大鼠心肌多胺代谢限速酶ODC、SSAT活性分析

目的建立大鼠心肌多胺代谢限速酶鸟氨酸脱羧酶(ODC)及精脒/精胺乙酰转移酶(SSAT)活性分析方法。方法以Langendorff离体灌流心肌为实验材料,制备心肌组织匀浆;分别以dl[114C]Ornithine及[114C]acetylCoenzymeA为底物,以液体闪烁计数仪记录生成的14CO2及[14C]acetylspermidine的放射活度,并以其代表ODC,SSAT的活性;计算大鼠心肌ODC、SSAT的酶促反应动力学参数,筛选出适宜的底物浓度;同时观察一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)对酶活性的影响。结果①大鼠心肌ODC、SSAT基础活性分别为:(9.67±3.09)nmol·mg-1Pro·h-1;(3.59±0.91)nmol·mg-1Pro·min-1。②ODC催化LOrnithine的酶促反应动力学参数Km=(54.95±8.14)μmol·L-1;Vmax=(2.364±0.37)nmol·mg-1·h-1;SSAT催化AcetylCoenzymeA的酶促反应动力学参数Km=(12.87±1.88)μmol·L-1;Vmax=(0.50±0.07)nmol·mg-1·min-1。③大鼠心肌ODC、SSAT活性检测的底物浓度分别为:90μmol·L-1(18.5kBq)DL[114C]Ornithine及36μmol·L-1(2.96kBq)[114C]acetylCoA。④SNP呈浓度依赖性地抑制ODC的活性、诱导SSAT的活性。结论建立了大鼠心肌多胺代谢限速酶鸟氨酸脱羧酶(ODC)及精脒/精胺乙酰转移酶(SSAT)活性的分析方法,该方法简便易行;根据Km值确定测定大鼠心肌ODC及SSAT?

纳米级精度柔性机器人的设计方法及实现研究

从材料、几何结构、柔性铰链、驱动器、运动与负载及加工等几个方面总结了面向精密作业的柔性机器人设计准则。对柔性机器人的设计方法进行了探讨。以精密作业中的具体应用为例 ,依据这些设计方法与准则 ,从机械本体和驱动器控制 2个方面详细描述了可实现纳米级精度的 3自由度柔性机器人样机设计的具体实现过程 。

多胺对大鼠缺氧-复氧心肌细胞内钙的影响

目的:观察外源性低浓度多胺对大鼠缺氧-复氧心肌细胞钙超载的影响。方法:酶解分离大鼠心室 肌细胞,用正常氧合Tyrode液灌流8 min,换为缺氧液灌流32 min,再转换为正常氧合Tyrode液灌流8 min,复制心肌 缺氧-复氧模型。分别在缺氧前给予精胺,缺氧-复氧后给予精胺、精脒、腐胺。应用激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM)连续观察细胞内钙荧光强度的动态变化。结果:精胺(1 mol/L)对正常静息状态下大鼠心室肌[Ca2+]i无影 响。缺氧前给予精胺,可取消复氧引起的心肌[Ca2+]i增高;缺氧-复氧后给予精胺、精脒、腐胺对缺氧-复氧引起 [Ca2+]i升高也有不同程度的降低作用,其中以精胺的作用最强。复氧后给予精胺降低缺氧-复氧[Ca2+]i升高的 作用小于缺氧前给予。结论:缺氧前给予精胺可拮抗缺氧-复氧心肌细胞钙超载发生;复氧后给予精胺可使缺氧- 复氧心肌细胞钙超载减轻,但其作用力度不如缺氧前给药。多胺拮抗缺氧-复氧心肌细胞钙超载的作用以精胺> 精脒>腐胺的顺序递减。

非饱和土的非线性模型及其应用

提出了一个较完整的非饱和土的非线性模型。该模型涉及土的变形和水量变化两个方面， 共包含１３ 个参数。测定全部参数只需用两种三轴试验。应用所提模型预估三轴不排水试验中的吸力变化，理论计算与试验结果比较接近。

棕榈油甲酯制备生物润滑油三羟甲基丙烷脂肪酸三酯的工艺研究

以棕榈油脂肪酸甲酯(fatty acid methyl ester,FAME)和三羟甲基丙烷(trimethylolpropane,TMP)为原料,经酯交换反应制备可用作生物润滑油基础油的三羟甲基丙烷脂肪酸三酯(trimethylolpropane fatty acidtiester,TFATE)。通过比较FAME的转化率和TFATE在反应混合物中的含量,探讨了催化剂种类、催化剂用量、反应时间、反应温度、反应物物质的量比及真空度对反应的影响。最佳合成条件为:催化剂为三羟甲基丙烷钾(Trimethylolpropane mono potassium salt,TMP-K),催化剂添加量为TMP-K与TMP物质的量比0.02∶1,反应时间1 h,反应温度128℃,FAME与TMP物质的量比4∶1,反应压力为300 Pa,在此条件下,脂肪酸甲酯的转化率为91.78%,反应混合物中TFATE质量分数为90.11%。经分子蒸馏分离纯化后终产品TFATE质量分数为97.02%。

