缺氧H9c2来源外泌体对HUVEC增殖、迁移和成管能力的影响

目的探讨缺氧状态下大鼠心肌细胞H9c2来源外泌体对血管新生的影响。方法采用混合气体法制备H9c2细胞缺氧模型,以正常培养细胞为对照。分别提取2组细胞分泌的外泌体,采用纳米颗粒跟踪分析检测外泌体的浓度和粒径,透射电子显微镜观察外泌体的形态和大小,Western blot验证外泌体标志蛋白。制备人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧模型,并与H9c2外泌体共同孵育,分为常氧组、缺氧组、缺氧+正常H9c2外泌体(EXO-C)组和缺氧+缺氧H9c2外泌体(EXO-M)组。通过CCK-8法、细胞划痕实验、Matrigel体外三维成形实验分别检测HUVEC增殖、迁移、成管能力。结果外泌体鉴定结果显示常氧组和缺氧组H9c2外泌体样本颗粒浓度均处于1×10^(7)×10^(12)/mL,粒径大小40~160 nm;形态特征均为球形或茶托状结构,大小均一,形态完整;外泌体标志蛋白肿瘤易感基因101(TSG101)、CD63、CD9均有表达,无阴性蛋白钙联蛋白(Calnexin)的表达。与常氧组比,缺氧组HUVEC增殖能力、迁移面积、迁移率均显著下降,参与成管的长度及分支数、节点数均减少(P<0.01);与缺氧组比,EXO-M组HUVEC细胞增殖能力下降,迁移面积减少、迁移率下降,参与成管长度及分支数进一步减少(P<0.05);与EXO-C组相比,EXO-M组增殖能力下降,细胞迁移面积减少,迁移率下降(P<0.01)。结论缺氧H9c2来源的外泌体对HUVEC增殖、迁移、成管能力有一定程度的抑制作用。

基于miRNA-133a/TGF-β1/Smads信号通路探讨芪苈强心胶囊对心肌梗死大鼠心肌纤维化的作用机制

目的:探讨芪苈强心胶囊对心肌梗死(MI)大鼠心肌组织纤维化的影响及可能的作用机制。方法:采用永久性左冠状动脉前降支结扎方法建立心肌梗死大鼠模型,术后随机分组为模型组、芪苈强心胶囊组、卡托普利组,另外设假手术组只穿线但不接扎作为平行对照。药物治疗4周后,采用苏木素伊红(HE)染色观察心脏病理形态,Masson染色观察心肌组织纤维化并计算胶原容积分数(CVF)。实时荧光PCR观察miR-133a、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad2、Smad3、Ⅰ型胶原(col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(col-Ⅲ)mRNA表达量。结果:与假手术组比较,模型组心肌细胞排列紊乱,CVF显著升高(P<0.01),col-Ⅰ、col-ⅢmRNA表达水平明显增加(P<0.01);miR-133a表达水平显著降低(P<0.01),TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,芪苈强心胶囊组和卡托普利组梗死边缘区心肌细胞排列相对规整,CVF显著下降(P<0.05);miR-133a表达水平明显提高(P<0.05~0.01),TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达水平显著降低(P<0.01)。结论:芪苈强心胶囊可改善心肌梗死大鼠心肌组织纤维化,其作用机制与调节miRNA-133a/TGF-β1/Smads信号通路基因表达有关。

