“暴露-反应-机制”三联研究模式学术思想及其中医药领域应用

以药效为核心的中药有效物质基础与机制研究是中药现代化研究的重点问题,药代动力学、药理学、分子生物学等不同学科交叉研究的不足使该问题的解决受到一定的限制,中药化学、药理学研究的孤立成果不利于中药及其复方的现代化系统研究进程。本文在前期工作基础上,从学术思想创新及科研方法实践角度,提出了"暴露-反应-机制"三联研究模式,并就其形成的学术背景、科学概念及研究内容等方面进行了论述,可望为中药的效/毒作用物质基础、作用机制研究提供创新性学术思想,为中医药现代化研究提供创新性研究方法。

北京地区实验树鼩的饲养管理方法

树鼩作为低等灵长类动物,在生物学研究中的价值日益引起研究者重视,将其作为实验动物的实验需求越来越多。作为南方亚热带动物,树鼩如何适应北方地区的生活是北方地区将其用作实验动物的前提。本实验室探索出适宜树鼩居住的饲养笼具,确定了饲养环境温度、湿度、光照时间、噪声及通风等条件,制定了规范化的卫生管理标准,建立了北京地区长期人工培育树鼩的饲养管理方法,为今后利用树鼩进行中医药病证结合动物模型的研究奠定了基础。

流式细胞术检测细胞周期实验样品制备条件的研究

目的 优化细胞周期测定实验样品制备条件.方法 T47D细胞株经乙醇固定后,加入RNase A消化细胞内RNA,加入碘化丙啶（PI）标记DNA,用流式细胞仪检测细胞内DNA含量,ModFit软件分析细胞周期.采用此方法研究样品制备过程中固定时间（30 min,4 h,24 h,48 h,7天和14天）和RNase A对细胞周期检测结果的影响.结果 固定不同时间,G0/G1期、S期和G2/M期细胞比例变化范围分别为（57.79±0.90）%～（60.58±1.90）%,（20.16±1.55）%～（24.07±1.04）%和（17.32±0.62）%～（19.45±0.86）%,各组间差异无统计学意义（P＞0.05）;变异系数的变化范围为（5.77±0.24）%～（7.72±0.28）%,各组间差异无统计学意义（P＞0.05）;无RNase A组与有RNase A组相比,G0/G1期的细胞比例差异无统计学意义（t=1.59,P＞0.05）,S期、G2/M期的细胞比例和变异系数的差异有统计学意义（P值均小于0.01,t值分别为-9.46,12.78和-7.99）,S期升高,G2/M期降低,变异系数增大.结论 ①细胞周期测定实验样品处理过程中,细胞固定30 min后即可上机测试,且细胞固定后的保存时间可长达两周;②RNase A对细胞周期测定实验结果影响较大.

论中医对“骨痿”的认识

1 骨痿病名 骨痿病名早在〈黄帝内经〉中即已明确提出,如〈素问·痿论篇〉[1]记载：＂肾气热,则腰脊不举,骨枯而髓减,发为骨痿.……故〈下经〉曰：肉痿者,得之湿地也.有所远行劳倦,逢大热而渴,渴则阳气内伐,内伐则热舍于肾,肾者水脏也,今水不胜火,则骨枯而髓虚,故足不任身,发为骨痿.＂

“中医体质—抗衰老”产业化的探讨

人口老龄化是中国当前面临的一大问题,引起社会的普遍关注。抗衰老产业发展至今,已取得诸多成效,起到了延长生命、改善生命质量的作用。但在我国,抗衰老产业涉及领域小,产品和服务质量良莠不齐。本文从未来医学的发展趋势、国家的需求以及老龄化的现状三方面介绍抗衰老产业的形势,并对此现状做了一定的分析,针对当前的问题给出了应对的方案。指出中医体质经过近40年的发展,得到了国家、学术界以及民众的认可,在国家公共卫生医疗体系中扮演着越来越重要的作用,本文从抗衰老食品及保健食品、中医体质老年养生知识普及、健康管理、培养中医体质调理人才四方面,对中医体质抗衰老健康产业做出了展望。中医体质在抗衰老产业中可以填补理论的空白,创新产业模式,形成核心竞争力,大有可为。

