基于抗炎作用的三草降压汤对自发性高血压大鼠肾脏的保护机制研究

目的观察三草降压汤对自发性高血压大鼠肾脏组织中Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)/Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信号通路表达的影响,探讨三草降压汤通过干预炎症反应治疗高血压肾损害的分子机制。方法 24只20周龄的雄性SHR大鼠,随机分为模型组、卡托普利组(30mg/kg)、三草降压汤组(10.6g/kg),另选8只同周龄的雄性WKY大鼠作为正常对照组。各组连续灌胃给药12周,分别于给药第4周、第8周和第12周检测各组大鼠血压,并于给药12周后,留取各组大鼠24小时尿液,生化法检测尿微量白蛋白(mAlb)、尿肌酐(UCRE)和尿蛋白(UP)等指标,实验结束后腹主动脉取血,取血清用生化法检测各组大鼠血肌酐(SCRE)、尿素氮(BUN)和血尿酸(UA)等肾功能指标。采用苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织病理变化,Masson染色评估肾组织纤维化程度。采用免疫组织化学法(IHC)检测Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)核转录因子-κB(NF-κB)、Nod样受体蛋白3(NLRP3)和白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白的表达。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测单核细胞趋化因子-1(MCP-1)蛋白的表达量。采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测TLR4、NF-κB和NLRP3的蛋白表达情况。结果血压及生化检测结果表明,与正常组相比,模型组的血压显著升高(P<0.01),且mAlb、UCRE、UP、SCRE、BUN和UA等含量均升高(P<0.01);与模型组相比,卡托普利组和三草降压汤组的血压明显下降(P<0.01),mAlb、UCRE、UP、SCRE、BUN和UA等含量均显著降低(P<0.01)。HE染色及Masson染色结果显示,与正常组相比,模型组大鼠肾小球重度萎缩,残余肾小球代偿性肥大,肾小球入球小动脉和小叶间动脉发生重度玻璃样变性、动脉周围重度炎性浸润,肾小球毛细血管壁增厚、管腔狭窄,系膜基质增生明显,肾小管扩张。与模型组相比,三草降压汤组和卡托普利组大鼠肾小球萎缩程度减轻,肾小管无扩张,肾小球动脉周围炎性浸润及玻璃样变性明显减轻。IHC及Western blot检测结果发现,与正常对照组相比,模型组的TLR4、MyD88、NF-κB、NLRP3和IL-1β蛋白的表达量均显著升高(P<0.01);与模型组相比,卡托普利组和三草降压汤组的TLR4、MyD88、NF-κB、NLRP3和IL-1β蛋白的表达量均显著降低(P<0.01)。ELISA检测结果表明,与正常对照组相比,模型组的MCP-1表达量显著升高(P<0.01);与模型组相比,卡托普利组和三草降压汤组的MCP-1表达量明显降低(P<0.01)。结论三草降压汤可通过调控TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路抑制肾脏炎症反应,从而发挥降压及高血压肾损害的保护作用。