补肾益髓生血法对苯与环磷酰胺诱导AA大鼠Th1/Th2细胞分泌细胞因子影响的实验研究

目的:探讨补肾益髓生血法对苯与环磷酰胺诱导AA大鼠血清细胞因子的作用。方法:清洁级SD大鼠85只,随机分为正常组10只,造模组75只,造模组皮下隔天注射苯(1 mL/kg)7周,取材前2周连续隔天腹腔注射CTX(25 mg/kg)3次,建立苯与环磷酰胺诱导AA大鼠模型。三周后灌胃前,按体质量随机分为模型组、康力龙组、益髓生血组、温肾生血组和滋肾生血组。第七周处死大鼠,股动脉取血,静置离心后,取上层血清,放免法检测血清中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-5、IL-10细胞因子的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清IFN-γ明显升高(P<0.05),IL-2显著升高(P<0.01),TNF-α有升高趋势,经过治疗后,IFN-γ、IL-2、TNF-α均有降低趋势;与正常组比较,模型组IL-4、IL-5水平明显降低(P<0.05),IL-10显著降低(P<0.01),经过治疗后,IL-4、IL-5、IL-10均有升高趋势。结论:补肾益髓生血法可降低AA大鼠血清细胞因子IFN-γ、IL-2、TNF-α负调控,增加细胞因子IL-4、IL-5、IL-10正调控,对AA大鼠免疫和造血系统有一定的调节作用,且滋肾生血方疗效优于益髓生血颗粒、温肾生血方。

补骨脂对初老小鼠体内雌孕激素水平作用实验研究

目的:探讨补骨脂对初老小鼠体内雌孕激素水平作用实验研究。方法:采用12月龄的初老化小鼠分成6组:初老组、倍美力组、补骨脂大剂量组、补骨脂中剂量组、补骨脂小剂量组和青年对照组。每天灌胃给药1次,七天休息一天,连续1个月。通过观察小鼠血清中E2、P、LH、FSH含量以及卵巢、子宫系数的变化,从而探讨补骨脂对初老小鼠体内雌孕激素水平的影响。结果:各组小鼠体重变化不大,倍美力组的子宫系数最高。初老组卵巢系数略高于补骨脂大剂量组和中剂量组。补骨脂中剂量组的E2含量较高,倍美力组和补骨脂小剂量组的E2值较初老组有显著意义的上升。补骨脂大剂量组小鼠血清的P含量最高。倍美力组、补骨脂中剂量组和小剂量组FSH含量均较青年组减少,并有显著差异;除初老组外,其他各组血清中LH含量均较青年组升高。初老组的FSH/LH值最大。结论:补骨脂可改善初老小鼠体内雌孕激素水平,中剂量组效果最好。

糖肾平通过TGF-β_1-Smad2/3-ILK信号通路干预高糖+LPS诱导足细胞上皮间质转分化的分子机制研究

目的:探讨糖肾平对高糖环境下脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激足细胞上皮间质转分化的影响,并探讨其作用机制。方法:以体外培养大鼠肾小球足细胞为研究对象,以高糖(25 mmol/L)、LPS(1μg/mL)刺激足细胞建立模型,分为正常组、高糖组、高糖+LPS组、厄贝沙坦组、抑制剂组、糖肾平小、中、大剂量组。采用Western blotting及RT-PCR方法检测足细胞中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad2/3、整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)、CD2相关蛋白(CD2AP)、α-平滑肌肌动蛋白(α-Smooth muscle actin,α-SMA)的表达水平。结果:与正常组比较,高糖组和高糖+LPS组足细胞TGF-β1、ILK、α-SMA蛋白及其mRNA表达明显增加(P<0.01),P-Smad2/3蛋白及Smad2/3mRNA表达明显增加(P<0.01),CD2AP蛋白及其mRNA表达明显减少(P<0.01);与高糖+LPS组比较,厄贝沙坦组足细胞P-Smad2/3、α-SMA蛋白表达明显减少(P<0.01),TGF-β1蛋白表达减少(P<0.05),TGF-β1,Smad2/3,α-SMAmRNA表达明显减少(P<0.01),ILK mRNA表达减少(P<0.05),CD2AP蛋白及其mRNA表达明显增加(P<0.01);糖肾平大、中、小各剂量组足细胞TGF-β1蛋白表达明显减少(P<0.01),糖肾平大剂量组足细胞TGF-β1mRNA表达减少(P<0.05),小、中剂量组表达明显减少(P<0.01);糖肾平小、中、大各剂量组足细胞P-Smad2/3蛋白及Smad2/3mRNA表达均明显减少(P<0.01);糖肾平小、大剂量组足细胞ILK mRNA表达减少(P<0.05),中剂量组表达明显减少(P<0.01);糖肾平大剂量组足细胞α-SMA蛋白及其mRNA表达减少(P<0.05);糖肾平小、中、大各剂量组足细胞CD2AP蛋白及其mRNA表达均明显增加(P<0.01)。结论:糖肾平能够降低足细胞TGF-β1、ILK蛋白及mRNA表达,降低P-Smad2/3蛋白及Smad2/3 mRNA表达,升高足细胞标志物CD2AP蛋白及mRNA表达,降低间充质细胞标志物α-SMA蛋白及mRNA表达,通过抑制TGF-β1-Smad2/3-ILK信号通路的激活减少足细胞转分化,保护足细胞,可能是其防治糖尿病肾病的作用机制之一。

