组织蛋白酶L在动脉粥样硬化病变中的表达以及对巨噬细胞脂质蓄积的影响

目的观察组织蛋白酶L在动脉粥样硬化病变中的表达以及对巨噬细胞脂质蓄积的影响。方法颈总动脉套环并饲以高脂饮食建立兔颈总动脉粥样硬化模型,免疫组织化学方法检测斑块内组织蛋白酶L的表达。氧化型低密度脂蛋白孵育RAW264.7巨噬细胞24 h,逆转录聚合酶链反应、Western blot以及荧光分光光度法检测组织蛋白酶L表达和活性。组织蛋白酶L抑制剂预处理巨噬细胞,油红O染色以及高效液相色谱法观察细胞内脂质蓄积。结果正常血管中不表达组织蛋白酶L,斑块内组织蛋白酶L高表达。巨噬细胞经不同浓度氧化型低密度脂蛋白孵育24 h后,组织蛋白酶L mRNA的表达量在各组间无明显差异(P>0.05),但蛋白表达量以及活性明显增加(P<0.05)。组织蛋白酶L抑制剂剂量依赖性地抑制巨噬细胞内脂质积蓄。结论组织蛋白酶L在动脉粥样硬化斑块中高表达并参与巨噬细胞脂质代谢。

生理层流剪切应力诱导血管内皮细胞自噬影响血管内皮细胞功能

目的探讨生理层流剪切应力对血管内皮细胞自噬以及自噬对血管内皮细胞功能的影响。方法采用平行平板流动腔装置灌流系统，0、15dye／cm。灌注血管内皮细胞1h。RT—PCR及Westernblot检测自噬相关基因（LC3、Beclin-1）及血管内皮细胞功能相关基因（eNOS、ET-1）mRNA和蛋白表达。在此基础上，分别用3-MA（自噬抑制剂）、雷帕霉素（自噬激动剂）处理。RT．PCR及Westernblot检测血管内皮细胞eNOS、ET-1mRNA及蛋白表达。结果RT—PCR及Westernblot结果表明，与0dye／cm。相比，15dye／cm。剪切应力处理1h后，Beclin-1及LC3mRNA及蛋白均表达上调；血管内皮细胞eNOS蛋白表达量增加，而ET-1表达量降低；当加入自噬激动剂雷帕霉素后，血管内皮细胞eNOS的mRNA及蛋白较处理前表达进一步增加，而ET．1表达进一步降低；加入自噬抑制剂3-MA后，eNOS表达降低，ET一1的mRNA和蛋白较处理前表达升高。结论生理层流剪切应力上调血管内皮细胞自噬，影响血管内皮细胞功能。

心肌缺血后处理保护机制的研究进展

缺血后处理是指长时间缺血后，在再灌注开始时，通过反复短暂间断的再灌注／缺血而诱导的心肌保护现象，能减轻心肌缺血再灌注损伤，是最近提出的和缺血预处理一样具有心肌保护作用的治疗策略。因其能在缺血后再灌注时实施，故具有重要的基础研究价值和良好的临床应用前景。

氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞TET2表达及自噬的影响

目的观察氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞自噬的影响及其调节机制。方法氧化型低密度脂蛋白孵育人脐静脉内皮细胞24 h,RT-PCR检测TET2 mRNA表达,Western blot检测TET2以及自噬标记物Beclin 1、LC3的表达。TET2 siRNA转染人脐静脉内皮细胞,Western blot检测Beclin 1、LC3的表达。结果人脐静脉内皮细胞经不同浓度氧化型低密度脂蛋白孵育24 h后,浓度依赖性地下调TET2 mRNA以及蛋白的表达(P<0.05),并且下调Beclin 1表达以及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值。TET2 siRNA转染人脐静脉内皮细胞后,Beclin 1表达以及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值明显降低。结论氧化型低密度脂蛋白促进人脐静脉内皮细胞自噬,可能与下调TET2表达相关。