中医/中西医结合临床实践指南与专家共识中证据质量评价与推荐意见的应用现状分析

目的分析中医/中西医结合临床实践指南(简称指南)与专家共识(简称共识)证据质量与推荐意见分级标准的应用情况,为今后指南和共识的制订提供参考。方法检索中国知网、万方数据库、PubMed、EMbase和医脉通2010年1月1日至2020年12月31日收录的中医/中西医临床实践指南或专家共识。由2名研究者独立提取指南与共识名称、发表年份、证据质量分级标准、推荐意见分级标准、是否明确指出证据质量及推荐强度分级标准、是否标注证据质量等级、是否标注推荐意见等级相关信息,进行描述性统计分析。结果共纳入中医/中西医结合指南和共识245部,包括指南125篇,共识120篇。其中有58篇(46.4%)指南和6篇(5.0%)共识均同时明确说明了采用的证据质量和推荐意见分级标准,二者比较差异有统计学意义(P<0.01)。纳入分析的指南与共识中有71篇说明了采用的证据质量分级标准,其中最多的是汪受传等制订的Delphi法文献依据和推荐意见分级标准(中医)修订版(32篇,45.1%)、刘建平等制订的基于证据体的临床研究证据和推荐意见分级参考建议(17篇,23.9%)和GRADE分级标准(10篇,14.1%)。纳入分析的指南与共识中共64篇说明了采用的推荐意见分级标准,最常用的是汪受传等制订的Delphi法文献依据和推荐意见分级标准(中医)修订版(30篇,46.9%)和GRADE分级标准(13篇,20.3%)。结论目前中医/中西医结合临床实践指南/专家共识证据质量和参考意见的分级标准较多,但仍存在应用不足,需在今后研究中予以重视并进一步规范。

稳心颗粒对心肌梗死大鼠BCL-2/BAX/Caspase凋亡途径基因表达的影响

目的:探讨稳心颗粒调控心肌细胞凋亡相关基因表达的心脏保护机制。方法:建立心肌梗死大鼠模型,术后随机分为模型组、稳心颗粒低剂量组、稳心颗粒高剂量组、美托洛尔组及假手术组。治疗2周后采用心脏超声心动图检测各组大鼠左心室收缩末期前壁厚度(LVAWs)、收缩末期内径(LVIDs)、收缩末期后壁厚度(LVPWs)、舒张末期前壁厚度(LVAWd)、舒张末期内径(LVIDd)、舒张末期后壁厚度(LVPWd)以及左室射血分数(LVEF);苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠心脏病理结构改变;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测各组大鼠哺乳动物B细胞淋巴瘤-2(BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(BAX)、天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)、天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA的相对表达水平;TUNEL染色检测各组大鼠心肌细胞凋亡率变化。结果:与假手术组相比,模型组LVAWs、LVPWs、LVPWd及LVEF均显著减少(P<0.05~0.01),LVIDs、LVIDd显著增加(P<0.05~0.01),心脏组织病理缺血损伤严重,并且模型组BCL-2mRNA相对表达水平及BCL-2/BAX比值明显减少(P<0.01),而BAX、Caspase-9、Caspase-3 mRNA相对表达水平明显增高(P<0.01),心肌细胞凋亡率显著升高(P<0.01);稳心颗粒低、高剂量组及美托洛尔组的LVAWs、LVPWs、LVPWd、LVEF均显著增加(P<0.05~0.01),LVIDs、LVIDd显著减小(P<0.05~0.01),心脏组织病理损伤改善,BCL-2 mRNA表达水平和BCL-2/BAX比值显著增加(P<0.05~0.01),BAX、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达水平显著降低(P<0.05~0.01),心肌细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。结论:稳心颗粒可通过调控BCL-2/BAX/Caspase凋亡途径基因表达而发挥心脏保护作用。

基于CiteSpace的近20年蚓激酶相关研究的文献计量学分析

目的采用知识图谱及文献计量学方法总结蚓激酶相关研究的脉络、热点和发展趋势。方法检索2001年至2020年中国知网数据库(CNKI)中蚓激酶相关研究文献。应用CiteSpace软件对作者、机构和关键词进行共现、聚类、突现分析,并绘制知识图谱。结果共纳入文献508篇,发表4篇文献及以上的作者有13人,其中以扈荣良和张守峰发文最多;主要研究机构以黑龙江中医药大学为主。共有373个关键词被纳入,其中“蚓激酶”出现频次最高(274次),中心性最高(0.68);关键词聚类分析形成了12个聚类标签;共得到6个突现词,其中突现强度最大的关键词是“临床观察”(6.0717),突现时间最近的关键词是“疗效”(2010-2016年)。结论通过关键词共现、聚类、突现分析得到,蚓激酶相关研究的热点主要集中在药物制备工艺研究、细胞与分子基础研究、动物实验与临床研究三个方面。这些方面的深入研究需要影响力大的作者进行沟通交流,加强机构间的合作,并大力开展蚓激酶相关研究,加强领域内研究人员的科研培训,从而促进该领域的发展。

