甘草酸单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备特异性的甘草酸(GA)单克隆抗体。方法:用合成的甘草酸-牛血清白蛋白(GA-BSA)人工抗原免疫BALB/c小鼠;待血清检测阳性后,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0按10∶1的比例融合;用间接竞争ELISA法和有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞的筛选;用阳性细胞株诱导制备腹水抗体;用辛酸硫酸铵法纯化抗体,并进行交叉反应检测。结果:获得了稳定分泌抗甘草酸的单克隆抗体杂交瘤细胞株GA-Mab-DF5,腹水抗体纯化后纯度达98%,回收率达80%。线性检测范围为4～64μg.mL-1,R2=0.9986,并且与BSA、明胶、胆酸、去氧胆酸、芍药苷、黄芩苷等无交叉反应。结论:成功获得能稳定分泌甘草酸单克隆抗体的杂交瘤细胞株,灵敏度、特异性均较高,为样品中甘草酸的快速微量检测及免疫亲和色谱柱制备奠定了基础。

人参皂苷Rh_1人工抗原的合成及免疫原性分析

目的：合成人参皂苷Rh1（GsRh1）的人工抗原,为获得其单克隆抗体奠定基础。方法：采用高碘酸钠氧化法分别合成GsRh1免疫抗原（GsRh1-BSA）和包被抗原（GsRh1-OVA）;用紫外光谱法和薄层色谱法鉴定人工抗原的合成是否成功;利用GsRh1-BSA免疫小鼠制备血清多抗;通过优化封闭液和包被原工作浓度,建立酶联免疫吸附分析法（ELISA）的最佳工作条件,并检测血清中抗体效价及特异性。结果：紫外光谱和薄层色谱法鉴定结果表明,GsRh1与BSA/OVA偶联成功,免疫后小鼠血清中产生了能特异性地与GsRh1结合的抗体,效价达到1∶32000,线性范围为10～10000 ng·mL-1,经分析确定ELISA的最佳包被浓度为1∶4000,最佳封闭液为10 mg·mL-1的明胶溶液。结论：成功合成了GsRh1人工抗原,并诱发小鼠产生了抗GsRh1的抗体,可用于下一步单克隆抗体的制备。

利用单克隆抗体特异性敲除技术解析中药药效物质基础的新方法

中药药效物质基础研究是实现中药现代化的关键问题之一。作者将小分子单克隆抗体技术引入中药药效物质基础研究,利用中药活性成分的单克隆抗体制备相应的免疫亲和色谱柱,实现从药材或复方中特异性地"敲除"该化合物,而"原样"保留其他成分在量和比例关系上不变,通过药理药效的比较研究,来明确揭示该成分与整体中药或复方功能主治的关联度。利用单克隆抗体特异性敲除技术解析中药药效物质基础,是符合中药自身特点的药效物质基础研究新方法,获得的研究结果不仅有助于从全新的角度理解物质基础,而且有助于理解中药单味药内部,或复方药味之间"配伍"的现代科学意义。