中国的病毒病的研究与防治

在中国历史上,病毒病曾造成多次瘟疫流行。早在4世纪的医学书籍上已有天花和麻疹的记载。11世纪就发明了种人痘的方法。18世纪已有专门治疗麻疹的专著《麻科活人书》。1949年中华人民共和国成立后,广泛推行普种痘苗迅速控制了天花,并于1960年消灭了天花。从那时以来,与病毒病的斗争始终是防疫工作的重点。从科学研究中获得了大量关于病毒病的病原学、流行病学和防治方法的认识。本文将分三部分加以叙述:普遍发生的常见病毒病,对中国有特殊意义的病毒病和较新的病毒病。

无症状女性人群及宫颈炎患者泌尿生殖道标本的沙眼衣原体MOMP基因分布

目的了解广东省部分地区沙眼衣原体泌尿生殖道感染者的基因型分布特点。方法运用扩增沙眼衣原体外膜蛋白（ＭＯＭＰ）基因限制性内切酶片段长度多态性（ＲＦＬＰ）方法对无症状女性及宫颈炎患者泌尿生殖道标本进行了基因分型检测。结果基因Ｅ型在两组人群中分布最高，宫颈炎患者以Ｆ、Ｇ二型多见，无症状组以Ｄ型多见。结论实验结果对进一步分析常见的沙眼衣原体慢性迁延感染机理提供了实验依据。

H1N2新亚型流感病毒神经氨酸酶基因来源的进一步研究

对流感病毒Ｈ１Ｎ２亚型重组株Ａ／哈防／１／８８、Ａ／哈防／１２／９２以及Ｈ３Ｎ２亚型病毒株Ａ／雅防／２／８７、Ａ／京防／５７／８９和Ａ／粤防／１／９２神经氨酸酶（ＮＡ）基因核苷酸全序列的测定，进一步弄清了Ａ／哈防／１／８８病毒株的ＮＡ基因确来自当时人群中流行的Ｈ３Ｎ２亚型病毒株，很可能是来自Ａ／雅防／２／８７类病毒株；而Ａ／哈防／１２／９２病毒株的ＮＡ基因可能是与Ａ／哈防／１／８８病毒株的ＮＡ基因来自同一祖先。同时发现，流感病毒的ＮＡ基因在进化过程中，其分子结构相当稳定，表明其变异不仅受人群免疫压力影响较小，同时还受酶活性要求的约束；Ａ／粤防／１／９２毒株的ＮＡ基因的３＇末端非编码区少一个腺嘌呤（Ａ），指出了Ｈ３Ｎ２亚型病毒株ＮＡ基因的进化可能有２个途径。

从噬菌体抗体库筛选获得中和性人源抗甲型肝炎病毒Fab抗体

目的 研制人源抗甲型肝炎病毒基因工程抗体 ,为预防甲型肝炎病毒感染提供有效的方法。方法 采用噬菌体表面展示技术 ,从一名甲型肝炎恢复期病人的抗凝血中分离淋巴细胞 ,提取总RNA逆转录后 ,用一组人IgGFab特异性引物扩增。 结果 克隆和表达了 8株人源抗甲型肝炎病毒抗体Fab段基因 ,经ELISA检测为特异性人抗甲型肝炎病毒Fab段抗体。结论 该 8株人源抗甲型肝炎病毒Fab抗体都能与具有中和活性的鼠抗甲型肝炎病毒单克隆抗体产生竞争抑制反应 ,选其中的 2株做体外中和实验 。

丙型肝炎病毒结构蛋白在痘苗病毒中的表达

为研究中国丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的抗原性及在细胞内的加工，将丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５’非编码区（ＮＴＲ）和结构基因（Ｃｏｒｅ＋Ｅ１＋Ｅ２／ＮＳ１）插入痘苗病毒表达载体ｐＪＳＡ１１７５中，转染ＴＫ－１４３细胞，经纯化得到丙型肝炎（ＨＣＶ）重组痘苗病毒ｖＪＳＡ１１７５ＣＥ株。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交表明，ＨＣＶ结构基因存在于痘苗病毒之中。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析发现，ｖＪＳＡ１１７５ＣＥ表达蛋白带位于９０ｋＤａ，为一多聚蛋白；此蛋白为分泌型。