2型糖尿病胰岛素抵抗发生机制的研究进展

目前,随着人们的生活、饮食和工作习惯的改变及科学技术的发展,尤其是电脑在工作与生活中的普及,使得人们逐步形成久坐的习惯,同时高热量食物的无限制摄取,人们罹患肥胖、2型糖尿病等代谢紊乱性疾病的可能性大大增加,使肥胖病发率逐年攀升,中医认为“饮食自倍,脾胃乃伤”,多食肥甘厚腻易致脾胃湿困,多静少动,湿聚成痰,延误治疗,而生痰湿。因此在脾虚的基础上,内外湿邪合而为病,发为消渴。

局部注射布比卡因建立大鼠骨骼肌损伤模型的组织形态学评价

背景:布比卡因神经毒性、心脏毒性的报道屡见不鲜,而关于布比卡因所致肌肉毒性的文章却不多。目的:建立并评价局部肌肉注射布比卡因不同时间点大鼠多裂肌组织形态和超微结构变化。方法:选用体质量280-320 g的雄性SD大鼠54只随机分为空白组(18只)、模型组(18只)、模型对照组(18只),每组随机分为4,7,14 d 3个亚组,每个亚组6只大鼠。麻醉后于双侧L4-5多裂肌注射0.5%布比卡因溶液,通过光学显微镜和透射电子显微镜观察分析造模后4,7,14 d多裂肌形态及超微结构改变。结果与结论:1肌肉注射0.5%布比卡因可导致大鼠骨骼肌损伤。2苏木精-伊红染色可见局部多裂肌纤维出现坏死、炎细胞浸润、少量巨噬细胞等。3透射电镜下可见肌原纤维以及各带、线排列紊乱,结构崩解,甚至消失;线粒体结构异常,嵴减少、消失等;模型7,14 d组可见多裂肌增生、修复等变化。4模型组骨骼肌超微结构变化分值明显高于空白组和模型对照组(P<0.05);模型4 d组高于模型7,14 d组(P<0.05);模型7 d组高于模型14 d组(P<0.05)。5结果表明一次性肌肉注射0.5%布比卡因,可发生大鼠骨骼肌形态学超微结构上的病理改变,以此建立的大鼠多裂肌损伤模型较为理想。

HPLC/LTQ-Orbitrap MS^n结合MDF数据挖掘技术快速鉴定藏白蒿绿原酸类似物

本研究采用HPLC/LTQ-Orbitrap MSn方法获取藏白蒿提取物的全扫描质谱数据,结合质量亏损过滤(MDF)数据挖掘技术,确定藏白蒿中绿原酸类似物(CGAs)的MDF模板分子和过滤窗口,以挖掘高分辨数据所蕴含的成分信息。结果表明:根据CGAs质谱裂解规律及诊断离子,从藏白蒿中鉴定出20个CGAs。其中,单酯类CGAs类似物9个,包括3-CQA、5-CQA、1-CQA和4-CQA,1-pCoQA和5-pCoQA,1-FQA、5-FQA和4-FQA;双酯类CGAs类似物11个,包括1-CQA-glycoside和5-CQA-glycoside,3,4-DiCQA、4,5-DiCQA和3,5-DiCQA,CFQA-1、CFQA-2、CFQA-3、CFQA-4、CFQA-5和CFQA-6。该方法可快速、灵敏地检测中药复杂体系中的CGAs,且可推广应用于中药化学成分类似物的快速鉴定。

