促酰化蛋白诱导的前脂肪细胞分化过程中转录因子表达的时序性研究

目的观察促酰化蛋白(ASP)诱导3T3-L1前脂肪细胞的分化过程,转录因子PPARγ、C/EBPδ、C/EBPαmRNA表达的强度及时序性。方法以3T3-L1前脂肪细胞为实验对象,用ASP代替经典激素鸡尾酒诱导刺激中的胰岛素,即促酰化蛋白、1-甲基-3-异丁基黄嘌呤和地塞米松(ASP+IBMX+DEX)诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,分别在诱导分化1d、2d、4d、6d、8d收获细胞,采用RT-PCR法检测ASP诱导3T3-L1前脂肪细胞分化过程中转录因子PPARγ、C/EBPδ、C/EBPαmRNA表达的情况。结果PPARγmRNA在诱导分化1d时有低水平表达,在诱导分化过程中表达逐步升高,在终末分化阶段仍保持高水平表达。C/EBPδmRNA在诱导分化1d时有中等水平表达,在诱导分化2d时表达水平最高,诱导分化4d时表达明显减少,在诱导分化6d和8d,检测不到C/EBPδmRNA的表达。C/EBPαmRNA在诱导分化1d仅有低水平表达,在诱导分化过程中表达逐步升高,在终末分化阶段仍保持高水平表达。IBMX+DEX诱导前脂肪细胞分化过程中,PPARγ、C/EBPδ和C/EBPαmRNA分化早期也有一定升高,但明显低于ASP诱导的转录因子的表达。结论ASP对转录因子C/EBPδ、C/EBPα和PPARγ表达的时序性影响,可能是ASP诱导前脂肪细胞分化的重要分子机制之一。

促酰化蛋白诱导前脂肪细胞分化过程中DGAT、LPL、adipsin mRNA表达

目的观察促酰化蛋白(acylation sti mulating protein,ASP)诱导3T3-L1前脂肪细胞的分化过程中,脂肪特异性的功能酶脂蛋白脂酶(LPL)、二酰基甘油转酰酶(DGAT)以及脂肪细胞特异性功能蛋白adipsin表达的时序性和强度。方法以3T3-L1前脂肪细胞为实验对象,用ASP代替经典激素鸡尾酒诱导刺激中的胰岛素,诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,分别在诱导分化1、2、4、6、8d收获细胞,采用RT-PCR法检测分化过程中LPL、DGAT和adipsin的mRNA表达情况。结果在ASP诱导3T3-L1前脂肪细胞分化过程中,LPL、DGAT、adipsin mRNA表达逐渐升高,其中LPL mRNA表达最早,在分化1d时就有低水平的表达,分化2d时出现DGAT mRNA的表达,并随着脂肪细胞的进一步分化成熟,LPL和DGAT mRNA表达水平逐步升高,持续到分化终末期;adipsin mRNA表达出现最晚,在分化4d时才有表达,随后其表达水平急剧升高,持续到分化终末期。结论ASP诱导3T3-L1前脂肪细胞分化过程中,按照一定的时序性依次诱导脂肪特异性的功能酶LPL、DGAT和功能蛋白adipsin的mRNA表达,是脂肪细胞生物学功能成熟的重要物质基础,同时也是ASP诱导前脂肪细胞分化的分子机制之一。

诱导SW872前脂肪细胞分化的最优方法探讨

目的探讨诱导SW872脂肪细胞分化的最优方法。方法根据不同的分化诱导刺激分为6组:①对照组:无分化刺激,仅有DMEM/F12培养基;②胰岛素组:含2 mg/L Insulin;③1-甲基3-异丁基黄嘌呤组:含0.5 mmol/L IBMX;④促酰化蛋白组:含50 mg/L ASP;⑤激素鸡尾酒(胰岛素+1-甲基3-异丁基黄嘌呤+地塞米松组:含2 mg/L insulin+0.5 mmol/L IBMX+1.0μmol/L DEX;⑥油酸(oleic acid)组:含0.2 mg/L oleic acid。通过形态学观察、油红染色、测定细胞甘油三酯总量的方法。结果多组分化刺激中,油酸组刺激可在24 h内诱导SW872细胞分化,而且分化均匀,分化率高,分化后形成的脂肪细胞形态典型;而且油酸组促进SW872细胞分化过程中细胞内甘油三酯的积累。结论油酸是诱导SW872细胞分化的最佳方法,该方法的建立和统一,为进一步利用SW872细胞进行脂代谢、脂肪细胞功能的研究奠定了基础。

促酰化蛋白诱导3T3-F442A前脂肪细胞分化的机制

目的初步探讨促酰化蛋白诱导前脂肪细胞分化的作用及其可能机制。方法以3T3-F442A前脂肪细胞为研究对象,分为促酰化蛋白组(促酰化蛋白诱导分化)和对照组(无诱导分化剂)。在不同的分化时间点比较两组细胞的形态学变化和分化率;采用3H-油酸掺入法测定脂肪细胞甘油三酯合成率,化学比色法测定细胞中甘油三酯的总量。在诱导分化第0、1、2、4和6天收获细胞,采用逆转录聚合酶链反应检测转录因子过氧化体增殖物激活型受体γ、C/EBPδ和C/EBPαmRNA表达情况。结果促酰化蛋白可诱导3T3-F442A前脂肪细胞向成熟脂肪细胞的形态转变,且分化率较高,与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。促酰化蛋白促进3T3-F442A前脂肪细胞的甘油三酯合成,并增加细胞甘油三酯的总量,均明显高于对照组(P<0.05)。转录因子C/EBPδ、C/EBPα和过氧化体增殖物激活型受体γmRNA的表达呈现一定的时间顺序,其中C/EBPδmRNA在3T3-F442A前脂肪细胞分化早期中表达水平急剧升高,然后又迅速下降至很低;而C/EBPαmRNA和过氧化体增殖物激活型受体γmRNA的表达随着分化的进行而逐渐升高,且在分化晚期始终保持高水平的表达。结论新型脂源性激素促酰化蛋白具有诱导前脂肪细胞分化的生物学作用,转录因子C/EBPδ、C/EBPα和过氧化体增殖物激活型受体γmRNA的时序性表达,可能是促酰化蛋白诱导3T3-F442A前脂肪细胞分化的重要分子机制之一。