汉坦病毒A9株M基因片段全长cDNA克隆及其在痘苗病毒中的瞬时表达

采取反转录一聚合酶链反应（ＰＣＲ），分３个片段扩增Ｉ型汉坦病毒（野鼠型）中国毒株Ａ９株Ｍ基因片段，分别克隆入ＰＧＥＭ－Ｔ载体中。选择３个正向插入的ＴＡ９ＩＢ、ＴＡｇＣＤ、ＴＡｇＥＡ克隆，选用ＣｌａＩ、ＥｃｏＲＶ进行酶切、连接，获得了１个在ＰＧＥＭ－Ｔ载体中插入３．６ｋｂ的Ａｇ株Ｍ基因片段ｃＤＮＡ克隆，酶切图谱分析证实播入片段正确。将Ａ９Ｍ片段在痘苗病毒／Ｔ７噬菌体ＲＮＡ聚合酶瞬时（Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ）表达系统中进行表达，用抗汉坦病毒糖蛋白单克隆抗体进行免疫荧光检测，观察到很强的特异性荧光，证明ＡｇＭ基因ｃＤＮＡ能进行表达。

EB病毒潜伏膜蛋白2重组逆转录病毒的构建及表达

目的 寻找在真核细胞中表达Epstein Barr(EB)病毒潜伏膜蛋白 2 (Latentmembraneprotein 2 ,LMP2 )的有效途径 ,研究LMP2蛋白功能及深入探讨其在诱导细胞免疫应答中的作用。方法 将EB病毒LMP2蛋白的基因重组至逆转录病毒载体LXSN上 ,通过脂质体将重组质粒导入PT6 7细胞 ,G418筛选抗性克隆 ,收集含重组病毒的上清 ,将其感染小鼠成纤维细胞NIH 3T3 ,测定病毒滴度 ,提取转染细胞DNA进行PCR鉴定 ,间接免疫荧光法检测外源基因在感染病毒的NIH 3T3中的表达。结果 培养上清的病毒滴度为 5 .8× 10 5 PFU ml,聚合酶链反应 (PCR)结果证实 ,转染细胞的DNA中含有目的基因的特异性片段。免疫荧光结果表明EBV LMP2基因在小鼠成纤维细胞中获得表达。

双链DNA病毒通过编码Virokine和Viroceptor抑制补体系统机理的探讨

双链ＤＮＡ病毒通过编码Ｖｉｒｏｋｉｎｅ和Ｖｉｒｏｃｅｐｔｏｒ抑制补体系统机理的探讨李虹，金奇目前的研究已清楚地表明，双链ＤＮＡ病毒能够在生物体系中生存、传播并引起持续或潜伏感染，是由于它们在长期的进化过程中发展了一套逃避、干扰、抑制、和对抗宿主免疫系...

近来我国马群中呼吸道疾病流行的病因学研究

通过病因学，血清学和流行病学研究，弄清了近期我国马群中类流感疾病流行的病因为马２（Ｈ３Ｎ８）亚型流感病毒。采用多克隆和单克隆抗体对分离物进行抗原性分析，结果提示，从我国马群中分离到的流感病毒株是马２（Ｈ３Ｎ８）亚型流感病毒，它绝然不同于过去我们发现的禽的Ｈ３Ｎ８流感病毒。估计它是近期内从国外马群传入我国。

猪型流感病毒血凝素基因的核苷酸全序列分析

对我国大陆首次从猪群中分离到的猪型（Ｈ１Ｎ１）流感病毒血凝素（ＨＡ）基因核苷酸全序列进行了测定，其长度为１７７８ｂｐ，共编码５６６个氨基酸，其中信号区１７个，ＨＡ１区３２６个，多肽连接区１个，ＨＡ２区２２２个。与Ａ／ＮＪ／１１／７６（Ｈ１Ｎ１）毒株ＨＡ蛋白分子上氨基酸序列相比，其同源性为９４．５％，而ＨＡ１和ＨＡ２区的同源性分别为９３．６％和９７．７％。同时在ＨＡ１区的第２７６个位点上多１个糖基化点，然而其余的包括２个重叠的糖基化点均相同。

4型腺病毒载体的构建和β－半乳糖苷酶基因的表达

以４型腺病毒疫苗株感染Ａ５４９细胞，提取病毒ＤＮＡ，将ＥｃｏＲＩ消化的Ｄ片段（７０．５－８３．０基因图谱单位）克隆入ｐＵＣ１８质粒，得ｐＡｄ４（７０．５－８３）质粒，质粒ｐＡｄ４（７０．５－８３）和ｐＡｄ４Ｃ１－２５经酶切、系列亚克隆、加接头等方法得到大部分和部分缺失Ｅ３区的重组质粒。聚合酶链反应（ＰＣＲ）法获得ｐｏｌｙ（Ａ），构建约８００ｂＰ腺病毒晚期表达盒，在所构建的腺病毒重组质粒Ｅ３缺失区或Ｅ４与ＩＴＲ间插入表达盒，得到可同时表达２个或２个以上外源基因和保留了Ｅ３区编码分子量为１９３００糖蛋白基因的３种Ａｄ４载体。将ｌａｃＺ基因插入载体表达区，与Ｂｅｌｌ消化的Ａｄ４ＤＮＡＡ片段共转染Ａ５４９细胞，ＯＮＰＧ法检测证实所构建的载体和表达盒功能良好。本项工作对于在国内研究口服活疫苗及开展基因治疗均具有重要意义。