糖肾平对高糖+LPS刺激足细胞TGF-β_1/Smad7信号转导通路影响的研究

目的:观察糖肾平胶囊对高糖环境下脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激足细胞转化生长因子-β1(trans-forming growth factor-β1,TGF-β1)/Smad7信号转导通路的影响,并探讨其作用机制。方法:以高糖、LPS刺激足细胞建立模型,分为正常组、高糖组、高糖+LPS组、厄贝沙坦组、糖肾平小、中、大剂量组和抑制剂组。采用Western-Blotting方法检测足细胞中TGF-β1、Smad7、核因子-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)的表达。结果:与正常组比,高糖组和高糖+LPS组足细胞TGF-β1、NF-κB表达明显升高(P<0.01),Smad7表达明显降低(P<0.01);抑制剂组足细胞TGF-β1、NF-κB蛋白表达比高糖组和高糖+LPS组均明显降低(P<0.01),Smad7蛋白表达明显升高(P<0.01),厄贝沙坦组TGF-β1蛋白表达比高糖组和高糖+LPS组降低(P<0.05),NF-κB蛋白表达明显降低(P<0.01),Smad7蛋白表达明显升高(P<0.01),糖肾平胶囊大、中、小剂量组足细胞中TGF-β1蛋白表达比高糖组和高糖+LPS组均降低(P<0.05),大剂量组足细胞NF-κB蛋白表达比高糖组和高糖+LPS组均明显降低(P<0.01),中、小剂量组足细胞NF-κB蛋白表达比高糖组和高糖+LPS组均降低(P<0.05),糖肾平胶囊大、小剂量组Smad7蛋白表达比高糖组和高糖+LPS组均明显升高(P<0.01)。结论:糖肾平能够降低足细胞TGF-β1、NF-κB蛋白的表达,增加Smad7蛋白表达,通过干预TGF-β1-smad7-NF-κB信号转导通路减少糖尿病肾病足细胞凋亡,可能是其防治糖尿病肾病的作用机制之一。

四物合剂对顺铂肝毒性作用的实验研究

目的:观察四物合剂对化疗药物顺铂肝毒性的作用,并对其作用机制进行探讨。方法:小鼠腹腔注射顺铂,3·0mg/kg体重/日,连续7日,并灌饲四物合剂14日,观察血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性、肝脏系数、肝匀浆中SOD、GSH-PX、GSH和MDA含量变化及肝线粒体中NADH脱氢酶复合体(复合体Ⅰ)和琥珀酸脱氢酶复合体(复合体Ⅱ)活性变化。结果:注射顺铂7日后小鼠肝脏中SOD和GSH-PX活性及GSH含量下降,MDA含量升高,同时给予四物合剂小鼠肝脏中SOD含量上升,GSH-PX活性及GSH含量、MDA含量均下降;顺铂小鼠肝线粒体中NADH脱氢酶复合体(复合体Ⅰ)活性升高,琥珀酸脱氢酶复合体(复合体Ⅱ)活性下降,四物合剂可减弱该反应。结论:顺铂模型小鼠肝组织细胞潜在抗氧化能力明显下降,四物合剂可改善此现象,其作用机制可能与升高机体内抗氧化酶活性、减少自由基生成有关。

