雷公藤多苷对正常及佐剂关节炎大鼠睾丸组织形态结构、NOS表达影响的比较研究

目的:比较雷公藤多苷(GTW)对正常大鼠及佐剂关节炎雄性大鼠生殖毒性的差异。方法:雄性SD大鼠随机分为2组:正常组及弗氏完全佐剂诱导的关节炎组(每组60只)。各组大鼠同时以GTW灌胃,剂量分别为:0、7、70及105mg/kg/d,给药2周后取材,测量睾丸及附睾系数,检测睾丸组织中NOS含量及分布,观察睾丸组织病理变化。结果:105mg/kg GTW对正常及关节炎大鼠均能诱发生殖毒性;70mg/kg GTW可诱发正常大鼠生殖毒性,而该剂量GTW对关节炎大鼠没有明显的生殖毒性;7mg/kgGTW则对正常及关节炎大鼠均无生殖毒性。结论:GTW的睾丸毒性除与剂量相关外,与机体生理状态关联,相同剂量GTW在关节炎动物体内产生的睾丸毒性较正常动物弱。

白附片对健康及肾阳虚模型大鼠心电图及心肌组织病理形态的影响

目的:观察白附片对健康大鼠及肾阳虚证模型大鼠心电、心肌组织形态结构影响的差异。方法:80只SD雄性大鼠随机分为健康组和肾阳虚证模型组,每组各自用5个梯度浓度的白附片醇提物连续灌胃14d。描记大鼠心电图,记录心率(BPM)、峰-峰值(P-P)及心律失常情况,光镜观察心脏病理形态改变。结果:白附片使健康和模型大鼠的BPM加快、P-P增大及心律失常发生,随着剂量的增加,模型大鼠BPM加快的幅度较小,心律失常发生率较低;白附片使健康和模型大鼠心脏病理形态改变,同一剂量时,模型大鼠的改变程度较轻。结论:白附片对健康和肾阳虚模型大鼠的心脏毒性与剂量相关,肾阳虚模型大鼠的心脏毒性反应较轻。

细胞培养液乳酸脱氢酶漏出率的比色测定及其应用

采用乳酸脱氢酶比色法测定细胞培养液乳酸脱氢酶的漏出率是一个稳定而实用的指标。本法既可客观衡量细胞的受损程度,也可进行药物干预的正确评价,也是进行药物筛选的一种有效方法。

半夏泻心汤对应激性胃溃疡大鼠生长抑素的影响

目的探讨半夏泻心汤对应激性胃溃疡的作用机理。方法采用水浸-束缚应激造成大鼠急性胃溃疡模型,然后把动物分为正常组、模型组和全方组及各拆方组,观察半夏泻心汤及各拆方组对其治疗作用及对各组大鼠脑组织和胃组织生长抑素(SS)表达(免疫组化反应)的影响,为半夏泻心汤配伍规律提供科学实验研究的参考。结果与正常组(脑组织:0.0305±0.0024、胃组织0.0282±0.0037)比较,模型组(脑组织0.0237±0.0056、胃组织0.0171±0.0053)SS的表达明显下降。与模型组比较,甘补药组(脑组织0.0314±0.0027、胃组织0.0219±0.0059)和全方组(脑组织0.0294±0.0050、胃组织0.0288±0.0027)SS的表达增强,全方组的效果最明显。结论半夏泻心汤通过增加SS的表达发挥治疗作用,全方组配伍合理。

银杏平颤方对帕金森病模型小鼠脑内nNOS mRNA表达的影响

目的探讨中药复方银杏平颤方(GBPR)抗实验性帕金森病(PD)的疗效及作用机制。方法取雄性C57/BL6J小鼠分为正常对照组、模型对照组和中药组。以1-甲基4-苯基-四氢吡啶(MPTP)腹腔注射制作的PD模型小鼠,并给予GBPR灌胃治疗。用地高辛标记的nNOScDNA寡核苷酸探针进行原位杂交,观察GBPR治疗对小鼠脑组织纹状体、黑质中的nNOSmRNA的表达的影响。结果MPTP腹腔注射PD模型小鼠脑纹状体和黑质中可见大量nNOSmRNA的表达;中药GBPR能显著降低脑纹状体、黑质中的nNOSmRNA的表达。结论提示本药有良好的抗NO毒性作用,其作用机制可能与降低脑组织神经型一氧化氮合成酶(nNOS)合成,达到抗氧化损伤效应。