人胚甲状旁腺细胞移植治疗甲状旁腺功能低下症

目的 探讨人胚甲状旁腺细胞移植治疗甲状旁腺功能减退症的临床意义。 方法 将培养的人胚甲状旁腺细胞在B超引导下移植到 6例甲状旁腺功能减退症患者的肾周围脂脂囊中。应用放射免疫方法测定患者术前、术后血中甲状旁腺激素 (PTH)及钙水平 ,并进行自身对照 ,对疗效进行评价。 结果 6例患者在接受人胚甲状旁腺细胞移植前 ,血钙及PTH平均水平分别为 (1 6 3±0 12 )mmol/L及 (1 36± 0 2 1)ng/L ;接受移植 3d后分别为 (1 77± 0 2 2 )mmol/L及 (9 5 3± 2 2 1)ng/L ,两者差异有显著性意义 (P <0 0 1) ;6d后达正常水平 ,临床症状逐渐减轻至消失 ;术后观察 9～ 12个月病情保持稳定。

融合蛋白Epo-Tpo(C)的表达及初步活性检测

目的 进一步研究促血小板生成素Tpo的功能 ,探讨新型Epo的可能性。 方法 构建了融合蛋白Epo Tpo(C)的真核表达载体 ,在CHO细胞中表达融合蛋白 ,染料亲合柱Blue SepharoseCL 6B初步纯化 ,网织红细胞计数法体内测活并测定了体内半衰期和融合蛋白对大鼠肾衰模型的疗效。结果 初步纯化的融合蛋白体内活性比ELISA结果高 2 0 % ,半衰期为 12h ,比标准Epo长近5 0 % ,对大鼠肾衰模型有良好的疗效。结论 Tpo富糖基化的C端结构域能显著延长Epo的半衰期 ,融合蛋白Epo Tpo(C)

人朊蛋白基因外显子Ⅰ及其上游序列具有启动子样活性

目的 鉴定朊蛋白 (PrP)基因转录启动子位置。方法 利用聚合酶链反应 (PCR)扩增人PrP基因外显子Ⅰ及其上游序列 ,序列鉴定后插入CAT报道质粒pBL CAT6 ,分别转染HeLa、COS7和Sh sy5y细胞系 ,检测CAT表达值 ;提取三种细胞蛋白 ,以条带移动实验检测细胞转录激活因子SP1含量。结果 人PrP基因外显子Ⅰ及其上游序列为GC富含 ,带有多个SP1可能性结合位点 ,但无明显TATA盒 ;瞬时转染结果显示这段序列可诱导 2～ 3倍的CAT表达增强 ;定量移动条带实验证明HeLa细胞中含有较高浓度的SP1,而COS7和Sh sy5 y细胞中SP1含量极低。结论 人PrP基因外显子Ⅰ及其上游序列具有启动子样功能 ,为弱的非TATA盒启动子 ;不同组织来源的细胞中SP1含量不同 ,在神经细胞系Sh

Coltivirus新成员的分离和鉴定

１９９１年，在甘肃和北京地区采集蚊子，从中分离到１０株病毒，该类病毒在Ｃ６／３６，ＢＨＫ－２１及Ｖｅｒｏ细胞上可出现病变，使乳鼠发病、致死，抵抗乙醚和５－溴脱氧尿苷，电镜观察为球形、无包膜，直径约６２．７±３．１３ｎｍ。ＰＡＧＥ示该类病毒ＲＮＡ为１２节段，分为４个不同的电泳带型，均与云南分离株不同。交互中和试验和交互补体结合试验表明，中国分离株之间抗原性有变异。中国分离株与Ｃｏｌｔｉｖｉｒｕｓ属已知成员科罗拉多蜱热病毒、加利福尼亚分离株Ｓ６－１４－０３及德国分离株Ｅｙａｃｈ有血清学交叉反应（１：４～１：８），但血清型明显不同，因而，中国分离株当属Ｃｏｌｔｉｖｉｒｕｓ属的新的成员。