miR-216a通过下调CAPN6抑制宫颈癌细胞增殖并促进细胞凋亡的研究

目的探讨微小RNA-216a(miR-216a)对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法收集2019年5月至2021年5月于河北北方学院附属第一医院行手术治疗的82例宫颈癌患者的宫颈癌组织和癌旁正常组织,用实时荧光定量PCR(qRT-RCR)法检测组织中miR-216a和钙激活中性蛋白酶6(CAPN6)表达。转染miR-216a模拟物(miR-216a mimic)、CAPN6小干扰RNA(si-CAPN6)或共转染miR-216a mimic与CAPN6过表达质粒(pcDNA-CAPN6)至宫颈癌HeLa细胞。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测CAPN6、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)的蛋白表达情况,并进行统计分析。结果宫颈癌组织中miR-216a mRNA相对表达量明显低于癌旁正常组织(t=52.968,P<0.05),而CAPN6 mRNA和CAPN6蛋白相对表达量均明显高于癌旁正常组织(t值分别为26.622、45.036,P<0.05)。过表达miR-216a降低了HeLa细胞24、48、72h的增殖活力及Bcl-2蛋白相对表达量,提高了细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3、Bax蛋白相对表达量(F=11.885~90.813,P<0.05)。过表达miR-216a降低了HeLa细胞中CAPN6 mRNA和CAPN6蛋白相对表达量(F值分别为58.990、156.82,P<0.05)。下调CAPN6降低了HeLa细胞24、48、72h的增殖活力及Bcl-2蛋白相对表达量,提高了细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3、Bax蛋白相对表达量(F=42.390~241.912,P<0.05)。过表达CAPN6可逆转过表达miR-216a对HeLa细胞增殖、凋亡及凋亡蛋白的影响。结论miR-216a在宫颈癌组织中低表达,过表达miR-216a可抑制宫颈癌细胞增殖并促进细胞凋亡,其可能是通过靶向下调CAPN6表达发挥作用。

舒芬太尼诱导宫颈癌细胞自噬和凋亡并抑制癌细胞恶性增殖

目的探讨舒芬太尼对宫颈癌细胞SiHa自噬、凋亡及细胞增殖的影响。方法采用CCK8法检测舒芬太尼梯度浓度(3.125、6.25、12.5、25、50、100、200、400、800 nmol/L)作用下宫颈癌细胞SiHa细胞活力,选取4个舒芬太尼作用浓度(0、25、50、100 nmol/L)处理SiHa细胞24 h,采用流式细胞法、克隆形成实验检测SiHa细胞凋亡及增殖情况,免疫荧光法检测各组细胞LC3水平,采用Western印迹检测自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、ATG7与增殖、凋亡相关蛋白P21、Survivin水平,采用RT-PCR检测细胞增殖相关基因Ki67、PCNA表达水平。结果随着舒芬太尼处理浓度的增加,SiHa细胞活力逐渐降低。50、100 nmol/L舒芬太尼处理下SiHa细胞的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、ATG7水平显著高于0 nmol/L舒芬太尼处理,免疫荧光检测结果显示50、100 nmol/L舒芬太尼处理下LC3荧光信号高于0 nmol/L舒芬太尼处理,流式细胞仪检测结果显示50、100 nmol/L舒芬太尼处理下SiHa细胞凋亡高于0 nmol/L舒芬太尼处理。克隆形成实验结果显示50、100 nmol/L舒芬太尼处理下SiHa细胞克隆形成率降低,Survivin水平与Ki67、PCNA表达水平降低,而P21水平升高。结论舒芬太尼对宫颈癌细胞自噬、凋亡有促进作用,对细胞增殖有抑制作用,可能与调节细胞自噬、凋亡、增殖相关蛋白或基因水平有关。