大鼠肝细胞生长因子与肝再生增强因子融合基因真核表达质粒的构建及鉴定

目的构建大鼠肝细胞生长因子（rHGF）与大鼠肝再生增强因子（rALR）融合基因的真核表达质粒并进行鉴定，为新的肝纤维化治疗方法奠定实验基础。方法分别以重组质粒pUC18-rHGF和pUC18-rALR为模板，进行PCR扩增，获得rHGF和rALR的基因片段；利用重叠延伸PCR方法将获得的基因片段通过一个连接序列（1inker）进行连接，构建融合基因rHGF—linker-rALR。将融合基因定向插入pcDNA3．1真核表达质粒的KpnI和XbaI酶切位点之间，构建重组真核表达质粒pcDNA3．1rHGF—linker—rALR，并进行双酶切及测序鉴定。结果rHGF和rALR的PCR扩增产物电泳后分别观察到2200bp和400bp的条带，与理论值相符。重叠延伸PCR获得的融合基因产物电泳后观察到2600bp的条带，与预期值一致。重组真核表达质粒pcDNA3．1-rHGFlinker-rAI。R经双酶切，电泳后观察到2600bp和5400bp的两条DNA条带，与预期值相符，测序鉴定结果表明序列正确。结论成功构建了rHGF与rALR融合基因的真核表达质粒，为肝纤维化的基因治疗奠定了实验基础。