推拿对坐骨神经损伤模型大鼠神经超微结构的影响

目的从超微病理学的角度探索推拿对坐骨神经损伤(Sciatic nerve injury,SNI)大鼠神经形态恢复的影响。方法采用推拿手法模拟仪定性、定量模拟手法,对SNI模型大鼠进行干预,通过斜板试验和光热耐痛阈观察大鼠行为学改善情况,通过透射电镜观察并分析坐骨神经损伤局部轴索、髓鞘、雪旺细胞等超微结构的改变。结果推拿治疗20次后,大鼠的斜板试验与光热耐痛阈结果与模型组相比均有显著差异(P<0.05),且达到或接近正常组水平。正常组坐骨神经有髓神经纤维的髓鞘致密均匀,结构完整,形态规则,轴索无萎缩及肿胀,雪旺细胞丰富、正常;模型组髓鞘结构模糊、松散,出现空泡状变性,轴索萎缩或消失,偶见残存的线粒体,雪旺细胞线粒体空泡化,细胞趋于坏死;推拿治疗组髓鞘结构大多数趋完整态,空泡状缺损减少;轴索无明显肿胀,雪旺细胞部分空泡化或线粒体水肿。推拿治疗组有髓神经的髓鞘厚度和轴突直径与模型组比较,均有明显恢复,且逐渐接近正常组水平。结论推拿可明显促进SNI大鼠坐骨神经纤维髓鞘的再生,轴索的恢复,减轻雪旺细胞胞质和线粒体的水肿,对周围神经损伤后超微结构的修复和再生有明显的促进作用。

HPLC-HR-MS^n法鉴定苦碟子注射液中酚酸类成分

目的应用HPLC-HR-MSn法快速鉴定苦碟子注射液中的酚酸类成分。方法采用Thermo Hypersil BDS C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以0.1%甲酸-乙腈溶液为流动相,梯度洗脱;应用ESI-LTQ-Orbitrap质谱负离子模式检测苦碟子注射液中的酚酸类化合物。结果苦碟子注射液中酚酸类成分HPLC分离良好,根据多级质谱和精确分子量数据,从中共鉴定了25个酚酸类成分,包括绿原酸类化合物15个,酒石酸类化合物6个以及小分子酚酸4个。结论建立了酚酸类成分的HPLC-HR-MSn检测方法,为进一步阐明苦碟子注射液药效物质基础提供科学依据。

一测多评法测定清开灵注射液中的绿原酸类成分

目的采用“一测多评”法同时测定清开灵注射液中6种绿原酸类成分的量，对不同厂家及同一厂家不同批次产品进行多指标评价。方法以绿原酸为内参物，确定该成分与新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B及异绿原酸C的相对校正因子并计算6种成分的量。利用t检验和Pearson相关分析对外标法和“一测多评”法所得结果进行评价。结果新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B及异绿原酸C的相对校正因子分别为0．934、0．958、0．722、1．011、0．860。各成分的相对校正因子重现性良好（RSD〈5％），采用相对校正因子计算值与外标法实测值之间没有显著性差异。结论不同厂家产品绿原酸类成分含有量最低值与最高值相差最高达约20倍，同一厂家不同批次产品绿原酸类成分含有量相差约3～4倍。

人参皂苷Rg1对人胃癌BGC-823的抑制作用研究

目的:研究人参皂苷Rg1对体外培养的人胃癌细胞株BGC-823活性、增殖、凋亡蛋白Bax-2c、aspase-3及形态学影响,并探讨其可能机制。方法:取对数生长的细胞,加入不同浓度人参皂苷Rg1加以干预,生长曲线法、MTT法、蛋白质含量分别观察人参皂苷Rg1对BGC-823细胞活性、增殖的影响,荧光定量PCR法测定凋亡蛋白Bax-2c、aspase-3 mRNA含量变化,形态学方法观察人参皂苷Rg1促BGC-823细胞凋亡作用。结果:人参皂苷Rg1 40、60、80 mg/L不同剂量均不同程度抑制细胞的增殖,且有明显的量-效、时-效关系;人参皂苷Rg1对BGC-823细胞具有明显的细胞毒作用,其IC50为29.56 mg/L;人参皂苷Rg1可明显减少肿瘤细胞内蛋白含量,提高细胞内Bax-2、caspase-3 mRNA含量,提高经人参皂苷Rg1作用后,凋亡细胞皱缩,胞浆稀少或缺乏,淡红色;染色质凝聚,成深紫色;细胞核固缩碎裂成数个圆形颗粒。结论:人参皂苷Rg1可明显抑制细胞增殖,降低细胞活性,表现出较好的抗肿瘤活性,其作用机制可能与抑制肿瘤细胞蛋白质合成、促进BGC-823细胞凋亡有关。