补肾益髓生血法AA大鼠含药血清对大鼠造血干细胞红系分化JAK2/STAT5信号通路的影响

目的:探讨补肾益髓生血法再生障碍性贫血(Aplastic Anemia,AA,简称再障)大鼠含药血清对大鼠骨髓造血干细胞红系分化JAK2/STAT5信号通路的影响。方法:在前期整体动物实验的基础上,体外培养正常大鼠造血干细胞,诱导其定向红系分化,分为空白对照组、正常对照组、模型组、司坦唑醇组(康力龙组)、益髓生血组、温肾生血组和滋肾生血组,在培养体系中加入含药血清干预4d后,提取红系细胞总RNA及蛋白,分别采用RT-PCR和Western blot检测细胞JAK2、STAT5mRNA及蛋白表达情况。结果:与正常对照组相比,模型组细胞JAK2、STAT5mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.01);与模型组相比,各治疗组JAK2、STAT5mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.01或P<0.05);滋肾生血组JAK2、STAT5mRNA及蛋白表达高于益髓生血组和温肾生血组(P<0.05)。结论:补肾益髓生血法能够增强JAK2、STAT5的表达,可能通过影响JAK2/STAT5信号通路来促进红系细胞的分化成熟,其中滋肾生血法优于益髓生血法和温肾生血法。

糖肾平对糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin与CD_2AP蛋白及其mRNA表达的影响

目的:观察糖肾平对糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞裂孔隔膜蛋白分子nephrin和CD2AP表达的影响,探讨其防治DN的作用机制。方法:雄性Wistar大鼠74只,按体重随机分组为正常组10只,造模组64只。造模组大鼠腹腔一次性注射链脲佐菌素(STZ)(45 mg/kg),72 h后检测大鼠血糖和尿糖,以血糖≥16.7 mmol/L、尿糖(++++)者为DN大鼠造模成功。模型成功的大鼠按体重随机分为模型组、厄贝沙坦组、糖肾平小、大剂量组,各组分别干预14周。于第14周处死大鼠,无菌取肾,采用原位杂交和免疫组化技术观察肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin和CD2AP蛋白及其mRNA的表达水平。结果:模型组与正常组相比,nephrin和CD2AP蛋白及mRNA表达水平明显下调(P<0.01);与模型组相比,厄贝沙坦、糖肾平干预后糖尿病大鼠肾小球足细胞nephrin和CD2AP蛋白及mRNA水平表达明显增加(P<0.05)。结论:糖肾平可能通过维持足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin和CD2AP的稳定性,从而发挥对DN肾脏的保护作用。

足细胞上皮-间充质转分化的分子机制及中药干预的研究进展

上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）指上皮组织在发生局部损伤后诱发的上皮细胞向间质细胞表型的转化。近几年,EMT被认为是受损肾脏产生肌成纤维细胞的关键,可能是导致肾间质纤维化发生的最重要的机制之一。蛋白尿是肾小球滤过功能缺陷的临床表现,是大量肾小球疾病进展至终末期肾衰竭的早期标志。

四物合剂对顺铂作用小鼠血细胞的影响

目的观察四物合剂对化疗药物顺铂作用小鼠血液中几种血细胞的影响。方法小鼠腹腔注射顺铂,3.0mg/kg体重/日,连续7天,并灌饲四物合剂14天,观察红细胞、红细胞压积、血红蛋白、白细胞、淋巴细胞、血小板和血小板体积等指标变化。结果给顺铂模型小鼠灌饲四物合剂后,与模型组比较各指标均有变化:红细胞在第1天时虽有下降,但在第4天时显著升高,并高于生理盐水对照组,但于第7天时又显著降低;血红蛋白在第4天时升高,第7天降低;白细胞计数第1天最高,后回落与生理盐水组水平相近;血小板计数显示在第4天时显著下降,甚至低于顺铂模型组,第7天时又显著升高。结论四物合剂对顺铂诱导的骨髓抑制有一定的对抗作用,这种作用主要体现在血小板指标。