稳心颗粒对心肌梗死大鼠缝隙连接蛋白43和内质网应激通路基因表达的影响

目的:探讨稳心颗粒调节缝隙连接蛋白43(CX43)和内质网应激通路基因表达的心脏保护机制。方法:建立心肌梗死大鼠模型,术后第2天根据心电图筛选入组,随机分为模型组、稳心颗粒低剂量组、稳心颗粒高剂量组、美托洛尔组,另设平行操作不结扎的假手术组,药物治疗2周。腹腔注射异丙肾上腺素记录心律失常发生率;心脏血流动力学检测各组大鼠左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室内压最大上升速率(+dp/dt_(max))、左心室内压最大下降速率(–dp/dt_(max));苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠心脏病理改变;Masson染色检测心肌梗死边缘区胶原容积分数;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测各组大鼠CX43、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、肌醇需求激酶1(IRE1)、活化转录因子6(ATF6)、X盒结合蛋白1(XBP1)mRNA的相对表达量;蛋白免疫印迹法检测CX43的表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠心律失常发生率明显上升(P<0.01),LVSP、+dp/dt_(max)、–dp/dt_(max)均显著降低(P<0.01),LVEDP显著增高(P<0.01),心肌组织病理性改变明显,心肌胶原容积分数明显增加(P<0.01),CX43 mRNA相对表达量明显下调(P<0.01),IRE1 mRNA相对表达量增高(P<0.05),GRP78、ATF6、XBP1 mRNA相对表达量明显增高(P<0.01),CX43蛋白表达明显降低(P<0.01);稳心颗粒及美托洛尔治疗2周后,给药组大鼠心律失常发生率下降(P<0.05),LVSP增加(P<0.05),+dp/dt_(max)、–dp/dt_(max)显著增加(P<0.01),心肌组织病理性变化显著改善,心肌胶原容积分数明显降低(P<0.01),CX43mRNA表达量上调(P<0.05),GRP78、IRE1、ATF6、XBP1 mRNA表达量下调(P<0.05),CX43蛋白表达升高(P<0.05)。结论:稳心颗粒可调节心肌梗死大鼠CX43和内质网应激通路基因表达,进而发挥心脏保护作用。

芪苈强心胶囊对心肌梗死大鼠心脏IP3Rs/GRP75/VDAC1基因调控的机制研究

目的:探讨芪苈强心胶囊对心肌梗死大鼠线粒体Ca^(2+)转运相关基因的调控作用。方法:采用冠状动脉左前降支结扎术建立心肌梗死大鼠模型。术后随机将动物分到模型组、芪苈强心组和卡托普利组;同时设有假手术组作为对照。治疗四周后,通过心脏大体结构观察大鼠心脏梗死范围,HE染色观察大鼠心肌组织病理形态变化;实时荧光(Real⁃Time)PCR检测大鼠心脏梗死边缘区线粒体Ca^(2+)转运相关基因三磷酸肌醇受体2(IP3R2),葡萄糖调节蛋白75(GRP75),电压依赖性阴离子通道1(VDAC1),线粒体融合蛋白2(Mfn2),以及线粒体凋亡相关基因B淋巴细胞瘤⁃2(Bcl⁃2),Bcl⁃2相关X蛋白(Bax)mRNA表达变化;Western blot检测心肌组织Bcl⁃2,Bax蛋白表达变化;TUNEL染色检测心肌组织细胞凋亡率。结果:与假手术组相比,模型组大鼠心脏左室前壁呈现大面积梗死区域,心肌组织结构紊乱;线粒体Ca^(2+)转运相关基因IP3R2,GRP75,VDAC1,Mfn2 mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01);线粒体凋亡相关分子Bcl⁃2 mRNA和蛋白表达均明显下降(P<0.01),Bax mRNA和蛋白表达均显著升高(P<0.01),心肌细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。与模型组相比,芪苈强心组和卡托普利组心脏大体标本的梗死范围缩小,心肌纤维排列相对规整;线粒体Ca^(2+)转运相关基因IP3R2,GRP75,VDAC1,Mfn2 mRNA表达显著降低(P<0.01);线粒体凋亡相关分子Bcl⁃2 mRNA和蛋白表达有所提高(P<0.05,P<0.01),Bax mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),心肌细胞凋亡率明显下降(P<0.01)。结论:芪苈强心胶囊能够改善心肌梗死大鼠心脏形态结构,其作用机制与调节线粒体Ca^(2+)转运复合体IP3R2/GRP75/VDAC1基因表达,进而抑制细胞凋亡有关。