桑叶不同提取部位对α-葡萄糖苷酶抑制活性体外研究

目的建立体外α-葡萄糖苷酶抑制活性评价体系,观察桑叶不同提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用。方法经大鼠小肠获得α-葡萄糖苷酶,以4-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷(p NPG)为底物,以阿卡波糖(Acarbose)为阳性对照,测定桑叶水提液(WE)、水提上清液(AP-A)、水提沉淀(AP-P)及75%乙醇提取液(EE)对α-葡萄糖苷酶活性抑制作用。结果桑叶不同提取液均有α-葡萄糖苷酶抑制活性,不同提取液的半数抑制浓度(IC50)分别是WE:0.08 g/L;AP-A:0.17 g/L;AP-P:0.42 g/L;EE:0.12 g/L;桑叶提取液α-葡萄糖苷酶抑制活性强弱顺序为:WE>AP-A>EE>AP-P,其中WE IC50小于Acarbose(0.11 g/L)。结论桑叶水提液抑制α-葡萄糖苷酶活性作用最强,为桑叶在该机制发挥降糖作用的主要活性部位,体外α-葡萄糖苷酶活性抑制评价体系可作为该药效成分筛选平台。

牵牛子生品、炒品酚酸类成分的HPLC-MS分析

目的:采用高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)技术对牵牛子生品、炒品中化学成分进行分析。方法:采用Agilent Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸梯度洗脱,质谱使用ESI离子源,在负离子模式下扫描,记录总离子流图。结果:从牵牛子生品和炒品中共分离鉴定了9个共有化合物,其中7个酚酸类,1个黄酮苷类,1个酯类。结论:牵牛子炒制前后化学成分发生变化。牵牛子生品、炒品化学成分种类未发现变化,但成分含量发生变化,酚酸类成分咖啡酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B和异绿原酸C等峰强度均发生变化。其中咖啡酸、绿原酸、异绿原酸B炒后含量降低,新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A及异绿原酸C炒后含量升高。

苯酚-硫酸法测定慈姑中多糖的含量

目的建立测定慈姑中多糖含量的方法。方法采用水提醇沉法提取慈姑多糖,并用苯酚-硫酸法对所提慈姑多糖含量进行测定,测定波长490 nm。结果在范围20~100μg内呈良好线性关系,r2=0.992 8,平均回收率为104%,RSD=4.72(n=5),且供试溶液在2 h内显色稳定。结论苯酚-硫酸法测定慈姑中多糖含量,方法灵敏、重现性好,适用于慈姑多糖含量测定。

苦丁茶冬青化学成分和药理作用研究进展

冬青属植物苦丁茶冬青(Ilex kudingcha C.J.Tseng)的叶或嫩叶,是民间常用的中草药,有清热解毒之功效。现代药理研究表明,苦丁茶冬青具有降脂减肥、降血糖、抗动脉粥样硬化、抗氧化和抗菌、抗病毒等活性。目前从苦丁茶冬青中已分离出大量的三萜及其皂苷类和酚酸类等化学成分,但其发挥功效的药效物质基础及其分子机制有待进一步研究。因此本文就近年来苦丁茶冬青叶化学成分及药理作用进行了分析和总结,为苦丁茶冬青药用资源的开发利用提供参考。

