它疱疹病毒同源序列比较而推测出它们之间的进化关系。上述几方面的论述都表明ILTV具有区别于一般疱疹病毒的独特的特点。

人免疫缺陷病毒的受体与辅助受体

人免疫缺陷病毒（ＨｕｍａｎＩｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙＶｉｒｕｓ，ＨＩＶ）是引起艾滋病的病原。由于该病的病死率较高，目前尚没有被广泛接受的有效的医治方法，所以世界各国对艾滋病都十分重视。在感染ＨＩＶ时，ＨＩＶ首先与靶细胞上的受体（ｒｅｃｅｐｔｏｒ...

地高辛标记的RNA分子探针检测血清HCV

利用构建的ｐＧＰ１４４质粒，进行ＨＣＶ地高辛ＲＮＡ分子探针的标记，以该探针对ＨＣＶ临床血清样品及已知ＨＣＶ滴度的阳性血清１０倍逐级稀释样品的ＰＣＲ基因扩增产物进行ＤｏｔＢｌｏｔ分子杂交检测。结果显示，４０例ＨＣＶ病人血清中３９例阳性，假阴性２．５％（１／４０）；２０例正常人血清，ＨＣＶ病毒检测结果均为阴性；ＨＣＶ检测线性范围为１０１～４０４（ｃｏｐｙ／１００μｌ）之间。套式ＰＣＲ第二轮基因扩增对上述血清检测电泳结果为４１例阳性，其余１９例正常血清为阴性，假阳性５％（１／２０）。与套式ＰＣＲ结果相比较，ＤｏｔＢｌｏｔ的敏感性与之接近并具有特异性高，不易因污染而造成假阳性结果，以及它的线性范围宽等优点，可以作为较理想的病原体微生物在体液中浓度的定量检测方法。

陈株肾综合征出血热病毒感染乳鼠的病毒抗原体内示踪、超微结构观察

在血管及细胞膜通透性示踪的基础上,作者应用胶体金标记的抗肾综合征出血热病毒(HFRSV)多克隆和单克隆抗体,对陈株HFRSV感染的BALB/c乳鼠体内的抗原进行了体内示踪,光镜及电镜的观察.在对照动物中,示踪剂可清晰显示出组织内血管及网状内皮细胞系统,并出现于吞噬细胞的胞浆溶酶体中;在感染动物,胶体金标无关抗体示踪可显示出血管通透性的改变,但无明显组织定位特性;而金标HFRSV抗体可出现于各器官的实质细胞中伴有组织结构的改变,并定位于细胞胞浆内的游离核糖体、高尔基体、空泡内颗粒状结构及包涵体样结构.多数细胞结构破坏,并有异常结构的出现;但病毒颗粒、未成熟病毒颗粒及病毒包涵体只在少数细胞中观察到.结果说明,游离核糖体、高尔基体及细胞内泡状结构与病毒感染有关,病毒抗原阳性并非一定代表有完整的病毒结构.结果提示机体感染HFRSV后产生的抗体除可与细胞外抗原结合形成免疫复合物,造成组织的损伤外,还有透过损伤的细胞膜与细胞内抗原结合的可能性.

国外肝炎病毒研究的新进展

迄今,已报道有7种不同的肝炎病毒。除甲至戊型肝炎病毒外,己型肝炎病毒(HFV)尚未被确证,但从临床及流行病学研究,多数学者认为是经消化道传播的又一种病毒。近来Abbott公司报告,已从含GB因子(早年由Deinhardt用动物感染试验证明的一种经血源传播的非甲非乙型肝炎因子)的血浆中克隆出非乙非丙型肝炎病毒的全基因,已被民间称为庚型肝炎病毒(HGV)。最终还需经国际病毒分类与命名委员会确认。这一新发现的病毒为正链RNA病毒,有包膜,更类似黄病毒。与丙型肝炎病毒(HCV)基因同源性很低。据称已成功地表达了HGV的部分基因,其产物可与非乙非丙型输血后肝炎患者的血清发生反应。