活血益气方对miR-484过表达脐静脉内皮细胞增殖、迁移和成管能力的影响

目的:探讨活血益气方通过调节miR-484靶向VEGF调节血管新生的可能分子机制。方法:制备miR-484过表达HUVEC细胞模型,采用活血益气方药物冻干粉干预,CCK-8法、细胞划痕实验、Matrigel体外三维成形实验分别检测活血益气方对HUVEC增殖、迁移和管状成形能力的影响,实时荧光定量PCR法检测活血益气方对VEGFA mRNA表达的影响。结果:与对照组相比,miR-484过表达模型组细胞增殖能力减弱(P<0.01),迁移面积减少(P<0.05),参与成管的长度、分支数、节点数减少,成管能力显著下降(P<0.01),VEGFA mRNA表达水平下调(P<0.05);与模型组相比,活血益气方药物组细胞增殖能力增强(P<0.01),迁移面积增加(P<0.05),参与成管的长度、分支数、节点数增多,成管能力提升(P<0.05),VEGFA mRNA表达水平上调(P<0.05)。结论:miR-484抑制VEGFA mRNA的表达和HUVEC的增殖、迁移和成管,活血益气方对该过程有一定的负向调控作用,这可能是活血益气方促进血管新生的新的作用靶点。

芪丹利心丸对心肌梗死大鼠左心室心肌组织miR-133a/TGF-β1/CTGF信号通路的影响

目的探讨芪丹利心丸防治心肌梗死后心肌纤维化的可能作用机制。方法采用左冠状动脉结扎术建立心肌梗死大鼠模型,随机分为模型组、卡托普利组和芪丹利心丸组,另设假手术组只穿线不结扎,每组10只。术后第2天,芪丹利心丸组给予芪丹利心丸2.43 g/(kg·d)灌胃,卡托普利组给予卡托普利片2.25 mg/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组给予去离子水10 ml/(kg·d)灌胃。4周后检测各组心脏血流动力学指标[包括心率(HR)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室内压最大上升速率(+dp/dt max)、左心室内压最大下降速率(-dp/dt max)],称取左心室重量(LVM)并计算左心室质量指数(LVMI),HE染色进行病理学观察,Masson染色计算胶原容积分数(CVF),检测左心室心肌组织miR-133a、转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)mRNA及TGF-β1、CTGF蛋白表达情况。结果与假手术组比较,模型组LVSP、+dp/dt max,-dp/dt max下降,LVEDP升高,LVMI、CVF增大,miR-133a下调,TGF-β1和CTGF蛋白及mRNA表达增多(P<0.01)。与模型组比较,芪丹利心丸组LVSP、+dp/dt max,-dp/dt max上升,LVEDP降低,LVMI、CVF减小,miR-133a上调,TGF-β1和CTGF蛋白及mRNA表达减少(P<0.05或P<0.01)。HE染色显示,模型组见梗死边缘区残存的心肌纤维混乱、部分断裂,肌间隙增宽明显,而卡托普利组和芪丹利心丸组心肌梗死边缘区心肌纤维走形相对规整,多数胞膜基本完整。结论芪丹利心丸可防治心肌梗死大鼠心肌纤维化,其机制可能与miR-133a/TGF-β1/CTGF信号通路有关。