马铃薯多酚氧化酶新成员StuPPO9基因的分离鉴定及其过表达烟草遗传转化

多酚氧化酶是普遍存在于植物、动物、细菌及真菌中的一类由核基因编码的具有氧化酚类底物成醌类作用的金属铜蛋白酶,也是褐变过程中的关键酶类。本研究通过对马铃薯基因组数据库检索,发现马铃薯多酚氧化酶包含StuPPO1到StuPPO9中9个基因成员,其中StuPPO5-9为预测基因。同时StuPPO9是生物和非生物因素诱导表达的基因,然而其序列和功能未被验证。本试验以“大西洋”马铃薯叶片为试材,分别提取总RNA和gDNA,对该基因进行分离鉴定,同时对其进行过表达载体构建和转基因烟草转化,为后续基因功能验证提供技术支持。试验结果表明,StuPPO9基因大小为1884 bp,与XM_006347021一致性为98.4%,该基因含有一个内含子结构,与其他成员不同,它位于2号染色体上。该基因启动子可能被生物和非生物因素诱导激活。利用农杆菌介导的基因过表达技术,将该基因转入烟草中,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测获得了阳性株系。