益智汤对阿尔茨海默病转基因小鼠海马超微结构的影响

目的研究益智汤对转基因阿尔茨海默病(AD)模型小鼠脑组织超微结构的影响,探讨益智汤治疗AD的作用机制。方法APP695转基因小鼠分为AD模型组和益智汤治疗组,同月龄同背景转基因阴性小鼠为正常对照组。3个月后,使用电镜技术观察各组小鼠脑组织海马超微结构的变化。结果与对照组比较,模型组小鼠海马神经细胞出现线粒体和突触损伤,血脑屏障结构异常。益智汤组小鼠神经细胞病理变化有所减轻。结论APP695转基因小鼠脑组织超微结构出现病理变化,益智汤可通过减轻神经元线粒体和突触的损伤及改善血脑屏障的功能来维持神经细胞结构和功能的正常。

基于病证结合的中药网络药理学研究与新药研发策略

近年来,新药研发难度逐渐加大,医药产业面临的挑战更加严重。"一个基因——一个药物——一种疾病"的新药发现模式已不适合药物研发。中药复方的作用特点以及网络药理学的思想有望成为现代中药创制的新策略。本文以类风湿性关节炎(RA)为例,概要介绍了基于病证结合的中药网络药理学研究思路与方法,并对研究中存在的问题和相应策略进行了分析。

抗呆I号对体外模拟脑缺血再灌注损伤星形胶质细胞的影响

目的:观察体外培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞在模拟脑缺血再灌注损伤中的活性、存活率和无血清条件培养液蛋白含量的变化以及中药抗呆Ⅰ号的影响。方法:先对分离纯化培养的星形胶质细胞进行体外模拟脑缺血再灌注损伤模型的建立,然后采用MTT法对星形胶质细胞的活性和存活率进行测定以及用Bradform法对星形胶质细胞条件培养液中蛋白质含量进行测定。结果:体外培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞在体外模拟脑缺血再灌注损伤中的活性、存活率、无血清条件培养液蛋白含量的变化具有一定的规律性,可分细胞损伤期、功能代偿期、功能低下期和功能恢复期。抗呆Ⅰ号可使受损的星形胶质细胞的活性明显增强(与模型组相比多数时间点比较(t=2.074,P<0.05)。存活率显著提高(与模型组相比多数时间点P<0.05,t>2.219),使其条件培养液中的蛋白含量迅速增高(与模型组相比多数时间点,t>5.087,P<0.001)。结论:抗呆Ⅰ号可能通过保护星形胶质细胞免受损伤或使其分泌功能增强,从而间接地发挥星形胶质细胞对神经元的保护和修复作用。

文本挖掘注射用双黄连不良反应的相关因素

目的利用文本挖掘技术探索注射用双黄连不良反应发生的相关因素。方法在中国生物医学文献服务系统中收集双黄连文献数据,采用基于敏感关键词频数统计的数据分层算法,挖掘数据集中原料、检测、功能、临床及不良反应等方面的信息,将结果通过Cytoscape软件构建网络图。结果有关注射用双黄连的文献研究主要集中于不良反应和检测指标方面,双黄连注射液不良反应的核心症状是皮疹、高热、头痛、胸闷和荨麻疹;其需要检测的主要指标为内毒素(脂多糖)、组胺和致敏原。双黄连注射剂中的主要成分是黄芩苷、绿原酸和连翘酯苷A。结论利用文本挖掘总结注射用双黄连不良反应是一种新的探索和尝试;有关双黄连注射剂引发过敏或类过敏反应的机制尚待深入和系统的研究。

星形胶质细胞正常条件培养液对体外脑缺氧/复氧损伤神经元的影响

目的 :探讨星形胶质细胞正常条件培养液 (NCMA)对体外脑缺氧 /复氧 (H/R)损伤神经元的营养性作用。方法 :先行大鼠大脑皮质星形胶质细胞和神经元的分离纯化培养 ,然后用NCMA以不同的浓度培养正常及脑H/R损伤的神经元 ,通过MTT法测定其神经元的活性和存活率。结果 :NCMA能提高正常及脑H/R损伤神经元的活性和存活率。结论 :NCMA对培养的神经元具有营养性支持作用。