胶原纤维与器官纤维化

胶原纤维是组成细胞外基质的主要成分 ,在正常组织中发挥着重要作用。临床上多发的各种器官纤维化的主要病因在于胶原纤维的过度生成和降解严重不足 ,从而导致细胞外基质过度沉积。胶原纤维的装配与降解过程受严格的细胞调控 ,并有多种细胞因子参与该过程。如今 ,探索如何从不同水平人工干预胶原纤维的装配 ,从而逆转各种器官的纤维化已经成为医学及生物学研究的热点。本文综述了近年来胶原纤维与多器官纤维化方面的研究现状和取得的新观点。

大鼠ALD发生过程中血清HA、LN、C_(IV)水平及肝组织胶原表达变化的动态观察

目的 :探索酒精性肝病早期无创伤、灵敏和高效的检测方法。方法 :复制大鼠ALD模型 ,采用放免法和肝组织Mallory染色法动态检测大鼠血清中透明质酸 (HA)、层粘连蛋白 (LN)、Ⅳ型胶原 (CIV)的含量和肝组织内胶原的表达。结果 :ALD初期 ,血清中LN、CIV 和HA已呈现较高浓度 ,其中 ,HA的浓度随病程持续升高 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,LN浓度在ALD初期变化不明显 (P >0 0 5 ) ,其后随造模时间延长而呈缓慢增长的趋势 ;CIV 在ALD初期呈快速增高的趋势 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,随造模时间的延长而呈缓慢增加的趋势。病理检测 ,ALD发生一般经历酒精性脂肪肝和肝纤维化两个过程 ,酒精性肝纤维化主要病理特征是Disse间隙内胶原过度沉积 ,肝细胞内脂肪样变始终伴随ALD全过程。结论 :Ⅳ型胶原、LN和HA含量可作为ALD早期诊断的血清学指标 ,其中HA较为敏感。

健脾益肾化瘀通络方对糖尿病肾病大鼠氧化应激的影响

目的观察健脾益肾化瘀通络方对链脲佐菌素(STZ)诱导的Wistar大鼠糖尿病肾病(DN)肾脏保护作用及对氧化应激的影响。方法 74只Wistar雄性大鼠,按45 mg/kg体重给予大鼠空腹一次性腹腔注射STZ进行造模。模型成功后,按体质量随机分为正常组、模型组、厄贝沙坦组(17.5 mg/kg)、健脾益肾化瘀通络方小剂量(30.8 mg/kg)和大剂量(123.2 mg/kg)组。每4周测体质量、24 h尿蛋白定量;14周时处死大鼠,记录肾重与体重比值;检测血清甘油三酯(TG)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)浓度;进行肾组织HE、Mallory、PASMΡ-HE染色,观察肾组织病理变化并进行肾组织病理评分分析。结果与模型组比较,健脾益肾化瘀通络方不同剂量组体质量显著增加(P<0.05),肾重体重比明显降低,可以明显改善肾组织病理变化;血清TG、BUN、Scr明显改善(P<0.05),血清SOD活性升高(P<0.05),同时MDA含量减少(P<0.05)。结论健脾益肾化瘀通络方可能通过拮抗DN大鼠的氧化应激作用而对肾脏起到有效地保护作用。

四氯化碳致肝纤维化大鼠肝组织中IL-1_β及IL-1_βR的表达

目的研究四氯化碳(CC l4)所致肝纤维化大鼠肝组织中白介素-1β(IL-1β)及白介素-1β受体(IL-1βR)的表达,探讨肝纤维化的发病机理。方法CC l4所致2、4、6、8周肝纤维化模型及对照组大鼠肝苏木素-伊红染色、免疫组织化学反应,观察肝组织病理变化和IL-1β及IL-1βR的表达。结果对照组大鼠肝组织中IL-1β及IL-1βR无明显表达;2周模型组病理变化以炎症及肝细胞变性为主,肝组织细胞IL-1β及IL-1βR表达较对照组明显增强(P<0.01);4周模型组间质成分增生明显,坏死肝细胞中IL-1β及IL-1βR无明显表达,与2周模型组相比IL-1β及IL-1βR表达减少(P<0.01);6周模型组肝细胞大量坏死,中央静脉及汇管区纤维隔形成,与4周模型组相比IL-1β及IL-1βR阳性细胞明显减少(P<0.01);8周模型组肝组织形成完整的假小叶,肝组织细胞IL-1β及IL-1βR表达程度与6周模型组相似。结论肝纤维化发生、发展的不同阶段,损伤因子均能刺激肝组织细胞表达IL-1β及IL-1βR。