RIZ1表达对髓性白血病细胞株凋亡的影响

背景与目的RIZ1是近年来发现的抑癌基因,在多种实体瘤如乳腺癌、肝癌和胃癌中RIZI均表达下降或无表达。本研究探讨了RIZ1转录对髓性白血病细胞凋亡的作用。方法采用RT-PCR法检测5种髓性白血病细胞株即AML193、KG-1、KG-1a、K562、Ery-1中RIZ1mRNA转录状况。将含RIZ1全长cDNA的重组质粒pRIZ1RH转入该基因表达缺乏的细胞株中,以制备强制性基因表达细胞模型。细胞株导入单纯载体(pcDNA3.1)作为对照。于基因导入后24h应用FCM细胞凋亡率。结果该5种细胞株中,AML193与K562呈RIZ1mRNA无转录或低转录,但导入pRIZ1RH24h后则出现转录或转录明显增加,且测得该两细胞株凋亡率分别为(22.7±0.7)%、(28.6±1.2)%,均高于相应对照组[分别为(11.7±1.6)%、(9.0±0.8)%],差异均有显著性(P<0.01)。结论RIZ1的转录能够诱导AML193和K562髓性白血病细胞株凋亡,提示该基因可作为其失活的髓性白血病患者之基因疗法的重要靶分子。

HPLC外标法测定亚麻籽油中4种环肽含量的研究

以环肽标准样品定性,采用外标法定量,建立了HPLC测定亚麻籽油中环肽A、环肽C、环肽D和环肽E的方法。采用固相萃取法提取亚麻籽油中的环肽,用Diamonsil C18色谱柱,以乙腈和水为流动相梯度洗脱,柱温35℃,二极管阵列检测器在波长214 nm处进行检测,30 min内完成对4种环肽的分离检测。结果表明：该方法的线性范围为10-160μg/m L,相关系数大于等于0.999 5;环肽A、环肽C、环肽D、环肽E的平均加标回收率分别为94.62%、92.25%、84.07%和100.14%。用该方法测定不同工艺制取的亚麻籽油中环肽的含量,发现未经过精炼的亚麻籽油中环肽含量高于市售亚麻籽油的,其中,冷榨工艺比热榨工艺更能保留亚麻籽油中的环肽。

高寒地区农牧交错带土壤侵蚀研究

利用土壤中铯的放射强度之变化,对甘肃省高寒地区农牧交错带不同退化草原和不同开垦年限的耕种土壤的侵蚀程度进行了研究。土壤样品取自海拔2600～3000m的7个县镇18个地点,土壤为黑钙土。研究发现,中度退化草原(MDP)和重度退化草原(HDP)中的137Cs放射强度分别比轻度退化草原(LDP)下降12%和46%。草原土壤开垦后,137Cs放射强度明显下降,开垦8年、16年、41年后,137Cs的放射强度分别只有LDP的41%,35%和33%。研究还发现,如果底土砂粒含量高于表层,用耕层砂粒含量的变化而估算土壤侵蚀程度成为可能。草原开垦后,随土壤侵蚀的增加,土壤有机质明显下降,开垦8年、16年、41年后土壤有机碳分别下降25%,39%,55%。土壤侵蚀和有机质矿化是有机碳下降的主要原因。

气相色谱法分析生物润滑油三羟甲基丙烷脂肪酸三酯的研究

建立了高温气相色谱快速分析棕榈油脂肪酸甲酯(fatty acid methyl ester,FAME)酯交换反应样品中三羟甲基丙烷脂肪酸三酯(trimethylolpropane fatty acid trimester,TFATE)的方法。采用DB-1ht型毛细管柱(15 m×250μm×0.1μm),柱温条件为:起始温度50℃,以50℃/min升至220℃,以30℃/min升至290℃,以40℃/min升至330℃保留2 min,以30℃/min升至370℃保留3 min;载气为高纯氮气,进样口380℃,FID检测器400℃,分流比20∶1,进样量为1μL。制备了TFATE的标准样品,并验证了标准样品的纯度,建立了TFATE的标准曲线,在质量浓度范围0.5～20.0 mg/mL内峰面积与被测物质量浓度线性关系良好。加样回收试验表明,平均加样回收率在96.64%～98.06%之间,RSD在0.20%～0.45%之间,该方法有较好的精密度和重复性。