健脾疏肝方与调肝化浊解毒方预防大鼠非酒精性脂肪性肝炎药效学观察

目的:观察健脾疏肝方与调肝化浊解毒方对NASH大鼠模型的药效学作用。方法:以高脂饮食建立大鼠NASH模型,并于造模同时进行药物干预;实验第8周末进行血清ALT、AST、TG、HDL-C、LDL-C及肝组织SOD、MDA、GSH-PX的测定,同时观察肝脏病理切片。结果:与模型组相比,健脾疏肝方及调肝化浊解毒方均能够明显降低血清ALT、AST(P<0.01);健脾疏肝方能显著降低血清TG水平(P<0.05);调肝化浊解毒方能明显改善血清HDL-C、LDL-C含量(P<0.05);此外,健脾疏肝方与调肝化浊解毒方均能显著降低肝组织MDA水平(P<0.01),而健脾疏肝方能同时升高肝组织GSH-PX水平(P<0.01)。病理切片示:与模型组相比,健脾疏肝方与调肝化浊解毒方组肝小叶内空泡变性、脂肪样变均减少,炎细胞浸润得到改善,但组间差异不明显。结论:健脾疏肝方与调肝化浊解毒方均能明显降低NASH大鼠肝酶、调节脂代谢、提高肝脏抗氧化能力,虽然在指标干预上略有侧重,但又有交叉,均在防治NASH的发生发展中起到积极的作用。

中药抗呆Ⅰ号对体外模拟脑缺血再灌注损伤大脑皮质神经元的保护作用(英文)

目的:观察体外培养的大鼠大脑皮层神经元在模拟脑缺血再灌注后的变化以及中药抗呆Ⅰ号的影响。方法:先对分离纯化培养的大脑皮层神经元进行体外模拟脑缺血再灌注损伤模型的建立,然后采用MTT法测定神经元的活性和存活率,用台盼蓝染色法测定其死亡率,用比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率,用组化染色法测定一氧化氮合成酶(NOS)的活性。结果:体外培养的大鼠大脑皮层神经元随缺血和再灌注时间的延长细胞的活性和存活率逐渐下降、死亡率逐渐升高、培养液中LDH的漏出率逐渐升高、细胞NOS表达强阳性细胞数在缺血4h(34.6±3.847)和再灌3h(20.6±3.362)时显著增高。模型组与正常组相比,差异有非常显著性意义(t=13.236,8.038,P<0.01)。抗呆Ⅰ号可影响其上述指标的变化。结论:抗呆Ⅰ号可能通过防止氧化磷酸化脱耦联而保护线粒体、防止脂质过氧化及通透性增加而保护细胞膜、抑制NOS活性的反应性增强而防止一氧化氮(NO)及其衍生的毒性自由基的损伤等途径而发挥对神经元的保护作用。

肝络通对大鼠肝纤维化门脉高压症的药效学研究

目的:研究肝络通(甘草酸二铵、丹酚酸B)对胆管阻塞性肝纤维化模型大鼠门脉高压症的治疗作用。方法:采用胆总管结扎方法复制肝纤维化门脉高压症模型,造模成功一周后随机分为5组:模型、高、中、低剂量组和心得安组,并设假手术组,分别灌胃给药。于术后2周和4周分别测定各组的门静脉压力、肝功能、羟脯氨酸含量并进行病理组织学检查。结果:肝络通及心得安各治疗组大鼠门静脉压力较模型组明显降低,但肝络通各组与心得安组比较无显著性差异。肝络通能显著降低血清AST、ALT、TBIL和Na+的浓度,同时降低肝组织羟脯氨酸蛋白含量。术后4周HE染色显示肝络通能显著抑制胶原生成,促进肝组织结构的恢复。结论:肝络通能减缓肝纤维化进程对肝脏起到保护作用。