电针“委中”穴对大鼠腰多裂肌损伤后的再生促进作用及对IGF-1表达的影响

目的观察电针委中穴对腰部多裂肌损伤后的干预作用及对胰岛素样生长因子1(insulin like growth factor 1,IGF-1)表达的影响,探求委中穴对大鼠腰肌损伤后再生修复的可能机制。方法雄性SD大鼠120只,随机分为空白组、模型对照组、模型组、电针委中组、电针肾俞组,共5组,观察3个时间点(4天、7天、14天)的变化,每个时间点8个样本。将0.5%布比卡因盐酸盐溶液按每点100μL注射于模型组和电针组大鼠L4、L5水平的多裂肌上。模型对照组采用同样方法注射生理盐水,空白组不做处理。造模后进行电针双侧委中穴或肾俞穴分别治疗4天、7天、14天,HE染色观察肌细胞形态学的改变,免疫组化方法检测肌细胞IGF-1的表达。结果造模前后多裂肌形态学改变显著,损伤后第14天仍未完全恢复。电针委中组与电针肾俞组从形态学上优于模型组。第4、7天模型组多裂肌IGF-1的表达显著高于空白组(P<0.01);第4天电针委中组表达显著高于模型组(P<0.01),电针委中组表达高于电针肾俞组(P<0.05),电针肾俞组表达高于模型组(P<0.05),而在第14天,电针肾俞组表达显著高于模型组与电针委中组(P<0.01)。结论电针委中穴和电针肾俞穴均能够促进大鼠腰多裂肌损伤后的再生,电针委中穴在肌肉损伤的早期效果显著。

基于中药活性小分子单克隆抗体的复方配伍机理研究新思路

中药复方配伍机理研究一直是中医药研究的重点内容之一,但复方的复杂性使得目前研究方法难以适合其自身特点,制约了中医药现代化、国际化进程。笔者提出药物配伍关系与其体内代谢过程密切相关,制备中药活性小分子单克隆抗体,利用免疫分析方法能够实现多种主要药效成分的同时检测,可以阐明中药的体内代谢及相互作用关系,是进行复方配伍机理研究的新思路。

督脉电针对不同时间段脊髓损伤大鼠运动功能及p75神经营养素受体表达的影响

目的观察督脉电针对脊髓损伤大鼠不同时间段运动功能及p75神经营养素受体(p75^(NTR))表达的影响。方法雄性清洁级Sprague-Dawley大鼠180只,随机分为术后1 d、3 d、7 d组,每个时间段组再随机分为空白组、空白电针组、假手术组、模型组和督脉电针组,每组12只。采用改良Allen打击法复制脊髓损伤模型。空白电针组、督脉电针组选取大椎、命门进行电针干预。采用BBB评分法评估大鼠后肢运动神经功能的变化;采用Western blotting法检测p75^(NTR)的表达情况。结果 BBB评分结果显示,模型组、督脉电针组评分均低于其他三组;术后7 d,督脉电针组评分显著高于模型组(t=-4.510,P<0.001)。督脉电针组各时间点p75^(NTR)表达明显低于模型组(P<0.01)。结论脊髓损伤后受损脊髓组织中p75^(NTR)蛋白表达升高;督脉电针可以提高脊髓损伤大鼠的运动功能,下调受损脊髓组织中p75^(NTR)的表达。

慈姑多糖部位颗粒剂制备工艺研究

目的:优选慈姑多糖部位的提取方法及其颗粒剂的制备工艺,为慈姑多糖部位的开发利用提供实验依据。方法:首先采用正交设计L4(23),以浸膏得率为指标,对影响慈姑提取工艺的因素进行考察并制备慈姑多糖部位;利用苯酚-硫酸法对慈姑多糖部位中的慈姑多糖含量进行测定;再以颗粒的吸湿性、成型性、溶化性、休止角及制粒的难易程度为评价指标,采用L9(33)正交试验设计对慈姑多糖部位颗粒剂的工艺条件进行优选;并采用固定漏斗法测定休止角,考察所添加辅料种类、慈姑多糖部位与辅料比例、乙醇浓度对慈姑多糖部位颗粒剂成型工艺的影响,借以优选成型工艺。结果:慈姑的最佳提取工艺为6倍量70%乙醇,冷浸提取48 h;慈姑多糖部位中慈姑多糖的含量为20.22%;优选的慈姑多糖部位颗粒剂成型工艺的条件为以乳糖作为辅料,慈姑多糖部位与辅料比例为1∶2,并使用80%乙醇作为润湿剂;在优选的条件下,颗粒的成型性好、流动性好且不易粘连,溶化速度快且静置后无沉淀。结论:优选的慈姑多糖部位的提取方法及其颗粒剂的制备工艺合理且简单可行,为慈姑多糖部位的开发利用提供了实验依据。