奥氮平对淀粉样β蛋白_(25-35)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨奥氮平对淀粉样β蛋白25-35（Aβ25-35）诱导的PC12细胞凋亡的保护作用机制。方法以Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡，采用MTT比色分析测定细胞存活率，应用Western blot检测Aβ25-35以及奥氮平对PC12细胞Bax、Caspase-3表达的影响，结果10^-14～10^-5mol／L的Aβ25-35减低PC12细胞存活率，50μmol／L及100μmol／I。奥氮平预处理24h可提高PC12细胞存活率，相同浓度Aβ25-35奥氮平预处理组与非处理组比较差异显著（P〈0．05）；0．01、2、20μmol／L Aβ25-35处理的PC12细胞Bax表达增加，50μmol／L奥氮平预处理使0．01μmol／L和20μmol／L Aβ25-35诱导的PC12细胞Bax的表达减低（P〈O．05）；2μmol／L及20μmol／L Aβ25-35处理的PC12细胞Caspase-3的表达增高，5μmol／L奥氮平预处理能抑制其表达升高，与非预处理比较差异显著（P〈O．05）。结论奥氮平可对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用，其机制可能与抑制Bax、Caspase-3的表达有关。

IGF-2基因印迹状态与临床病理因素的关系

目的:探讨胃癌组织中,IGF-2(insulin-like growth factors2)基因的印迹状态及其与各临床病理因素间的关系。方法:应用PCR、RT-PCR及限制性内切酶(ApaⅠ)酶切等方法,检测33例胃癌组织中IGF-2基因的印迹状态,分析IGF-2基因印迹丧失(loss of imprinting,LOI)及其与胃癌各临床病理因素之间的关系。结果:胃癌组织中,IGF-2基因印迹的丧失率为48.5%(16/33),癌近旁黏膜的IGF-2基因印迹丧失率为21%(7/33),癌远旁黏膜的丧失率为12.1%(4/33)。同时,在有淋巴结转移的胃癌病例中IGF-2基因印迹丧失率(60.9%)明显高于无淋巴结转移者(20.0%);TNM分期Ⅲ、Ⅳ期的胃癌IGF-2基因印迹丧失率(60.0%)明显高于Ⅰ、Ⅱ期者(12.5%)(P均<0.05)。结论:IGF-2基因印迹丧失是贯穿于胃癌发生、发展全过程的表观遗传异常,其与胃癌的临床、病理分期及病人预后相关。

内源性气体硫化氢在中枢神经系统中的作用

内源性硫化氢(H2S)可以刺激神经细胞cAMP水平增加,提高NMDA受体介导的突触后兴奋性电位,提高诱导海马长时程增强。H2S不仅具有神经调节剂的功能,还有神经保护剂的功能。H2S自身并不能将细胞从氧化应激中解救出来,但是它能通过提高胞内有效的抗氧化剂——还原型谷胱苷肽的含量而起到保护神经元的作用。对H2S的研究刚刚起步,对其在神经系统中的作用机制开展研究将有助于了解其在神经元保护方面所起的作用。

含RIZ1 PR结构域融合蛋白的原核表达、提纯与功能分析

目的:表达与提纯R IZ1第1个至第200个氨基酸含PR结构域的活性GST融合蛋白质(GST-PR200融合蛋白)。方法:设计引物以含人R IZ1 cDNA全序列的pR IZ1 RH质粒为模板克隆获得目的基因片段,测序核对后经EcoRⅠ与XhoⅠ双酶切,以正确阅读框架插入相同酶切的pGEX-6P-3中,经转染与IPTG诱导表达筛选到阳性大肠杆菌克隆并提纯该融合蛋白质。分别采用SDS-PAGE蛋白电泳法、质谱分析法及组蛋白甲基化转移酶(HMT)测定法鉴定其性质与功能。结果:获得的纯化融合蛋白质相对分子质量约为47 000,其CPM值明显高于对照组(P<0.01),且与作用时间呈正相关。结论:所构建的融合蛋白原核表达系统能有效表达活性GST-PR200融合蛋白,可供大量提取作进一步研究。