以天麻和钩藤为主的中药制剂干预体外模拟脑缺血再灌注损伤大鼠碱性成纤维细胞生长因子及其受体的表达

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子及其受体在体外模拟脑缺血再灌注损伤中的表达变化及以天麻和钩藤为主的中药制剂——抗呆Ⅰ号对其的影响。方法:实验于2002-03/2004-04在科学实验中心完成。先分别进行大鼠大脑皮质星形胶质细胞和神经元的分离纯化培养及体外模拟脑缺血再灌注损伤模型的建立,然后分别进行下列实验:①按随机数字表法将传代后培养5d的星形胶质细胞分为正常对照组、缺血再灌注模型组和缺血用药组(应用抗呆Ⅰ号),在体外模拟脑缺血4h和再灌注3h,18h,24h,36h,48h和72h后行碱性成纤维细胞生长因子的免疫细胞化学染色。②用再灌注18h后收集的星形胶质细胞条件培养液、经抗呆Ⅰ号作用的星形胶质细胞条件培养液及星形胶质细胞条件培养液与抗呆Ⅰ号联合应用以1∶5的浓度来培养损伤后的神经元,再对其培养的神经元行碱性成纤维细胞生长因子受体的免疫组化染色。结果:①体外培养大鼠的大脑皮质星形胶质细胞在模拟脑缺血再灌注损伤后各时相点分泌碱性成纤维细胞生长因子的能力均显著高于正常对照组(P<0.05～0.01);除再灌注72h外,其余各时相点缺血用药组碱性成纤维细胞生长因子的表达水平均显著高于缺血再灌注模型组(P<0.05～0.01)。②星形胶质细胞条件培养液组、经抗呆Ⅰ号作用的星形胶质细胞条件培养液组和联合应用组脑缺血再灌注损伤后各时相点的碱性成纤维细胞生长因子受体表达水平大多显著高于缺血再灌注模型组(P<0.05～0.01),均在再灌注18h时达到高峰,其作用强度为经抗呆Ⅰ号作用的星形胶质细胞条件培养液>联合应用>星形胶质细胞条件培养液。结论:体外模拟脑缺血再灌注损伤使星形胶质细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的能力增强,星形胶质细胞条件培养液能促进受损神经元碱性成纤维细胞生长因子受体的表达。抗呆Ⅰ号可增强受损神经组织的分泌功能,促进其损伤后的修复。

电针对淀粉样前体蛋白转基因小鼠海马微血管淀粉样沉积的影响及其与低密度脂蛋白相关受体1的关系

目的:探讨电针治疗阿尔茨海默病的可能作用机制。方法:将13月龄的淀粉样前体蛋白(APP)转基因小鼠随机分为模型组和电针治疗组,以相同月龄和背景的C 57 BL/6小鼠作对照组。电针治疗组取"百会""涌泉"穴,每次留针15 min,隔日1次,针刺3个月。以LashleyⅢ水迷宫测定各组小鼠的学习记忆能力,以免疫组化方法检测海马β淀粉样蛋白(amyloidβprotein,Aβ)、低密度脂蛋白相关受体1(low densi-ty lipoprotein receptor-related protein 1,LRP 1)的表达。结果:模型组水迷宫游出时间较对照组延长(P<0.05),海马沟微血管壁Aβ1-42表达的累积吸光度较对照组升高(P<0.01),海马沟微血管壁LRP 1表达较对照组减低(P<0.01);而电针治疗组的水迷宫游出时间明显低于模型组,海马沟微血管壁Aβ1-42表达低于模型组,海马沟微血管壁LRP 1表达高于模型组(均P<0.05)。结论:电针治疗可能通过提高脑微血管壁Aβ受体LRP 1的清除转运能力,降低APP转基因鼠脑微血管壁的Aβ沉积,从而改善其学习、记忆能力。

电针对β-淀粉样前体蛋白转基因小鼠行为学及其淀粉样前体蛋白、β淀粉样蛋白及胆碱乙酰转移酶水平的影响

目的:探讨针刺治疗阿尔茨海默病(AD)的可能作用机制。方法:将3月龄的β-淀粉样前体蛋白(APP)转基因小鼠随机分为模型组和电针组,每组6只,以相同月龄的C 57 BL/6 J小鼠6只为正常组。电针取"百会""涌泉"穴,每次治疗15 min,隔日1次,治疗3个月。以Y型电迷宫测定APP转基因小鼠学习记忆能力,免疫组化技术检测脑内APP、β淀粉样蛋白(Aβ)及胆碱乙酰转移酶(ChAT)水平。结果:模型组Y型电迷宫试验达标所需训练次数明显多于正常组(P<0.05),电针组达标所需训练次数较模型组明显减少(P<0.01)。模型组大脑皮层、海马CA 1区的APP阳性细胞面积及Aβ水平明显高于正常组(P<0.01),大脑皮层ChAT水平低于正常组(P<0.05);电针组大脑皮层、海马CA 1区APP阳性细胞面积及海马CA 1区Aβ水平低于模型组(P<0.05),大脑皮层、海马CA 1区ChAT水平高于模型组(P<0.05,P<0.01)。结论:电针可能通过降低APP转基因小鼠大脑皮层及海马CA 1区APP、Aβ表达水平,增加ChAT表达水平,达到改善其学习、记忆能力的作用。

