凝血因子Ⅷ C2结构域表达载体的构建及其在真核细胞NIH3T3中的表达

目的 :构建人凝血因子 F 中具有免疫活性的 C2结构域表达载体并通过真核宿主细胞表达出多肽。方法 :从 HEK2 93细胞提取总 RNA,经 RT- PCR扩增获得目的片段。将该片段与信号肽共同构建在同一表达载体 ,并在 NIH 3T3细胞中表达 ,Western blotting检测。结果 :经限制性酶切鉴定和测序分析证实 ,采用 RT- PCR成功地完成 F - C2 c DNA的扩增和表达载体的构建 ,重组载体转染进入 NIH 3T3细胞后 ,经检测培养上清中的蛋白成分证实 ,成功地表达出 F - C2结构域多肽。结论 :重组表达载体的构建是表达出分泌型 F C2多肽的一种可行的方法。