缓激肽在大鼠尾动脉缩血管作用机制探讨

目的 探讨缓激肽 ( BK)对大鼠尾动脉的缩血管作用机制。方法 对离体正常大鼠尾动脉用 Biopac系统进行测定 ,观察 BK对血管张力的影响 ;分离平滑肌细胞用膜片钳记录钙通道电流 ,观察BK对单个平滑肌细胞的影响。结果 BK可引起大鼠尾动脉收缩且呈量效关系 ,细胞内 Ca2 +和细胞外Ca2 +在其中发挥了重要作用 ,且不受内皮细胞的影响 ;KCl引起细胞膜去极化后加强了 BK的收缩作用。结论 BK在大鼠尾动脉的缩血管作用是细胞内钙和细胞外钙依赖性的。

一个妇女撑起半边天的合作社

在夏家合作社中,女社员和男社员一样,与入社前相比,不仅经济收入水平提高、实用技术技能改善,而且眼界拓宽、文化素质提高、社会交往能力提高、自信心增强。

乙醇萃取-HPLC法快速分析亚麻籽油中四种环肽研究

本文旨在利用乙醇快速富集亚麻籽油环肽,以期替代柱层析富集环肽法。在常温下,95%乙醇与亚麻籽油以料液比(g/mL)为5∶8震荡混合5 min,随后,将其在6 000 r/min下离心5 min,重复富集3次,收集上层清液并在40℃旋蒸,除去溶剂,用甲醇定容,根据HPLC外标法建立标准曲线,对环肽A、环肽C、环肽D和环肽E进行定量分析。通过加样回收试验可得,环肽C、环肽E、环肽D和环肽A的标准样品加样回收率分别为:99.5%、104.6%、109.7%、97.6%,相对标准偏差RSD分别为:1.4%,2.0%,2.5%和1.4%,证明了乙醇富集亚麻籽油环肽的方法准确可靠。此外,乙醇萃取法与传统的正相SPE硅胶柱分离法相比,操作简单,溶剂用量节省,富集效果更好。

二阶线性微分系统的振动性

本文讨论二阶线性微分系统的振动性,利用具体的泛函λ_n和tr建立了系统(1)振动的比较定理;利用正线性泛函给出了系统(3)的预备解振动的充分条件,改进了若干已有的结论。

氮硫对小麦产量及养分吸收的影响

盆栽试验结果表明，在低硫和低氮土壤上，单独施用氮和硫，对小麦的干物质产量没有影响，配合施用显著地增加于物质产量，也显著提高植株氮硫含量和吸收量。获得小麦最大干物质产量的氮硫适宜用量分别为200μg/g和20~40μg/g，再增加用量导致干物质产量下降。最大干物质产量的土壤适宜N／S为4.0－14.0。

田间条件下Ⅱ型猪圆环病毒与协同感染

Ⅱ型猪圆环病毒(Porcinecircovirus-2,PCV-2)是引起断奶仔猪多系统耗损综合征(PMWS)的必要病原;然而,多种协同因素,包括传染性因子被认为是该病的充分表现所必需的。猪细小病毒(PPV)被发现于首次在悉生猪实验性复制PWMS时所用的接种物中。在现场条件下和实验条件下进行的回顾性研究和前瞻性研究均证明,PCV-2能够与PPV协同作用而增强PMWS的严重程度。现已证明,PCV-2在猪呼吸道疾病复症(PRDC)中起着某种作用。肺脏中与PCV-2有协同作用的其它传染性因子包括猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪流感病毒(SIV)和猪肺炎支原体。怀孕母猪感染的PPV、PRRSV或猪脑心肌炎病毒可能与受PCV-2感染的胎儿发生相互作用。猪感染了PCV-2后的肝脏病变可因并发感染猪戊型肝炎或伪狂犬病毒等其它病原体而加重。还需要进行更多的研究以便确定在与PCV-2有关的临床综合征发病中PCV-2与其它病原体之间相互作用的机理。

大鼠心肌钙敏感受体蛋白的表达及其与心肌细胞凋亡的关系

目的观察大鼠心肌组织和心肌细胞钙敏感受体(CaSR)蛋白表达与心肌细胞凋亡及相关信号传导途径的关系。方法Western blot检测心肌CaSR蛋白和ERK1/2、BCl2及Caspase3的表达。免疫荧光和流式细胞仪观察细胞凋亡。结果心肌组织和心肌细胞表面可检测到CaSR蛋白的表达。CaSR激动剂氯化钆(GdCl3)能促进心肌细胞凋亡,并使ERK1/2的磷酸化增加、BCl2表达及Caspase3活化。加入酪氨酸蛋白激酶阻断剂PD98059后,心肌细胞凋亡率增加,ERK1/2磷酸化降低,BCl2表达消失,Caspase3活化增强。结论CaSR蛋白在心肌细胞膜表面表达,其激活通过Caspase 3活化,促进心肌细胞凋亡。同时亦可激活酪氨酸蛋白激酶途径。