DNA甲基转移酶3B4过表达对293A细胞增殖影响及其机制的探讨

背景与目的:DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)3B有近40种异构体,它们的表达有组织和疾病的特异性,细胞中这些异构体的功能尚不清楚。本研究旨在探讨外源性DNMT3B4基因过表达对人胚肾细胞株293A增殖的影响及其机制。方法:将携带DNMT3B4基因的质粒pCMV-DNMT3B4及空质粒pCMV-2B转染293A细胞(293A-vector)并形成稳定表达细胞系,培养300 d后用MTT法检测细胞的增殖;流式细胞仪检测细胞的周期分布;real-time PCR蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中p21表达情况;甲基化特异PCR(MS-PCR)检测p21基因启动子区甲基化状态。结果:在接种于96孔板的第4天,2株过表达DNMT3B4的293A细胞(293A-DNMT3B4-1和293A-DNMT3B4-2)吸光度(A)值分别是293A-vector细胞的(58.92±3.47)%和(68.82±5.64)%,过表达DNMT3B4抑制细胞增殖,差异有统计学意义(P<0.05);293A-DNMT3B4-1和293A-DNMT3B4-2的S期细胞比例分别为(35.88±2.00)%和(37.00±1.79)%,293A-vector细胞比例为(40.44±0.91)%,过表达DNMT3B4降低S期细胞比例,差异有统计学意义(P<0.05)。过表达DNMT3B4增加p21的表达,但不改变p21基因启动子区甲基化状态。结论:DNMT3B4基因过表达可抑制293A细胞增殖并增加p21表达。

腺瘤性大肠息肉中DNA甲基转移酶mRNA的表达改变

目的研究三种DNA甲基转移酶(DNA methyltranferase,DNMT)在腺瘤性大肠息肉发生发展中的作用。方法从7例腺瘤性大肠息肉和7例正常大肠粘膜组织中提取RNA后反转录成cDNA,beta-actin作为内参,利用real-time PCR技术对三种DNMT的表达情况进行。结果腺瘤性大肠息肉和正常粘膜组织中DNMT1 mRNA对β-actin mRNA的相对丰度值分别是1.02×10-3±4.87×10-4和8.67×10-4±2.18×10-4,大肠息肉组织中与正常粘膜组织中DNMT1表达无有显著性差异(P>0.05);腺瘤性大肠息肉和正常粘膜组织中DNMT3A mRNA对β-actin mRNA的相对丰度值分别是3.26×10-2±4.96×10-3和3.00×10-2±5.20×10-4,它们之间无显著性差异(P>0.05);腺瘤性大肠息肉和正常粘膜组织中DNMT3B mRNA对β-actin mRNA的相对丰度值分别是2.95×10-1±0.60×10-2和8.78×10-2±0.13×10-2,大肠息肉组织中与正常粘膜组织中DNMT3B表达有显著差异(P<0.05)。结论 DNMT3B可能在腺瘤性大肠息肉的发生中起到了重要作用。

肾细胞癌患者组织中RASSF1A、hMLH1及ALU甲基化水平的分析

目的探讨错配修复基因(h MLH1)、RAS相关区域家族1A基因(RASSF1A)启动子区甲基化以及ALU基因甲基化水平与肾细胞癌(肾癌)的关系。方法巢式甲基化特异性PCR(n MSP)检测15例肾癌组织及其相应癌旁组织中h MLH1、RASSF1A基因启动子区的甲基化状态,联合亚硫酸氢钠限制酶分析方法(COBRA)分析ALU基因甲基化水平。结果 h MLH1基因在肾癌组织中的甲基化率(0.41±0.18)%高于癌旁组织(0.32±0.13)%,差异有统计学意义(t=2.52,P<0.05);ALU基因在癌组织中的甲基化率(0.11±0.04)%低于癌旁组织(0.12±0.03)%,差异有统计学意义(t=3.82,P<0.05)。而RASSF1A基因在肾癌组织和癌旁组织中的甲基化率分别为(0.75±0.11)%和(0.69±0.12)%,差异无统计学意义(t=1.35,P>0.05)。结论 h MLH1基因启动子区甲基化以及ALU基因甲基化可能与肾癌的发病有关,RASSF1A基因启动子区甲基化与肾癌发病无关。