基于JAK2/STAT3通路探讨颐脑解郁复方对体外氧糖剥夺/再复氧损伤型大鼠海马神经干细胞增殖和分化的影响

目的基于Janus激酶(Janus kinase 2,JAK)/信号转导与转录激活因子(signal transducer and activator of transcription,STAT)信号通路探讨颐脑解郁复方对氧糖剥夺/再复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)大鼠海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖和分化的影响。方法取新生大鼠海马制成细胞悬液,原代培养海马NSCs,建立OGD/R损伤模型,实验分为正常组、OGD/R模型组、颐脑解郁复方组、抑制剂组、颐脑解郁复方+抑制剂组。增殖的细胞正常组和OGD/R模型组海马NSCs无血清培养基培养,颐脑解郁复方组用NSCs含药血清培养基培养,抑制剂组用JAK2/STAT3通路抑制剂S31-201培养,颐脑解郁复方+抑制剂组用NSCs含药血清培养基和S31-201培养。分化的细胞正常组和OGD/R模型组用NSCs诱导分化培养基培养,颐脑解郁复方组用NSCs诱导分化培养基和含药血清培养,抑制剂组用NSCs诱导分化培养基和S31-201培养,颐脑解郁复方+抑制剂组用诱导分化培养基及含药血清和S31-201培养。各组细胞培养48小时后采用CCK-8法筛选颐脑解郁复方最佳浓度及检测各组海马NSCs的增殖情况,免疫荧光法检测各组海马NSCs的分化情况,RT-PCR及Western Blot法检测JAK2、STAT3基因和p-JAK2、p-STAT3蛋白的表达。结果(1)各组细胞培养48小时后细胞增殖情况:与正常组相比,OGD/R模型组细胞增殖数量明显降低(P<0.01);与OGD/R模型组相比,颐脑解郁复方组、抑制剂组、颐脑解郁复方+抑制剂组海马NSCs增殖的数量明显增多(P<0.01)。(2)各海马NSCs经诱导分化培养48小时后,与正常组相比,OGD/R模型组分化后的细胞明显减少,海马NSCs向神经元分化减少,细胞排列稀疏。与OGD/R模型组相比,颐脑解郁复方组、抑制剂组、颐脑解郁复方+抑制剂组分化后的细胞明显增多,海马NSCs向神经元分化增多,细胞密度增大,突起增多。(3)各组细胞JAK2/STAT3通路相关基因与蛋白的表达情况:与正常组相比,OGD/R模型组海马NSCs的JAK2、STAT3基因及p-JAK2、p-STAT3蛋白表达显著增多(P<0.05,P<0.01);与OGD/R模型组相比,颐脑解郁复方组、抑制剂组、颐脑解郁复方+抑制剂组海马NSCs的JAK2、STAT3基因及p-JAK2、p-STAT3蛋白表达均显著减少(P<0.01)。结论颐脑解郁复方可以促进OGD/R损伤的海马NSCs的增殖与分化,作用机制可能与抑制细胞JAK2/STAT3信号通路,降低JAK2、STAT3的基因及蛋白表达水平密切相关。

焦虑对心肌梗死大鼠血清炎症因子水平影响及双心方干预效应观察

目的探讨焦虑对心肌梗死大鼠炎症因子(NF-κB、TNF-α、IL-1β)的影响及双心方的干预效应。方法根据随机数字表法将SD大鼠分为假手术组、模型组、中药组、西药组,每组10只。除假手术组外,各组采用空瓶刺激法与前降支结扎手术建立焦虑合并心肌梗死复合模型,中药组予以双心方中药颗粒剂灌胃干预,西药组予氟哌噻吨美利曲辛片灌胃干预。超声心动图评价大鼠心功能,旷野试验评价大鼠活动能力,高架十字迷宫评价大鼠焦虑状态,外周血检测NF-κB、TNF-α、IL-1β水平。结果与假手术组相比,模型组、中药组、西药组左室射血分数均降低,中药组左室射血分数高于模型组、西药组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与假手术组相比,模型组、中药组、西药组血清NF-κB、TNF-α、IL-1β表达均增加,但中药组血清NF-κB、TNF-α、IL-1β表达低于模型组、西药组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,中药组、西药组均能改善大鼠焦虑行为。结论焦虑可影响心肌梗死大鼠炎症因子水平,而双心方干预可降低其血清TNF-α、IL-6、IL-1β表达,改善心功能,减轻焦虑行为。