益智汤对APP695转基因小鼠行为学及脑内β淀粉样蛋白及其前体蛋白的影响

目的观察益智汤对APP695转基因小鼠行为学及脑组织β淀粉样蛋白(Aβ)及其前体蛋白(APP)的影响,探讨益智汤治疗阿尔茨海默病(AD)的机理。方法3月龄APP695转基因小鼠随机分为模型组、益智汤组,同月龄同背景转基因阴性小鼠为正常组。益智汤组给予益智汤0.1 g/kg灌胃,模型组和正常组给予等体积蒸馏水。益智汤治疗3个月后,使用电迷宫检测各组小鼠学习记忆能力,采用免疫组织化学方法观察各组小鼠大脑皮层、海马APP和Aβ的表达情况。结果电迷宫检测发现,模型组小鼠学习记忆能力低于正常组(P<0.05),益智汤组小鼠学习记忆能力较模型组增强(P<0.05)。免疫组织化学结果提示,模型组小鼠脑组织各区APP和Aβ的表达高于正常组(P<0.01),益智汤组小鼠脑组织各区APP和Aβ的表达比模型组明显减弱(P<0.05)。结论APP695转基因小鼠是研究AD的良好模型,益智汤通过下调APP和Aβ的表达来改善其学习记忆能力。

中药抗呆Ⅰ号对体外模拟脑缺血再灌注损伤大鼠大脑皮层神经元的保护作用

目的 观察中药抗呆Ⅰ号对体外模拟脑缺血再灌注损伤大鼠大脑皮层神经元的保护作用。方法 体外培养的大鼠大脑皮层神经元 ,模拟脑缺血再灌注损伤中缺血 4h及再灌 3、1 8、2 4、4 8、72h ,观察其活性、存活率、死亡率、乳酸脱氢酶 (LDH)的漏出率和一氧化氮合成酶 (NOS)的活性变化以及中药抗呆Ⅰ号的影响。结果 体外培养的大鼠大脑皮层神经元随缺血和再灌注时间的延长 ,细胞存活率逐渐下降、死亡率逐渐升高、培养液中LDH的漏出率逐渐升高 ,细胞NOS的活性在缺血 4h和再灌 3h时显著增高。抗呆Ⅰ号可影响其上述指标的变化。结论 抗呆Ⅰ号可能通过防止氧化磷酸化脱偶联而保护线粒体 ,防止脂质过氧化及通透性增加而保护细胞膜 ,抑制NOS活性的反应性增强而防止NO及其衍生的毒性自由基的损伤等 。

益智方拆方不同配比对Aβ_(25～35)诱导大鼠神经元过氧化及凋亡的影响

目的比较益智方补虚药组和化浊药组不同比例配伍对β淀粉样蛋白25～35(Aβ25～35)毒性导致细胞过氧化及凋亡的影响,探讨益智方中补虚药和化浊药减轻Aβ毒性的作用机制及其合理配伍比例。方法培养原代大鼠皮层神经元,加入Aβ25～35复制阿尔茨海默病(AD)细胞模型。根据药性把益智方拆分为补虚药组和化浊药组,设立正常对照组、益智方组、补虚药组、化浊药组、补虚化浊2∶1配伍组、补虚化浊1∶2配伍组,加入各对应含药组大鼠血清,无Aβ25～35为空白对照组。24 h后比色法测定计算各组细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;免疫组化方法显示天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase3)的表达情况;末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记测定(Tunel)法显示凋亡细胞。结果 20μmol/L Aβ25～35组细胞存活率降低、LDH漏出率及MDA含量增加、SOD活性降低,Caspase3表达增强,细胞凋亡增多(P<0.01)。各含药大鼠血清能提高细胞存活率、降低LDH漏出率及MDA含量,增加细胞SOD活性,减轻Caspase3表达,减少凋亡细胞(P<0.01或P<0.05)。其中益智方组和补虚药组效果最好(P<0.01或P<0.05),补虚化浊2∶1配伍组、补虚化浊1∶2配伍组不如益智方组和补虚药组(P<0.01或P<0.05),化浊药组效果较弱(P<0.01或P<0.05)。结论 Aβ25～35具有神经毒性,导致神经细胞发生过氧化损伤和过度凋亡,益智方补虚药组在抑制细胞过氧化和凋亡方面优于化浊药组,化浊药需配伍补虚药提高疗效,故补虚药在抑制Aβ25～35神经毒性方面发挥了主要作用。

“核心竞争力”教学模式的设想

20世纪，中医界的一些有识之士指出：中医传统医学作为自成一家的医疗体系，正以其安全、便捷、经济等特点赢得人类的共同喜爱。未来中医在世界的前景和地位将是无可限量的。但从目前中医临床专业学生毕业后的就业情况来看，并不太理想。有些西医院基本不录用中医学专业毕业生；一部分中医院也不愿录用中医专业毕业生，更有甚者，宁可录用西医院校本科毕业生，而不录用中医院校临床硕士研究生。